蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe3+还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

福建养殖仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺优化及其对过氧化氢诱导的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用

目的:优化仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺,并研究其对过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导的人脐静脉内皮细胞株EA.hy926损伤的保护效应。方法:以酶解产物的水解度、体外DPPH自由基清除率为指标,筛选出最适蛋白酶;在单因素实验基础上,选取温度、加酶量、pH作为影响因子,以体外DPPH自由基清除率为响应值,结合响应面试验优化酶解工艺条件;进一步探讨酶解多肽体外抗氧化活性。以MTS法检测低、中、高剂量组的仿刺参抗氧化多肽对H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,以MDA含量、SOD活力测定细胞氧化及抗氧化水平。结果:动物蛋白水解酶为最适蛋白酶,酶解工艺优化条件为:料液比1:20 g/mL、酶解时间2 h、酶解温度50℃、加酶量7000 U/g、pH7.5,该条件下制备的仿刺参多肽体外DPPH自由基清除率为68.81%,与模型预测值(68.35%),相对误差为1%,回归模型可靠。酶解多肽对DPPH自由基、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂-·)和ABTS自由基(ABTS+·)的半数抑制浓度IC₅₀分别是9.01、0.63、10.89和20.53 mg/mL,说明其具有较好的体外抗氧化活性。选取200 μmol/L浓度H₂O₂建立细胞损伤模型,与H₂O₂组相比,中、高剂量组仿刺参抗氧化多肽能明显抑制H₂O₂诱导的血管内皮细胞氧化损伤,降低MDA含量,提高SOD活力。结论:采用动物蛋白水解酶酶解优化工艺制备的仿刺参抗氧化多肽对人脐静脉内皮细胞EA.hy926具有显著的保护作用并呈显著的剂量-效应关系。     

响应面法优化鹿骨多肽酶解工艺及其体外抗氧化活性

目的:筛选鹿骨蛋白最适提取温度和最佳酶解工艺并检测其抗氧化活性。方法:根据鹿骨蛋白的蛋白浓度筛选出最适提取温度,根据水解度（DH）通过单因素及响应面实验设计筛选鹿骨多肽的最佳酶解工艺,并通过测定鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基的清除能力来评价鹿骨多肽的抗氧化活性。结果:最佳提取温度为95 ℃,通过响应面法优化及实际验证确定了胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解工艺分别为胃蛋白酶酶用量6200 U/g,温度37.3 ℃,pH2.0,时间3.2 h,此时的水解度为11.23%;胰蛋白酶酶用量6300 U/g,温度37.2 ℃,pH8.1,时间4.0 h,此时的水解度为23.09%。鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有清除能力,其IC₅₀值分别为:3.72、2.24 mg/mL。结论:本实验得到了鹿骨蛋白最佳提取温度并确定鹿骨多肽最佳酶解工艺,且鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有良好的清除能力,说明鹿骨多肽具有良好的抗氧化活性。     

啤酒糟醇溶蛋白酶法水解及水解产物的抗氧化研究

用碱性蛋白酶(Alcalase)对啤酒糟醇溶蛋白进行水解,并使用正交试验设计以水解度为指标对酶法水解进行了优化。结果表明,啤酒糟醇溶蛋白的酶解最优条件为底物浓度2%,酶解温度60℃,pH9.5,酶浓度(E/S)0.096 AU/g,酶解时间3h。以DPPH自由基清除率和羟自由基清除率为指标,用抗坏血酸做对照,对酶解产物的抗氧化活性进行了分析。分别得到了两种自由基清除的最优酶解条件。啤酒糟醇溶蛋白酶解产物对不同自由基的最佳清除作用的水解条件不一致,可能与所产生的多肽对几种自由基的清除机理有关。     

鲬鱼肉酶解物抗氧化活性的研究

深度开发利用鲬鱼蛋白,以羟自由基清除率为指标,从碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出碱性蛋白酶为其水解酶。采用单因素试验及响应面分析法对碱性蛋白酶的水解条件进行优化,得到最佳酶解条件为:加酶量3 000 U/g蛋白、pH 9.0、温度40℃、时间180 min、固液比1∶30(g/mL),清除率为89.49%。酶解物清除羟自由基的IC_(50)值为0.58 mg/mL,表明鲬鱼酶解物是具有良好的抗氧化作用的天然抗氧化剂。     

水解方式对黄茧蚕丝多肽抗氧化活性的影响

以DPPH自由基清除率为指标,研究了天然黄茧家蚕品种"金丝一号"茧丝在盐水解、碱水解、酶水解3种不同提取条件下所获蛋白多肽的抗氧化功能活性差异。结果表明:盐水解法时,在40%CaCl_2溶液、100℃、料液比为1∶20(g/mL)的提取条件下,蚕丝蛋白多肽DPPH自由基清除率平均为43.15%;碱水解法时,在4 mol/L NaOH溶液、100℃的条件下提取1 h,DPPH自由基清除率平均为45.62%。酶水解法时,加入1 000 U/g碱性蛋白酶,55℃处理4 h,蚕丝蛋白多肽DPPH自由基清除率平均为62.26%。天然黄茧蚕丝蛋白酶法水解物的抗氧化活性优于盐水解法和碱水解法。     

棉籽多肽的制备及其自由基清除能力研究

以碱溶酸沉法提取的棉籽蛋白为原料,分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对其进行水解,比较4种蛋白酶水解棉籽蛋白的水解度及棉籽多肽自由基清除能力。结果表明:中性蛋白酶水解所得棉籽多肽自由基清除能力较强。在单因素试验基础上,采用正交优化试验,得到中性蛋白酶水解制备棉籽多肽最佳条件为:水解时间5 h,水解温度45℃,pH 7.5,加酶量8 000U(100 mL 5%棉籽蛋白溶液)。在最佳条件下棉籽蛋白的水解度为11.23%,制备的棉籽多肽对超氧阴离子自由基清除率为72.48%,对羟自由基清除率为89.01%,其10倍稀释液对DPPH自由基清除率为84.67%,与0.5 mg/mL VC的自由基清除能力相当。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

响应面法优化软枣猕猴桃蛋白水解及多肽的抗氧化研究

以酶解产物清除羟基自由基能力为指标,选用碱性蛋白酶为水解酶,利用响应曲面法优化软枣猕猴桃蛋白最佳酶解工艺条件并制取抗氧化肽。考察其水解度和清除率的相关性。结果表明：碱性蛋白酶最佳酶解工艺为温度50℃、pH9、加酶量4000U/g、酶解时间3h,此时水解度达到最大值为25.08%。在此条件下将软枣猕猴桃蛋白分别水解1、2、3、4、5h得到肽混合物进行抗氧化活性分析,得到其对羟自由基清除率分别为18.69%、24.67%、28.04%、25.82%、26.65%。当酶解时间为3h时,此时抗氧化肽的羟自由基清除率最高。     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

羊骨多肽酶法制备工艺优化及抗氧化活性研究

以羊骨粉为原料,用碱性蛋白酶进行酶解制备具有抗氧化活性的酶解多肽液。以水解度为指标,优化了羊骨多肽酶法制备工艺条件,并对酶解液的抗氧化能力进行了测定。结果表明,碱性蛋白酶制备羊骨多肽的最佳制备工艺条件为酶解时间5 h,酶解温度45 ℃,加酶量8 200 U/g,酶解pH值10,该条件下羊骨粉的水解度为(28.36±0.02)%。羊骨粉酶解液与对照组(未被碱性蛋白酶酶解的羊骨粉溶液)的抗氧化能力均随着溶液浓度的增加而上升,当酶解液浓度达到2.5 mg/mL时对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除率和还原力均达最大值,分别为(65.42±0.11)%,(82.30±0.27)%,(79.83±0.22)%,0.484±0.007,显著高于对照组(P＜0.05)。说明碱性蛋白酶水解羊骨粉得到的酶解多肽液具有体外抗氧化活性。     

不同品种苦荞蛋白的复合酶解及其多肽抗氧化活性

为研究不同苦荞多肽的抗氧化活性,开发相关产品,提高苦荞的附加值。该试验通过碱提酸沉酶辅助的方法提取苦荞蛋白质,再经由胰蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶水解苦荞蛋白,利用响应面优化得到两种酶复合的最佳酶解条件为蛋白浓度5 mg/mL、酶添加量0.1%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶质量比1∶3、酶解pH7.5、酶解温度55℃、酶解时间3 h。对复合酶解多肽产物进行抗氧化活性测定,结果表明,川荞1号和云苦3号的超氧阴离子自由基清除率较高,分别为97.23%、96.45%;而川荞1号和米荞对ABTS+自由基和DPPH自由基均表现出较高的清除能力。对ABTS+自由基清除能力分别为51.54%和54.41%;对DPPH自由基的清除能力分别为87.35%和84.91%。迪苦2号和川荞1号对羟基自由基清除率较高,分别为90.47%、91.32%。     

椰肉蛋白酶解及其产物的抗氧化活性研究

将新鲜椰肉粉碎脱脂,利用碱溶酸沉法制备椰肉蛋白。用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、Papain木瓜蛋白酶酶解椰肉蛋白,以DPPH自由基清除能力和水解度为指标对酶解过程进行分析,筛选出最适合制备抗氧化酶解物的酶为Alcalase碱性蛋白酶。然后采用单因素及多指标正交实验设计优化Alcalase碱性蛋白酶酶解条件,其中酶解温度和底物浓度对DPPH自由基清除率影响最大。优化后的制备参数为:酶解温度50℃,pH值10.5,加酶量14000 U/g,酶解时间7 h,底物浓度2%,该条件下水解液中蛋白含量为15.8 mg/mL,水解度和DPPH.清除率分别为29.16%和89.07%,椰肉蛋白酶解物显示出较强的抗氧化活性,接近同一浓度下谷胱甘肽的抗氧能力,比同浓度Vc的DPPH自由基清除率高3.33倍。     

核桃多肽体外抗氧化活性研究

以提取油脂后的核桃渣为原料分离出核桃蛋白,利用酸性、碱性、中性3种蛋白酶复合酶解核桃蛋白,制备水解度高的核桃多肽。通过测定核桃多肽的总还原能力、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)清除能力,研究核桃多肽的抗氧化活性大小。结果表明,3种酶协同对核桃蛋白进行水解,水解度可达到45.58%,核桃多肽有一定的体外抗氧化活性,其总还原能力、对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率与质量浓度呈量效关系。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

酶解法制备草鱼鱼鳞多肽及其清除羟自由基的研究

采用复合蛋白酶酶解草鱼鱼鳞制备多肽并研究其清除羟自由基能力,考察酶解条件对多肽清除羟自由基的影响,通过单因素试验和响应面试验优化得到清除羟自由基的多肽酶解工艺条件为：底物质量浓度为6g/100mL,酶解时间2.11h,加酶量为5.22g/100mL,酶解温度49.33℃,最高清除率为99.24%。层析分离的结果有5 个洗脱峰,第4 个峰的羟自由基清除率最高,达到98.34%。     

牡蛎多肽的酶解工艺及抗氧化活性与相对分子质量分布研究

目的:以牡蛎干肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解法制备牡蛎多肽,研究牡蛎多肽酶解工艺、抗氧化活性和相对分子质量分布。方法:以多肽含量为指标,运用单因素及正交试验优化牡蛎最佳酶解工艺;以1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH·)和羟自由基(·OH)的清除能力为指标,通过与Vc的对照试验研究牡蛎多肽的抗氧化活性;采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)研究牡蛎多肽的相对分子质量分布。结果:牡蛎的最佳酶解条件为,料水比为1:18、pH值为10.0、温度为55 ℃、加酶量为800 U/g、酶解时间为3 h。在最佳酶解工艺条件下制得的牡蛎多肽,其相对分子质量范围为484～19582 u,多肽得率为46.27%。抗氧化性研究中,Vc在浓度为0.4 mg/mL时,对羟自由基的清除率为88.16%,在其浓度为0.004 mg/mL时,对DPPH·的清除率为76.95%。牡蛎多肽浓度为3 mg/mL时,对羟自由基的清除率为73.89%,在其浓度为5 mg/mL,对DPPH·的清除率为97.81%。结论:所确立的碱性蛋白酶最佳酶解工艺能较好地酶解牡蛎中的蛋白质,使其转化为具有良好的抗氧化活性小分子多肽。     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

大豆蛋白的酶解及其抗氧化活性研究

研究了大豆分离蛋白的酶解条件及其产物的抗氧化活性,分析了酶解过程中蛋白水解度(DH)、TCA-NSI变化.结果表明,碱性蛋白酶用于制备大豆蛋白抗氧化肽具有明显的优势,正交试验优化酶解条件下得到的酶解物羟自由基清除率可达53.43%,清除活性的IC50为1.708 mg/mL,Fe2+螯合率为80.13%,螯合活性的IC50为0.822 mg/mL.酶解物的羟自由基清除活性、Fe2+螯合能力与DH、TCA-NSI之间并不呈线性关系.