刺参精子冷冻保存方法研究

为获得适宜的刺参Apostichopus japonicus精子冷冻保存技术,综合借鉴现有水产动物精子冷冻保存方法,对刺参精子降温方式、冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度进行了筛选,在筛选出适宜的刺参精子降温方式基础上,分别以煮沸消毒海水和超纯水为溶剂,加入葡萄糖、NaCl、KCl、海藻糖、无水CaCl_2和冷冻保存剂[二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)或1,2-丙二醇(1,2-G)]配制冷冻保存剂终体积分数为5%、10%和15%的冷冻保存液(Aj-1～Aj-27),以体积比为1∶1、1∶2和1∶3的比例混合精子与冷冻保存液进行冷冻保存,冷冻48 h后分别在37℃和30℃水浴条件下进行精子复苏,以精子活率、快速运动时间和精子寿命为指标,综合筛选冷冻保存刺参精子的适宜冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度。结果表明:将刺参精子与以超纯水为溶剂配制的Aj-20精子冷冻保存液(12 g/L葡萄糖、7 g/L NaCl、0.7 g/L KCl、5 g/L海藻糖、0.1 g/L无水CaCl_2和终体积分数为10%的DMSO)以体积比为1∶2的比例混合,以三步法降温方式冷冻保存,并在30℃水浴短时迅速复苏,该技术方法为本研究筛选到的最优刺参精子冷冻保存方法;与本研究中其他冷冻技术方法相比,应用该优选方法冷冻保存的刺参精子在复苏后精子活率最大(19.00±4.00)%、快速运动时间最长(1 178.67 s±14.57 s)、寿命最久(2 817.33 s±93.76 s);应用该优选方法冷冻保存72、120、408 h的精子复苏后受精率可达70%以上(精子与卵子数量比为1×10⁶∶1),受精的卵囊孵化率可达到50%。研究表明,本研究中筛选获得的冷冻保存液配方及其冷冻保存方法比较适宜刺参精子的长期冷冻保存,具有应用于生产实践的潜力。     

中间球海胆精子超低温冷冻保存方法的研究

对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子的超低温保存技术进行了研究。以煮沸消毒海水为基础液,添加体积分数为10%的DMSO、体积分数为6%的甘油以及25 mmol/L海藻糖配制成冷冻保护液,与鲜精液按体积比以1∶1混合,在4℃下平衡15 min,于液氮面上方15、3 cm处分别停留3 min和5 min,然后浸入液氮保存。结果表明:用此方法保存的精子解冻后其存活率可达58.2%,受精率达24.7%;解冻后精子受精时,在受精海水中分别添加0、28、56、112、280 mmol/L的葡萄糖,56 mmol/L组的受精率高于其他组,受精率达26%;精子解冻后受精时,在受精海水中添加适量葡萄糖有助于提高受精率。本试验表明,冷冻过程中降温方式、冷冻保护液、平衡时间对精子的冷冻保存效果均有较大影响,各个因素通过优化组合可以大大提高解冻后精子的存活率和受精率。     

Na~+、K~+、Ca~(2+)、葡萄糖、pH、温度对北方须鳅精子活力的影响

为了解北方须鳅Barbatula barbatula nuda精子的生理特性,研究了不同离子浓度、葡萄糖浓度、pH、温度等因子的变化对性成熟北方须鳅(体质量为10～38 g)精子活力的影响。结果表明:Na⁺浓度为68 mmol/L时,北方须鳅精子活力最强,快速运动时间(FT)、寿命(LT)、激活率分别为(77±23)s、(495±154)s、95%;K+浓度为68 mmol/L时,北方须鳅精子活力最强,快速运动时间(FT)、寿命(LT)、激活率分别为(77±23)s、(495±154)s、95%;K⁺浓度为80 mmol/L时,精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(68±10)s、(412±162)s和95%;Ca+浓度为80 mmol/L时,精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(68±10)s、(412±162)s和95%;Ca⁽²⁺⁾浓度为50 mmol/L时,精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(77±13)s、(281±26)s和95%;葡萄糖浓度为180 mmol/L时,北方须鳅精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(88±11)s、(272±34)s和90%;在Tris或甘油溶液中,FT、LT和激活率均小于对照组;pH为3.0～5.0时精子不运动,pH为7.0时精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(87±11)s、(128±17)s、90%;温度为5～20℃时,精子活力变化不显著;混合激活液A(Na(2+)浓度为50 mmol/L时,精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(77±13)s、(281±26)s和95%;葡萄糖浓度为180 mmol/L时,北方须鳅精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(88±11)s、(272±34)s和90%;在Tris或甘油溶液中,FT、LT和激活率均小于对照组;pH为3.0～5.0时精子不运动,pH为7.0时精子活力最强,FT、LT和激活率分别为(87±11)s、(128±17)s、90%;温度为5～20℃时,精子活力变化不显著;混合激活液A(Na⁺ 68 mmol/L、K+ 68 mmol/L、K⁺ 80 mmol/L 2种离子溶液的体积比为1∶1)及激活液B(Na+ 80 mmol/L 2种离子溶液的体积比为1∶1)及激活液B(Na⁺68 mmol/L、K+68 mmol/L、K⁺ 80 mmol/L、Ca+ 80 mmol/L、Ca⁽²⁺⁾ 50 mmol/L、葡萄糖180 mmol/L 4种离子溶液的体积比为1∶1∶1∶1)皆能提高精子活力,其FT、LT、精子激活率分别为(91±16)s、(552±90)s、95%,以及(112±17)s、(707±60)s、95%。研究表明,北方须鳅精子适宜的温度为5～20℃,适宜pH为7.0～8.0,Na(2+) 50 mmol/L、葡萄糖180 mmol/L 4种离子溶液的体积比为1∶1∶1∶1)皆能提高精子活力,其FT、LT、精子激活率分别为(91±16)s、(552±90)s、95%,以及(112±17)s、(707±60)s、95%。研究表明,北方须鳅精子适宜的温度为5～20℃,适宜pH为7.0～8.0,Na⁺、K+、K⁺、Ca+、Ca⁽²⁺⁾、葡萄糖对北方须鳅精子活力有增强效果,混合激活液B(Na(2+)、葡萄糖对北方须鳅精子活力有增强效果,混合激活液B(Na⁺ 68 mmol/L、K+ 68 mmol/L、K⁺ 80 mmol/L、Ca+ 80 mmol/L、Ca⁽²⁺⁾50 mmol/L、葡萄糖180 mmol/L 4种离子溶液的体积比为1∶1∶1∶1)效果最佳。     

不同藻类与混养比例对刺参与马粪海胆生长、体成分和消化酶活性的影响

为研究不同藻类、刺参Apostichopus japonicus与马粪海胆Hemicentrotus pulcherrimus混养比例对刺参与马粪海胆生长、体成分和消化酶活性的影响,在水温9.5～16.5℃下,将体质量为(0.38±0.15) g的马粪海胆与体质量为(1.24±0.17) g的刺参混养于幼参育苗车间白色塑料箱(30 cm×40 cm×50 cm)中,各组刺参的初始放养质量为20 g,再按照胆参质量比3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3投放马粪海胆,各组分别投喂新鲜黏膜藻Leathesia difformis(H组,H1～H5)或孔石莼Ulva pertusa(L组,L1～L5)各20 g,对照组(D组)仅投喂配合饲料20 g。结果表明:藻类种类和胆参混养比例对刺参增重率(WGR)及特定生长率(SGR)有显著性影响(P<0.05),黏膜藻组在胆参比为3∶1时,刺参特定生长率最高(0.94%/d);孔石莼组在胆参比为2∶1时,刺参SGR最高(1.36%/d);不同藻类和胆参混养比例对海胆生长有显著性影响(P<0.05),海胆的SGR均随胆参混养比例的减小而递增,在同一混养比例下,L组海胆SGR显著高于H组(P<0.05);刺参肠道的胰蛋白酶(TRY)、淀粉酶(AMS)活性随胆参混养比例的降低呈递减趋势,其中,L1和L2组两组间无显著性差异(P>0.05),但均显著高于其他各组(P<0.05);相同混养比例下,L组胰蛋白酶和淀粉酶活性高于H组(P<0.05);而脂肪酶(LPS)活性仅受胆参混养比例的影响,且随胆参混养比例的降低而递减;胆参混养比例对H组、L组刺参体壁水分、粗脂肪含量均无显著性影响(P>0.05),粗蛋白质含量随胆参混养比例的减小呈先增加后降低趋势,其中L3组最高(39.10%),且显著高于其他各试验组(P<0.05)。研究表明,以孔石莼为饵料时,胆参适宜混养比例为2∶1,而以黏膜藻为饵料时,则为3∶1,研究结果可为构建综合养殖模式及防控刺参池塘大型藻类暴发性增殖提供数据支持。     

几种微生态制剂对刺参幼参生长、存活和消化酶活性的影响

以体质量(2.00±0.52)g的刺参Apostichopus japonicus幼参为研究对象,定期将光合细菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌、海洋红酵母4种微生态制剂及其四者的复合微生态制剂(按照终浓度比为4∶1∶4∶1的比例)添加到刺参幼参培育水体中,探讨其对刺参幼参生长、存活率和消化酶活性的影响。结果表明:养殖水体中添加不同的微生态制剂对刺参幼参的生长和存活有一定的促进作用,其中增重率和特定生长率最高出现在复合微生态制剂组,分别达到(125.97±8.26)%和(1.66±0.06)%/d,与对照组有显著性差异(P<0.05);添加微生态制剂能够显著提高刺参幼参的消化酶活性,尤其是添加将4种菌剂按适当比例复合的微生态制剂后,刺参幼参的消化酶活性与其他微生态制剂组相比有显著性差异(P<0.05)。研究表明,将4种有益菌按照一定比例复合后投放到幼参培育水体中相对于单个菌投放更能显著提高幼参消化酶的活性。     

取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏效果的影响

目的:探讨取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏率的影响,规范精液标本冷冻技术操作,进一步提高冻存标本的复苏率。方法:选取2015年3月在门诊行精液分析的30例参数正常精液标本,同一例精液一式3份,分别在精液取出后15、30 min及60 min后行精液冻存,即按所有样本按孵育时间的不同分为A(15 min)、B(30 min)、C(60 min)三组,每组30例。分析三组标本冷冻前后前向运动(PR)精子数、存活率及精子畸形率,比较各组精子的冷冻复苏率。结果:A组的PR精子冷冻复苏率(55.35±13.94)%及B组的(51.55±15.94)%均高于C组的(38.13±14.24)%,比较差异均有统计学意义(P<0.05);而A组与B组PR精子冷冻复苏率比较差异无统计学意义(P>0.05),但A组略高。三组精子存活率及正常形态精子百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:精子取出后应尽快完成冷冻,有助于提高精子冷冻复苏效果。     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05),GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

响应面优化南极磷虾虾青素的复合酶法提取工艺研究

为加大对南极磷虾Euphausia superba高附加值产品的开发,提高南极磷虾资源的综合利用率,以冷冻南极磷虾为原料,采用Alcalase碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶解方法,以无水乙醇为提取剂提取虾青素,在单因素试验的基础上,以虾青素提取率为响应值,利用响应面优化设计,研究了虾青素的最佳提取工艺条件。结果表明:通过单因素试验筛选出酶底比、酶解时间和酶解温度为影响虾青素提取率的主要因素,优化得出最佳工艺条件为酶底比1.6%(Alcalase碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶比例为3∶2)、酶解时间2.1h、酶解温度51℃、水料比(m L∶g)4∶1、无水乙醇料液比(g∶m L)1∶4、振荡时间10 min,在此优化条件下虾青素提取率为90.42%±0.39%,与模型理论值接近。研究表明,采用双酶复合酶解法能显著提高南极磷虾虾青素的提取效率,可为南极磷虾虾青素的制备提供技术支持。     

用螺旋藻替代鱼粉对仿刺参生长及其体组成的影响

研究了在配合饲料中用螺旋藻Spirulinameal替代不同比例(0%、25%、50%、75%、100%)的鱼粉对仿刺参Apostichopus japonicus生长及其营养组成的影响。每组设3个平行,仿刺参初始体重为(3.40±0.15)g,投喂期为28 d。饲养结果表明,各组仿刺参的成活率较高(98.33%¹00%),组间没有显著差异(P>0.05)。饲料中用螺旋藻替代鱼粉的量为25%时,仿刺参的增重率和特定生长率最大,显著高于其他各组(P<0.05);用螺旋藻替代鱼粉的量超过25%时,仿刺参的增重率和特定生长率与全鱼粉组没有显著差异(P>0.05)。饲料中用螺旋藻替代鱼粉的量对仿刺参壁体比及全参营养组成(蛋白质、脂肪、水分和灰分)没有显著影响(P>0.05)。以上结果表明:仿刺参对植物蛋白源螺旋藻具有较好的利用率,但从仿刺参的生长效果来看,建议鱼粉和螺旋藻按3∶1的比例搭配为好。     

以氧化三甲胺作为细胞冻存保护剂的研究

为了开发1种新型高效无毒的超低温冻存保护剂,解决当前保护剂存在细胞毒性等瓶颈问题,以天然渗透压调节剂氧化三甲胺(TMAO)作为超低温冻存保护剂,采用超速冷冻方法对2种模型细胞—人肺癌细胞(GLC-82)、人宫颈癌细胞(Hela)进行超低温保存。对不同浓度TMAO水溶液进行差示扫描量热测试(DSC),结果表明,TMAO可以显著降低水溶液的冰点,抑制冰晶生成,有利于保护细胞免受冰晶损伤;细胞毒性测试结果表明,细胞在添加质量浓度为0.01kg/L TMAO的细胞培养液中浸泡3d后,未观察到细胞受到毒性损伤;细胞冻存测试结果表明,当培养基中TMAO的质量浓度为0.06kg/L时,冻存效果最优,GLC-82细胞与Hela细胞的复苏成活率分别达到64%和41%;细胞冻存优化试验结果表明,在0.06kg/L TMAO冻存保护液中加入质量浓度为0.02kg/L的海藻糖后,细胞复苏成活率提高了20%。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础。不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系。无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化。文章综述了几种有效能评价体系的测定技术。     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。