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1.
目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽,并考察其ACE抑制率。结果 最佳酶解工艺条件为:pH 8.4、底物浓度18%、温度55℃、酶底比2.0%、碱性蛋白酶酶解3 h,酶解液的蛋白提取率为(19.54±0.56)%、ACE抑制率为(91.12±0.17)%;将酶解液分别通过10、5、1 kDa超滤膜,利用ACE抑制率来验证降血压活性, 1 kDa超滤膜的酶解液ACE活性最高,达到(71.37±0.22)%。结论 龙须菜可作为分离纯化制备龙须菜降血压肽的优质资源。 相似文献
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以螺旋藻为原料,采用反复冻融和超声波解冻结合法提取藻胆蛋白,利用等电点分离藻胆蛋白,采用SDS-PAGE电泳确定分离蛋白的种类。采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解藻胆蛋白。通过单因素实验和正交实验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解藻胆蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,研究表明:胃蛋白酶水解藻胆蛋白最佳酶解工艺条件是水解温度为37℃,底物质量浓度为6%(w/v),酶与底物比为5220 U/g,此时ACE抑制率为82.07%。胰蛋白酶水解藻胆蛋白最佳酶解条件是温度为42℃,底物质量浓度为6%(w/v),酶与底物比为5220 U/g,此时ACE抑制率为80.35%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的藻胆蛋白ACE抑制率94.30%。 相似文献
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玉米蛋白制备降血压肽的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验以我国来源丰富且价格低廉的玉米蛋白为原料,选用嗜热菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶等4种酶来水解玉米蛋白制备降血压肽。选用马尿酰-组氨酰-亮氨酸(HHL)为血管紧张素转化酶(ACE)的模拟底物,利用反相高效液相色谱(RHPLC)检测ACE催化反应生成的马尿酸(Hip)的量,确定水解产物的ACE抑制活性从而来对酶进行筛选。研究结果表明,碱性蛋白酶的水解能力最强,碱性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶的水解产物都达到了很好的ACE抑制活性(90%左右)。 相似文献
4.
以金枪鱼皮为原料,超声预处理后酶解制得高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,研究ACE抑制肽的模拟胃肠道消化稳定性,并对消化产物进行分离纯化和鉴定。结果表明,超声处理后不同酶解时间酶解液的ACE抑制活性均有所提高;超声预处理20、40 min后,酶解5 min酶解液的消化产物的ACE抑制活性显著高于其他组(p<0.05)。采用葡聚糖凝胶G-15对E5U20和E5U40进行分离纯化,两组酶解液均可分离为3个组分,其中E5U20组组分2的IC50值最小为0.393 mg/mL。采用半制备高效液相色谱对E5U20组分2进行分离纯化,得到8个组分,其中峰3的IC50值最小为0.102 mg/mL。通过质谱法对峰3进行鉴定,测得峰3序列为GPSGPPGP,来源于α1肽链第842~849的位置,符合高ACE抑制活性的多肽构效特点,目前尚无该氨基酸序列的报道。 相似文献
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卵白蛋白是蛋清中的主要蛋白质,利用卵白蛋白制备ACE抑制肽可为其高值利用提供参考。本文采用离子交换色谱对卵白蛋白的粗酶解物进行脱盐处理,确定了室温25℃、20 m L进样量、8 BV/h的脱盐工艺条件。在上述条件下,酶解物脱盐率达到83.6%,氮回收率和ACE(血管紧张素转换酶)抑制率分别为87.71%和80.31%。再采用截留分子量为10 ku和3 ku的两种超滤膜将脱盐酶解物分离成10 ku、3~10 ku和3 ku三个组分,最佳操作条件:超滤时间40 min、操作压力1.5 bar、温度35℃(10 ku)和30℃(3 ku)。超滤所得三个组分均具有ACE抑制活性,其中分子量3 ku的超滤物活性最高,该组分与粗酶解物相比较,总巯基和表面巯基含量显著降低(p0.05),同时表面疏水性显著提高(p0.05),热稳定性增加。因此,卵白蛋白的粗酶解物经脱盐、超滤处理,可以明显去除其中的盐分,并得到ACE抑制活性较高的分离组分。 相似文献
6.
以核桃分离蛋白(WPI)为原料,利用Alcalase 2.4L酶解制备高活性的ACE抑制肽.以水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和二次回归正交旋转组合试验,优化了Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺.得到的最佳酶解工艺条件为pH 7.94,酶解温度60℃,底物质量浓度20g/L,酶与底物质量比3.69∶100,酶解3h后,酶解产物的水解度达到24.78%,ACE抑制率达到76.58%,且在此条件下获得的ACE抑制肽具有一定的抗体内消化酶特性. 相似文献
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以英红九号红茶渣经碱溶酸沉提取的茶蛋白为研究对象,血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验和响应面优化得到茶蛋白ACE抑制肽的最佳制备工艺,并对酶解物进行氨基酸组成分析、超滤膜分离和不同分子量组分的ACE抑制活性分析。结果表明,英红九号茶蛋白ACE抑制肽的最优酶解工艺为酶解温度37℃、3.20 h、p H值7.20、底物质量分数3%、酶底质量比0.40%,在此条件下进行的验证试验ACE抑制率为83.38%,与理论值84.48%较相符。英红九号茶蛋白ACE抑制肽酶解物富含必需氨基酸(33.03%)和对ACE抑制活性有重要意义的疏水性氨基酸(47.20%),且经超滤膜分离所得<3ku组分的ACE抑制活性(IC50=0.85 mg/mL)要显著强于酶解物(IC50=1.37 mg/mL)和>3 ku组分(IC50=2.81 mg/mL)。该研究为食源性ACE抑制肽的研究开发和英红九号茶蛋白的高值化利用提供了理论依据。 相似文献
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RP-HPLC法测定蜂王浆水溶性蛋白及其相关产物对ACE的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),测定蜂王浆水溶性蛋白(WSPs)、WSPs的纯化蛋白1(MRJP1)和2(MRJP2)、WSPs的酶解产物(P-WSPs、T-WSPs和PT-WSPs)及从WSPs和酶解产物中分离到的不同肽段(>3 ku,1~3 ku和<1 ku)等对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制作用。结果表明,WSPs、MRJP1和MRJP2等水溶性蛋白本身对ACE抑制作用很弱,而它们的酶解产物对ACE的抑制作用却大大增强了,其IC50值分别为,P-WSPs:0.262 mg/mL;T-WSPs:0.870 mg/mL;PT-WSPs:0.046 mg/mL。在WSPs和酶解产物的膜分离肽段中,分子质量小于1 ku的肽段对ACE具有非常强的抑制作用。 相似文献
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Relationship between proteolysis and angiotensin-I-converting enzyme inhibition in different cheeses
The inhibition of angiotensin-I-converting enzyme (ACE) by the ethanol (70%)-soluble fraction (ESF) from different cheeses was analysed with an extract from rabbit lung acetone powder as enzyme source and 2-furanacryloyl-1-phenylalanylglycylglycine (FAPGG) as substrate. Proteolysis was assessed by a spectroscopic o-phthaldialdehyde (OPA) assay of the pH 4.6-soluble fraction and ESF. Peptides in the ESF were separated by reverse phase-HPLC. The traditional Norwegian cheese Gamalost had per unit cheese weight higher ACE inhibition potential than Brie, Roquefort and Gouda-type cheese, likely due to the combination of highest protein content and most extensive proteolysis providing a high content of ACE inhibitory peptides. However, ACE-inhibition expressed as IC50 per unit peptide concentration from ESF assessed by the OPA-assay was highest for Kesam, a Quark-type cheese with a low degree of proteolysis. 相似文献
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猪肺血管紧张素转化酶的提取纯化及其性质研究 总被引:9,自引:0,他引:9
新鲜猪肺均浆离心后,经35%~55%饱和度的硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析、DEAESephadex A-50阴离子交换后,得到经SDS-PAGE显示为一条带的ACE纯品。200g猪肺可制备出ACE347.09U,比活力29.029U/mg,活力回收12.53%。用双倒数作图法得出ACE的酶反应动力学常数Km为3.168mmol/L,Vmax为6.165nmol/min。两个月的保藏后,试验证明所提酶活力保持稳定。 相似文献
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鮰鱼皮为斑点叉尾鮰鱼片加工的主要副产物,利用鮰鱼皮明胶制备降血压肽(ACE抑制肽)可为鮰鱼皮的高值化利用提供参考。本文通过对原发性高血压大鼠(SHR)进行一次性及长期给药(28 d)实验,研究鮰鱼皮明胶ACE抑制肽(Mr3000 Da)的降血压作用,并测定大鼠血清和肺组织中的ACE活性和Ang II含量。实验结果表明:一次性给药和长期灌胃给药鮰鱼皮明胶ACE抑制肽均对SHR大鼠有显著降血压作用,降血压效果呈剂量依赖性;高剂量组SHR大鼠灌胃给药2 h后,其收缩压由206 mmHg降至159 mmHg;高剂量组SHR大鼠经长期灌胃给药10 d后,血压一直保持在155 mmHg左右;同时,鮰鱼皮明胶ACE抑制肽对正常血压大鼠的降血压作用不显著。鮰鱼皮明胶ACE抑制肽对SHR大鼠血清和肺组织中的ACE活性有显著的抑制作用,从而使大鼠血清和肺组织中Ang II含量显著降低,而对正常血压的SD大鼠的血清和肺组织中ACE活性和Ang II含量影响不显著。 相似文献
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ABSTRACT: An angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory peptide was isolated and purified from the hydrolysates of the irradiated bovine blood plasma protein. Blood plasma protein was irradiated at 10 kGy to eliminate microbial contamination and was enzymatically hydrolyzed using several commercial proteases: Alcalase, Esperase, and Flavourzyne. An ACE inhibitory peptide was isolated using membrane filtration, gel permeation chromatography, normal phase and reverse phase high-performance liquid chromatography. The purified ACE inhibitory peptide was identified to be a tripeptide, His-Pro-Tyr, having IC50 value of 1.68 μM. 相似文献
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以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。 相似文献
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采用DEAE离子交换层析-超滤法纯化猪肺血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE),在小试工艺条件的基础上对DEAE离子交换层析进行中试放大。以ACE比活及酶活回收率为指标,考察工艺放大后的纯化效果,并进一步完善纯化工艺条件。结果表明,DEAE离子交换层析柱放大15倍后,最终得到的ACE比活为(1.05±0.04)U/mg,达到电泳级纯,与小试工艺的纯化结果无明显差异,酶活回收率为34.6%±0.3%,高于小试工艺。由此认为,猪肺ACE提取放大纯化工艺是可行的,且可提高纯化效率,该工艺为更大规模的纯化ACE奠定了基础。 相似文献
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牛乳酪蛋白源降血压肽的分离及其分子量分布研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用聚醚砜膜超滤、羧甲基-纤维素离子交换层析对牛乳酪蛋白的酶解物进行分离,用高效凝胶排阻色谱测定酶解物中降血压肽的分子质量分布。结果表明:酪蛋白的酶解物经超滤层析分离,得到的ACE抑制率为86、36%的组分,经高效凝胶排阻色谱测定样品中至少含有6种分子量在1500u以下的多肽物质。 相似文献
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Junfeng Fan Xiaozhong Hu Szesze Tan Yanyan Zhang Eizo Tatsumi Lite Li 《Journal of the science of food and agriculture》2009,89(4):603-608
BACKGROUND: Douchi, a traditional fermented soybean food, has recently attracted a great deal of attention owing to its superior physiological activity. In the present study the angiotensin I‐converting enzyme (ACE)‐inhibitory activity of typical douchi procured from various regions of China was analysed. An ACE‐inhibitory peptide derived from the most potent douchi was also isolated and characterised. The pattern of ACE inhibition and resistance to hydrolysis by gastrointestinal proteases of this peptide are described. RESULTS: ACE‐inhibitory activities were detected in all douchi samples, with IC50 values ranging from 0.204 to 2.011 mg mL?1. Among the douchi samples, a Mucor‐type douchi exhibited the most potent ACE‐inhibitory activity (IC50 = 0.204 mg mL?1). A novel ACE‐inhibitory peptide was then isolated from this Mucor‐type douchi using ultrafiltration followed by Sephadex G‐25 column chromatography and reverse phase high‐performance liquid chromatography. The amino acid sequence of the purified peptide was identified by Edman degradation as His‐Leu‐Pro (IC50 = 2.37 µmol L?1). The peptide is a competitive inhibitor and maintained its inhibitory activity even after incubation with some gastrointestinal proteases. CONCLUSION: The present study shows that peptides derived from soybean fermentation during douchi processing could be the main contributor to the ACE‐inhibitory activity observed. Copyright © 2009 Society of Chemical Industry 相似文献