热稳定性脂肪酶生产菌的筛选及其酶学性质研究

采用平板透明圈法从不同来源土壤样品中分离得到31株脂肪酶生产菌株,经复筛得到一株脂肪酶产量较高的菌株Mhy-1。根据培养特征、生理生化分析及16S rDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株Mhy-1为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida),该菌的最适生长温度及初始pH分别为35℃和pH7.0,最适产酶温度及初始pH分别为30℃和pH9.0。采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析从菌株Mhy-1的发酵上清液中分离纯化了脂肪酶,酶的分子量约为34ku,最适作用温度为45℃,最适作用pH8.0。该酶在pH7.0~9.0和温度30~70℃的范围内稳定,在70℃条件下能维持80%以上酶活力,是一热稳定酶,纯化后的酶可用于生物柴油的催化合成。     

产低温脂肪酶深海菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

从鄂霍次克海域沉积物样品(lv39-06-06-04-18H)分离得到的150株低温细菌中筛选到菌株130产脂肪酶活性最高,其活性达到42 U/mL。对该菌株进行16S rRNA基因序列同源性和系统发育分析,结果表明菌株130属于芽孢杆菌属(Bacillus)。对其分泌脂肪酶的部分酶活特性进行研究,结果表明:酶的最适作用温度为35℃,0℃时保持33%的相对酶活力;对热敏感,60℃处理10 min仅残留30%酶活性;酶的最适pH范围在6.0~7.0。     

低温脂肪酶的分离纯化及酶学性质

苏云金芽胞杆菌CZW001脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤离心、DEAE-纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为75.5倍,活性回收率为37.6%,12%SDS-PAGE电泳估计其相对分子质量约40 000。对纯化后的脂肪酶进行酶性质研究表明:酶的最适作用温度为25℃,对热敏感,60℃处理30 min仅残留30%酶活性;酶的适宜作用pH范围在7～9,最适pH为8;该脂肪酶的水解活性对Ca2+表现明显的依赖性,Al3+、Zn2+和Fe2+对脂肪酶有显著的抑制作用;脂肪酶对醇类有机溶剂的耐受性随碳链增加而减小;脂肪酶对豆油表现出显著的特异性,而蓖麻油抑制脂肪酶水解活力。     

海洋低温β-半乳糖苷酶菌株筛选、鉴定及酶的分离纯化

筛选自黄海海泥产β-半乳糖苷酶的菌株CD6,依据形态学特征、生理生化特征及分子生物学特征鉴定为土生拉乌尔菌(Raoultella terrigena)。通过透析、超滤和柱层析方法分离纯化菌株β-半乳糖苷酶,测定该酶的最适反应温度为20℃,30℃剩余相对酶活85%;超过35℃酶活力即迅速下降,确定其为低温酶。     

从长白山阔叶林中筛选β-葡萄糖苷酶产生菌及其酶学性质研究

利用马丁氏培养基富集、PDA培养基纯化和七叶灵培养基显色,从长白山阔叶林中初步筛选出6株产β-葡萄糖苷酶的真菌。对真菌发酵生成的β-葡萄糖苷酶进行提取和纯化,测得10号菌株的β-葡萄糖苷酶活力最高为18.34 U/mL,形态学和分子学结合方法鉴定该菌株为草酸青霉(Penicillium oxalicum)。该菌株所产β-葡萄糖苷酶最适反应温度约为55℃,在温度30、40℃和50℃时较为稳定。最适反应pH值约为5,在pH值为5~6之间相对较稳定。Cu~(2+)对酶活力有较强的抑制作用,而Ag~+有较强的激活作用。     

热稳定性磷脂酶生产菌的分离鉴定及酶学性质研究

采用卵黄平板法从不同来源土壤样品中分离到25株磷脂酶生产菌株,经复筛得到1株磷脂酶产量较高的菌株JYSY1。根据培养特征、生理生化分析及16S rDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株JYSY1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。该菌最适生长及产酶温度分别为25℃、30℃,最适生长及产酶初始pH值均为7.0。采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换、Sephadex G-100凝胶层析从菌株JYSY1的发酵上清液中分离纯化了磷脂酶,其分子质量约为48 kDa,最适作用温度为50℃,最适作用的pH为8.0,Co2+和Ca2+对酶促反应有促进作用,酶活力分别提高到111.59%和110.11%。Zn2+、Mg2+对酶有一定的抑制作用。SDS、PMSF、EDTA、EGTA均对酶有一定的抑制作用,该酶热稳定性较好,65℃下酶活力能保持55%以上,纯化的酶是一金属磷脂酶,属于磷脂酶C。     

嗜热芽孢杆菌HSO8耐热中性蛋白酶的分离纯化及部分特性研究

从高温土壤中分离出1株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,研究了该酶的分离纯化与生化特性.蛋白酶经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-100HR凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4.25倍,产率5.1%;经SDS-PAGE电泳测得其分子质量为30.9 kDa.酶的最适温度与pH试验表明,其最适温度为65 ℃,最适pH为7.5,并在50 ℃时保持1 h以上的稳定.该蛋白酶活性受到EDTA的抑制,Zn2+能提高酶活性,该酶为金属蛋白酶.改性酪蛋白(Azocasein)、酪蛋白、牛血清白蛋白(BSA)等3种底物专一性试验表明,改性酪蛋白是其最适底物.     

脂肪酶产生菌的分离筛选及菌株鉴定

以富含油脂的土壤、菜籽等为脂肪酶菌株分离材料,分离得到11株脂肪酶产生菌株;对产酶活力高的菌株进行酶学性质实验,测得其所产酶最适作用pH为7,最适温度为40℃,酶活力为34.55U。在pH为8.5和35℃时酶具有良好的稳定性。采用形态学及rDNA-ITS序列分析法进行鉴定。结果表明,分离、筛选出的性能较理想的产脂肪酶菌株为米曲霉(Aspergillusoryzae)。     

窖泥中产纤维素酶菌株的筛选鉴定及产酶特性的研究

纤维素酶能够把纤维素降解成可发酵性糖,在许多工业领域有着广阔的应用价值。以窖泥为材料,采用传统平板法对产酶菌株进行筛选,获得一株产纤维素酶系齐全、活性强的菌株XWS-A,经16S rDNA分子生物学鉴定,结果表明该菌株为枯草芽孢杆菌。在液态条件下,对该菌株产酶特性进行研究发现,产内切β-葡聚糖酶最佳条件为温度35℃,培养基初始pH5.5,培养时间72 h;产外切β-葡聚糖酶最佳条件为温度35℃,培养基初始pH6.0,培养时间72 h;产β-葡萄糖苷酶最佳条件为温度40℃,培养基初始pH6.0,培养时间72 h。进一步对其酶学性质进行研究,结果表明:内切β-葡聚糖酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为5.5;外切β-葡聚糖酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为6.0;β-葡萄糖苷酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为6.0。     

磷脂酶产生菌株的筛选及其性质研究

采用卵黄平板法从天津市静海县唐官屯油坊附件土样中分离到22株磷脂酶产生菌株。并通过复筛得到1株磷脂酶产量较高菌株。根据形态观察、生理生化特征分析初步鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。结果表明:该菌株的最适生长及产酶温度均为30℃,最适生长及产酶pH值分别为8.0和7.0,不耐高渗。菌株所产磷脂酶为高温酶,其最适作用温度为50℃,最适反应时间为20min。     

唾液乳杆菌XH4B的a-半乳糖苷酶纯化及性质研究

本研究通过超滤、SephedaxG200凝胶过滤层析纯化来源于唾液乳杆菌XH4B（GeneBank索引号：JXl25456）的a-半乳糖苷酶,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,超滤时采用100kDa的滤膜,分子量大于100kDa的组分有酶活。利用SephadexG200进行柱层析洗脱至370-400min时得到的组分表现出明显的a-半乳糖苷酶活力。SDS．PAGE电泳结果表明,该酶的蛋白质单体分子量为70-80kDa,未变性的酶蛋白应为多聚体,总分子量大于100kDa。利用酶比活力计算的结果,相对于粗酶,超滤纯化效率为149．80％,柱层析纯化效率为391．91％。经响应面优化,确定唾液乳杆菌XH4B来源的a-半乳糖苷酶最佳酶促反应条件为：柠檬酸缓冲液pH值5．5,离子强度0．15mol／L,反应温度52℃。该酶对pNPG的Km值为0．817。相对于纯水,各类金属离子中,仅有心和Na＋对酶活力有正向的激活作用,酶活力分别达到了102．50％和104．18％。EDTA（96．54％）,Mg”（91．53％）,ca2＋（82．51％）,以及DTT（79．38％）能够较大限度保留酶活力,而Zn2＋、cu2＋、pb2＋、Fe3＋和vc则显著阻碍了酶促活力,仅能保留5-7％。     

苏云金芽孢杆菌精氨酸酶的纯化及酶学性质研究

从L-精氨酸诱导的苏云金芽孢杆菌SK20.001中分离纯化出SDS-PAGE电泳纯的精氨酸酶[EC3.5.3.1]。纯化酶的比活力为589.2U/mg,纯化过程酶的回收率为22.4%。酶经过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到亚基的相对分子量约31000u。该酶的最适pH为9.8,最适温度为40℃,并且Mn2+显示出对酶有最强的激活作用。通过Lineweaver-Burk双倒数作图得到的精氨酸酶Km为15.2mmol/L。     

环糊精葡萄糖基转移酶分离纯化及酶学性质研究

通过筛选和诱变获得一株高产环糊精葡萄糖基转移酶芽孢杆菌菌株,研究该菌所产环糊精葡萄糖基转移酶的分离纯化及酶学性质,结果显示：发酵液经离心处理后,采用硫酸铵溶液分步盐析、DEAE-cellulose 52 离子交换层析、Sephadex G-200 凝胶过滤层析方法得到电泳级环糊精葡萄糖基转移酶,SDS-PAGE 电泳显示该酶分子量为33kD,纯化倍数为10,得率为14.4%。该酶反应的最适温度为50℃,在40～60℃基本稳定,最适pH 值为8.0,在pH6.0～10.0 范围内基本稳定。Fe2+、Cu2+、Mg2+ 对该酶活力有明显的抑制作用。     

抗食源性病原菌细菌素的筛选及特性研究

目的 筛选一种抗食源性病原菌的细菌素,并对其稳定性进行研究.方法 以食源性病原菌Bacillus cereus ATCC 14579、Listeria monocytogenes LM201、Listeria monocytogenes LM605为指示菌,采用琼脂扩散法筛选细菌素产生菌,通过离子交换树脂法和高效液相色...     

枯草芽孢杆菌内切木聚糖酶的纯化与性质研究

建立了一种快速、简便分离纯化木聚糖酶的方法。采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合 ,从枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)固态培养基发酵产物中分离得到了 2种内切木聚糖酶 ,分别定义为xylⅠ和xylⅡ ,它们水解桦木木聚糖的主要产物有木二糖、木三糖和聚合度更高的木聚寡糖 ,没有木糖。SDS PAGE显示内切木聚糖酶xylⅡ为单肽链结构 ,分子质量为 98 8ku。内切木聚糖酶xylⅡ的酶反应最适温度为 5 0℃ ,酶反应的最适 pH为 7 0。Mn2 + 对xylⅡ酶反应具有促进作用 ,将酶活提高了 2 7倍 ,而Fe3+ 对该酶反应起完全抑制作用。     

根霉ZM-10脂肪酶的分离纯化和活性部位的化学修饰

根霉ZM-10脂肪酶经过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析、SephardexG100凝胶过滤层析得到电泳纯脂肪酶,分子量约为42 ku,纯化倍数15.3倍,酶活回收率22.2%。采用NBS、EDC、DEPC、CH-T、PMSF、DTNB等6种化学修饰剂对根霉ZM-10脂肪酶进行化学修饰和底物保护实验,研究了其分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系。实验结果表明,酸性氨基酸(天冬氨酸?谷氨酸)残基、组氨酸残基、丝氨酸残基、色氨酸残基为根霉ZM-10脂肪酶活性的必需基团。酶分子中酸性氨基酸(天冬氨酸?谷氨酸)残基、组氨酸残基和丝氨酸残基位于根霉ZM-10脂肪酶的活性中心部位,而色氨酸残基在保持脂肪酶活性中起到重要作用,但其不位于根霉ZM-10脂肪酶的活性中心部位。     

坛装黄酒贮存过程中污染微生物的分离鉴定

该研究对坛装贮存黄酒关键污染微生物进行分离纯化和鉴定。利用梯度稀释法和划线纯化法得到编号为B001、B002、B003的3株细菌和编号为F004、F005、F006的3株真菌。通过形态学特征观察、生理生化鉴定和分子生物学鉴定方法对分离菌株进行鉴定。结果表明,细菌B001、B002、B003分别为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和假肠膜明串珠菌（Leuconostoc pseudomesenteroides）,真菌F004、F005、F006分别为头状螺旋地霉（Saprochaete capitate）、爪哇正青霉（Eupenicillium javanicum）及红曲菌（Monascus sp.）。     

高产脂肪酶菌株的分离筛选与培养基优化

实验进行了高产脂肪酶菌株的分离筛选与发酵条件优化的研究。通过对35份富含油脂等样品的富集培养、分离筛选,获得320株产脂肪酶的细菌、酵母菌和霉菌,其中细菌X-13产酶活力最高,约为3.5U/mL;X-13发酵产脂肪酶的最佳碳源和氮源分别为可溶性淀粉、牛肉膏,Mg2+、Ca2+、Co2+对X-13菌株产酶有促进作用,Fe2+、Mn2+、Cu2+抑制菌株产酶;正交试验设计优化的培养基成分为：可溶性淀粉6g/L、牛肉膏4g/L、酵母粉0.5g/L、MgSO4 0.2g/L、聚乙二醇（PEG400）0.6mL/L、K2HPO4 1g/L、橄榄油乳化液20mL/L、pH值为7.0。在此优化培养条件下,细菌X-13培养72h的产脂肪酶活力达到9.28U/mL,较优化前提高2.65倍。     

热稳定性α-阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶的纯化

α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶对来源于被子植物的木聚糖类半纤维素的生物降解和转化是必不可少的。文中首次报道了国内对该酶的研究。α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶的基因工程菌在发酵罐中以LB为基质进行生长 ,以乳糖为诱导剂 ,所产生的α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶在 70℃热处理 3 0min后、经DEAE Sephacel阴离子柱层析、金属Ni2 + 的亲和层析等提纯步骤 ,达到了电泳纯 ,提纯倍数为 49 3倍 ,收率为 2 0 4%。SDS PAGE法测定α 阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶的分子质量为 85ku ,与理论推算值相吻合     

Isolation of cyclodextrin glucanotransferase preparations of different purities

Purification of cyclodextrin glucanotransferase (EC 2.4.1.19) from the culture liquid of Bacillus megaterium was carried out by the use of three purification procedures: (a) reverse osmosis and organic solvents precipitation, (b) ultrafiltration and gel-filtration chromatography, and (c) ultrafiltration, adsorption on starch, ion exchange chromatography and gel-filtration chromatography. Best precipitation was achieved by i-propanol - 85.92% of initial enzyme activity was preserved with purification of 1.47-fold. PS-20000 appeared to be the most suitable membrane for ultrafiltration. After 8.3-fold concentration by volume, the enzyme was purified 2.46-fold with a yield of 95.30%. As a result of the two-step purification procedure (ultrafiltration with membrane PS-20000 and gel-filtration chromatography) the enzyme was purified 36.2-fold with 95.45% of enzyme activity [measured in micrograms of cyclodextrins formed in 1 ml in 1 min under the assay conditions(U)] preserved. A highly purified enzyme preparation (purification of 74.56-fold and specific activity of 60.39 U/mg protein) was obtained by the third purification procedure. The purified enzyme preparation showed a single protein band on SDS-PAGE, 10% polyacrylamide gel.