酶解—磷酸化协同改性对卵白蛋白特性与结构的影响

为考察酶解和磷酸化协同改性对卵白蛋白特性和结构的影响,针对酶解和磷酸化协同改性的卵白蛋白的功能特性变化进行分析,并通过FT-IR、DSC和SEM对协同改性的卵白蛋白结构变化进行分析。结果表明,协同改性后的卵白蛋白的溶解度、凝胶强度、乳化性较酶解后的和未改性的卵白蛋白都有较大的提高,但起泡性和泡沫稳定性有所降低;结构上,卵白蛋白因酶解导致其肽链发生断裂,使得更多的氨基酸残基暴露出来,α-螺旋和β-折叠均有所增加;协同改性的卵白蛋白热变性温度较酶解的和未改性的卵白蛋白分别升高了7.13,10.19℃;此外,由于磷酸基团的嵌入,使蛋白的结构发生了变化,分子结构由球状体变成了层叠的片状结构。     

强力霉素人工抗原的合成与抗体制备

采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白BSA连接制备强力霉素-牛血清白蛋白(BSA-DC)人工免疫抗原,并用同样方法将强力霉素与载体蛋白OVA连接制备人强力霉素-卵清白蛋白(OVA-DC)人工包被抗原。经紫外扫描分析和动物免疫试验证实:强力霉素人工抗原合成成功,强力霉素与BSA的结合比为3∶1,经动物免疫试验所得抗血清效价为2.048×106,完全能够满足强力霉素残留的ELISA检测要求。     

无苦卵清白蛋白多肽制备工艺研究

本研究旨在解决卵清白蛋白多肽的苦味和异味,扩大其在食品中的应用范围。通过不同蛋白酶对卵清蛋白的水解效果和水解产物的口感情况综合比较,选择了蛋白水解专用酶1为水解酶,并以β-环糊精包合为后处理工艺,得到口感较好的卵清白蛋白多肽,蛋白回收率可达90%以上。该工艺最佳水解条件为:料液比1:4,温度60℃,初始pH 7.5,酶添加量E/S=0.75%,水解4小时;包合条件:温度70℃,β-环糊精添加量(以卵清质量计)为1.5%,连续搅拌包合1小时,浓缩至一定体积喷雾干燥,得到白色无苦的卵清白蛋白多肽。     

卵转铁蛋白双抗夹心ELISA方法的建立

卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆、杏仁和绿豆等致敏蛋白几乎没有交叉反应。板内重复性和板间重复性较好,因此所建立的方法可用于对卵转铁蛋白的检测。     

特布他林人工抗原的制备

特布他林(Terbutaline,TBL)又名特布特罗,属于小分子化合物,其分子量为225.29,本身不具有免疫原性,需要和载体蛋白偶联后方可进行抗体的制备。本试验以1,4-丁二醇二缩水甘油醚将半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联,并运用碳二亚胺法将半抗原与卵清白蛋白(OVA)进行偶联,分别制备出免疫抗原TBL-cBSA与包被抗原TBL-cOVA。紫外分光光度法及SDS-PAGE进行鉴定。经紫外扫描,证明其偶联比分别为7.60∶1、7.65∶1,此特布他林完全抗原可以免疫动物,本研究成果为特布他林抗体的制备奠定了坚实基础。     

SM_2单克隆抗体的初步应用研究

以磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)为免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)为包被抗原。制备SM2单克隆抗体;利用杂交瘤技术和有限稀释法经亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的杂交瘤细胞,与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。利用本试验制备的单克隆抗体初步建立了动物组织中检测SM2的间接竞争ELISA方法。最低检出限为9.95 ng/mL,灵敏度为47.12 ng/mL。     

罗丹明123人工抗原的合成及抗体的酶联免疫检测

为建立罗丹明B(rhodamine B)的免疫分析方法,采用戊二醛法,将半抗原罗丹明123与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原R123-B S A和包被抗原R123-OVA。经动物免疫实验证实人工抗原合成,并制备抗罗丹明123的多克隆抗体,此抗体同时能够检测食品中的罗丹明B,且最低检测限为0.001ng/mL。     

重金属汞螯合物人工抗原的合成与鉴定

以重金属汞为起始物质,将其离子化为二价汞,与双功能螯合剂谷胱甘肽(GSH)螯合后,获得半抗原,然后将半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)进行偶联,获得完全抗原。实验对各步骤的反应条件进行优化,采用紫外光谱、凝胶电泳对产物进行表征,成功制备了汞-GSH-BSA完全抗原。为计算完全抗原中重金属和载体蛋白的偶联比,采用石墨炉原子吸收法测定产物中重金属汞的含量,采用二喹啉甲酸(BCA)法测定抗原中载体蛋白的含量,所制备的免疫原中汞和蛋白的偶联比是9:1。Hg-GSH-BSA的成功合成是制备可识别重金属汞螯合物抗体的基础。     

卵白蛋白肽复合酶法制备工艺优化及解酒效果

目的:验证卵白蛋白肽的解酒活性,提高鸡蛋产品的附加值。方法:用碱性蛋白酶和胰蛋白酶复合酶解卵白蛋白,以乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,采用响应曲面法优化酶解工艺。通过检测卵白蛋白肽的总抗氧化性、水解度、氨基酸组成及相对分子质量,评估卵白蛋白肽的解酒效果。结果:最佳酶解工艺条件:酶解时间5 h,复合酶用量3 100 U/g,酶解温度50 ℃,料液比(m_卵白蛋白∶V_蒸馏水)3.5∶25 (g/mL),在此条件下得到的卵白蛋白肽ADH激活率为(22.71±0.15)%,总抗氧化能力值为(9.51±0.03) U/mL,水解度为(29.28±0.16)%。卵白蛋白肽富含谷氨酸(9.554 3%)、丙氨酸(3.863 3%)、亮氨酸(5.764 7%)等有益于提高解酒活性的氨基酸,小分子肽(＜1 000 Da)含量超过88.77%。结论:使用复合酶解法制备的卵白蛋白肽具有良好的抗氧化活性和解酒效果。     

卵清蛋白-壳聚糖共混成膜工艺的研究

卵清蛋白和壳聚糖共混制备可食和可生物降解膜。以壳聚糖浓度、卵清蛋白浓度、甘油浓度、TG用量、催化反应温度等为实验因素,以抗拉强度和断裂伸长率为评价指标,研究了卵清蛋白-壳聚糖共混成膜的工艺。结果表明:5%卵清蛋白溶液和1%壳聚糖的混合溶液加入2%甘油,加入TG酶0.08%,于40℃保温30 min,冷却后铺膜,制得的膜机械性能好。     

Measurement of protein in whole plant samples with ninhydrin

The ninhydrin method has been used widely for measuring amino acids in hydrolysed purified proteins. It is also a useful method of measuring the total amino acid or protein content of hydrolysed plant samples. In this study the conditions used in a modified ninhydrin method were found to incompletely hydrolyse protein. Therefore, standard conditions for protein hydrolysis (6 M HCI at 110? C) were tested. The accuracy of protein measurements using the standard ninhydrin method was evaluated using pure proteins, protein-carbohydrate standards and plant samples augmented with known amounts of protein. Standard hydrolysis conditions completely hydrolysed proteins, but protein content was overestimated when these conditions were used on whole plant samples and standards containing carbohydrates. This error may be quantified and corrected easily in plant samples, however, by measuring the recovery of protein added to control samples before hydrolysis.     

微生物发酵法产大豆多肽液水解度的测定

建立了一种适于蛋白质水解液水解度测定的新方法。以脱脂豆粕粉为原料，具产蛋白酶能力的微生物为生产菌种进行发酵。微生物所产蛋白酶作用于豆粕粉中的大豆蛋白将其水解成大豆多肽。通过新建立的方法测定了不同发酵时间发酵液的水解度，并与文献所报道的常规测定方法进行比较。结果表明，新建立的水解度直接测定法快速简便，灵敏度高，可重复性强，不仅适于微生物发酵法产大豆多肽液水解度的测定，还普遍适用于其它蛋白水解液水解度的测定。     

蛋白基乳液模板法构建油凝胶的研究进展

传统塑性脂肪带来健康问题,液态油固化成为构建零反式、低饱和脂肪酸塑性脂肪替代品的新策略。蛋白质是优质的食品营养组分,是来源广泛的可再生资源,具有独特的界面特性。为扩大蛋白资源的应用范围及促进功能性油脂的开发,对蛋白质的结构化及蛋白基乳液模板法构建油凝胶(结构化油脂)研究进展进行了综述,同时介绍了蛋白基乳液模板法构建的油凝胶的应用。蛋白质在一定条件下可作为凝胶剂固化液态油;蛋白基乳液模板法构建油凝胶具有安全性高、对环境污染小等优点。采用蛋白基乳液模板法构建的油凝胶可应用于替代传统塑性脂肪、荷载生物活性成分方面。     

凯氏定氮法测定火腿肠中的蛋白质

采用凯氏定氮法测定火腿肠中蛋白质的含量,结果表明,所测样品中蛋白质的含量为11.6 g/100g,该方法简单、准确度高,适用于火腿肠中蛋白质含量的测定。     

Measurement of protein in tannin-protein precipitates using ninhydrin

A method was tested for quantifying protein in precipitated tannin-protein complexes in which protein was hydrolysed with acid and the amino acids released were measured with ninhydrin. Unlike previously published methods, this technique requires no prior separation of tannin and protein and can be used to compare the binding of different soluble proteins to tannins under identical conditions. The method was used to compare the precipitation of bovine serum albumin, porcine pancreatic protease, β-glucosidase and γ-globulin by tannic acid. The amount of tannic acid required to precipitate maximal amounts of protease and β-glucosidase was approximately 7–8 times that required to cause maximal precipitation of albumin and γ-globulin when tested with 2 mg ml^?1 protein. All protein preparations contained a fraction (10–40% of total protein) which was not precipitated by tannic acid. Protein in tannin-protein precipitates produced in a standard haemanalysis assay were also measured with ninhydrin. Per cent precipitation at each tannic acid concentration as measured with ninhydrin was identical to that determined by haemanalysis within the linear portions of the binding curves produced by the two methods. These results confirm that the ninhydrin method accurately measures precipitation of protein by tannin.     

壳聚糖、溶菌酶和牛至油对大豆分离蛋白膜抑菌效果的影响

采用双倍稀释法研究壳聚糖、溶菌酶和牛至油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度。采用抑菌圈法研究添加天然抑菌剂壳聚糖、溶菌酶和牛至油的大豆分离蛋白膜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母和黑曲霉的抑菌效果。结果表明,添加壳聚糖、溶菌酶和牛至油的大豆分离蛋白膜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母和黑曲霉均有抑制作用。对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制效果为:牛至油>壳聚糖>溶菌酶。对酿酒酵母的抑制效果为:壳聚糖>牛至油>溶菌酶;对黑曲霉的抑制效果为:牛至油>壳聚糖>溶菌酶。因此,添加壳聚糖、溶菌酶和牛至油的大豆分离蛋白膜具有较好的抑菌效果和应用前景。     

Evaluation of a rapid protein analyzer for determination of protein in milk and cream

Accurate and rapid measurement of the protein content of milk is important from both a product quality and an economic standpoint. The Sprint rapid protein analyzer (CEM Corporation, Matthews, NC) is a commercial system based on a dye-binding technique and can be used for rapid measurement of protein in foods. The objective of the present study was to compare the Sprint method with the reference method (Kjeldahl method). Milk and cream samples were analyzed in duplicate for true protein and crude protein (CP) using the reference method as well as the rapid method. Method comparison statistics (regression analysis, graphical representation, standard deviation of residuals, repeatability, and so on) were used to evaluate the agreement between the 2 methods. Regression coefficients and the intercepts were not significantly different from 1 and zero for CP measurement in milk and cream, respectively. The average coefficient of variance between the duplicate CP measurements for the Sprint method was found to be 0.40, 0.49, and 0.76 for milk, light cream, and heavy cream, respectively. True protein measurement in milk and cream also followed a similar trend. Overall, there exists a sufficient level of agreement between the Sprint rapid protein analyzer and Kjeldahl method for true protein and CP measurement of milk and cream samples.     

添加剂对豌豆蛋白高水分组织化挤出物品质的影响及复配配方优化

以豌豆蛋白为原料,基于因子分析的综合评分法及Box-Behnken响应面法探究海藻酸钠、L-半胱氨酸、复合磷酸盐添加量对组织化豌豆蛋白的配方优化.因子分析结果表明,可将组织化豌豆蛋白制品的15项评价指标分为质构因子、色泽因子、吸附因子、溶解性因子及感官因子等五个相互独立的公因子,根据各样本因子得分及因子权重计算出综合得...     

响应面法优化玉米浸液蛋白提取工艺及单细胞蛋白发酵的研究

探索了用等电点法提取玉米浸液中蛋白质的方法,并利用提取粗蛋白后的上清液生产单细胞蛋白。利用单因素实验分析了pH、温度、时间对蛋白提取的影响,通过响应面法确定等电点提取蛋白的最佳工艺,并研究了用酿酒酵母、产朊假丝酵母发酵离心上清液生产单细胞蛋白的条件。结果表明:等电点法提取粗蛋白的优化条件为:pH7.6、提取温度26.4 ℃、提取时间20 min,提取率为77.5%。以提取粗蛋白后的上清液生产单细胞蛋白,产朊假丝酵母优于酿酒酵母,当上清液中干物质浓度为8%、pH为5.5时,产朊假丝酵母发酵得到的菌落数达到1.6×109 CFU/mL。     

二喹啉甲酸法在牛奶蛋白质定量中的应用

目的：建立二喹啉甲酸(BCA)测定牛奶中蛋白含量的方法。方法：用BCA 法和凯氏定氮法分别测定食用牛奶蛋白含量;同时,添加尿素作为含氮干扰因素,测定其对BCA 蛋白定量方法的影响。结果：BCA 法蛋白定量精密度实验显示,平均吸光度为0.2798,标准偏差为0.004,加标回收实验的回收率为98.00%～103.00%。分别测定50 倍、100 倍牛奶稀释样品,结果50 倍稀释样品组BCA 法和凯氏定氮法测得蛋白质量浓度的平均值分别为791.2μg/mL 和803.4μg/mL,100 倍稀释样品组分别为370.2μg/mL 和384.0μg/mL。添加尿素干扰实验显示,BCA法实验结果相对标准偏差在5% 以下,而凯氏定氮法大于5%。结论：BCA 法测定牛奶中蛋白含量结果可靠、稳定,与凯氏定氮法相比无显著差异;BCA 法能排除含氮物质的干扰,该方法操作简便、结果准确可靠,可替代微量凯氏定氮法。