HPLC法测定莲子中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH)含量

利用5,5'-二硫双-2-硝基苯甲酸(DTNB)为衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化提取、HPLC法测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)含量。本文对样品前处理过程和色谱流动相的选择分别进行了优化,有效的阻止了前处理过程中巯基氧化变性对测定灵敏度降低而导致的漏检及消除了衍生化产物3,5-硝基-3-巯基-苯甲酸(NTB)色谱峰拖尾所造成的干扰,并借此选择性测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)含量。结果表明;三次测定莲子中GSH和总巯基(-SH)含量均值分别为0.971 1μmol/g和1.368 6μmol/g,方法的回收率分别为101.02%和100.09%,检测限分别为4.21μmol/L和4.63μmol/L。     

南瓜籽中还原型谷胱甘肽（GSH）和蛋白巯基（P-SH）的测定

用5,5-二硫双-2-硝基苯甲酸(5,5'-dithio-bis-2-nitrobenzoic acid,DTNB)为柱前衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化提取,HPLC梯度洗脱测定市售南瓜籽干品中还原型谷胱甘肽(Reduced Glutathione,GSH)和含半胱氨酸残基的含巯基蛋白(Thiol protein,P-SH)的巯基含量。结果发现南瓜籽含较丰富的GSH和P-SH的巯基,其3次测定均值分别为GSH含量为1.045μmol/g,P-SH的巯基含量为1.887 3μmol/g。在优化的选定条件下,该测定方法的回收率为99.55%~100.49%,GSH和P-SH巯基测定检测限分别为0.138 4μmol/g和0.218 4μmol/g。     

衍生化法测定水果中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基含量

用衍生化试剂5,5-二硫硝基苯甲酸(DTNB)对巯基化合物的衍生化反应和邻苯二甲醛(OPA)与GSH的荧光衍生化反应,分别采用UV-vis分光光度法和荧光光度法测定了猕猴桃、大枣、酸浆中总巯基含量和GSH的含量。被测样品中GSH和总巯基相对含量分布有较大的差异,其中猕猴桃和大枣中含有相对较高的GSH浓度分布,分别达0.7092、0.8374mol/g,酸浆中含有较高的总巯基含量分布,达1.4173mol/g。本测定方法的回收率达95.38%~101.9%,满足测定准确度的要求,总巯基含量和GSH含量测定最低检测限分别为9.6×10-7、2.69×10-7mol/L。     

HPLC法测定四种食用坚果种子中还原型谷胱甘肽(GSH)和蛋白巯基(P-SH)含量

用5,5'-二硫双-2-硝基苯甲酸(DTNB)为柱前衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化提取,HPLC梯度洗脱,测定了市售开心果、巴旦木、澳洲坚果、腰果干品中谷胱甘肽(GSH)和含半胱氨酸残基的蛋白巯基(P-SH)含量。结果发现四种坚果均含较丰富的GSH和P-SH巯基,其含量分别为,开心果:GSH(1.2303±0.01126)μmol/g,P-SH(3.5414±0.0531)μmol/g;巴旦木:GSH(0.3069±0.0185)μmol/g,P-SH(1.9001±0.0194)μmol/g;澳洲坚果:GSH(1.5708±0.0216)μmol/g,P-SH(0.5905±0.0238)μmol/g;腰果:GSH(0.3373±0.0047)μmol/g,P-SH(2.2458±0.0225)μmol/g。在优化的选定条件下,测定方法的回收率为99.37%~101.45%,GSH和P-SH测定检测限分别为0.1386μmol/g和0.2184μmol/g。本研究对坚果活性成分的构成及其巯基化合物在保健防病作用研究及其功能性食品开发均提供了有用的参考数据。     

衍生化法测定山药中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH)含量

目的 用衍生化法测定山药中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH)的含量。方法 利用4,4?-二硫代联吡啶(4-DPS)和邻苯二甲醛(OPA)为衍生化试剂,采用细胞破壁和衍生化为一体的样品前处理方法, 分别用UV-vis分光光度法和荧光光谱法测定了山药鲜品中总巯基(-SH)、GSH的含量。结果 山药中含较丰富的总巯基和GSH, 含量分别达0.4556 ?mol/g和0.1792 ?mol/g。UV-vis分光光度法和荧光光谱法测定方法的检测限分别为1.0458 ?mol/L和0.5666 ?mol/L, 回收率分别为98.73%和98.40%。结论 本研究对山药中巯基化合物的含量、测定方法学和样品前处理方法提供了重要的基础数据和参考依据。     

鸡全蛋粉中金属硫蛋白检测方法的研究

使用5,5'-二硫硝基苯甲酸(DTNB)比色法来测定鸡全蛋粉中的金属硫蛋白含量,采用酸水解的方法对样品进行前处理,通过单因素和正交试验确定最优条件为:水解时间24 h,盐酸浓度6 mol/L,质量体积比1:20 g/mL,水解温度130 ℃,在此条件下,水解度为55.28%,金属硫蛋白含量为0.4821 mg/g。在前处理后对检测方法的反应条件及试剂配制条件进行优化,最终选用pH为4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制Ellman试剂,反应最佳pH为7.2。得到的线性回归方程为Y=0.019x+0.027,R2=0.999,呈良好的线性关系。加标回收率在75.83%~88.15%,相对标准偏差为3.10%,该方法具有较好的重现性和准确度和精密度,方法检测限为7.57 μg/g,本方法可以用于样品中金属硫蛋白(MTs)的快速检测。     

分立式流动分析法测定啤酒总SO_2

采用分立式啤酒分析仪,用5,5'-二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂能快速、精确测定啤酒中的总SO_2。方法的回收率在93.7%~104.4%之间,一次实验的重复性变异系数0.43%,多次实验的重复性变异系数1.5%~4.7%。对收集的18个样品用美国化学家协会(ASBC)标准方法盐酸副玫瑰苯胺比色法与之做了对比,收集数据用配对数据T检验表明两方法没有显著性差异。     

分光光度法检测保健茶中左旋肉碱

样品经稀释后,游离态的左旋肉碱与乙酰辅酶A在肉碱乙酰转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A,游离的辅酶A和5,5′-二硫-2-硝基苯甲酸反应生成黄色物质,其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比,采用分光光度法检测,方法重现性好（RSD,0.142%）,回收率也很高（96.2%～108.0%）。     

两种方法测定对乙酰氨基酚注射液中盐酸半胱氨酸含量的比较研究

目的比较紫外-可见分光光度法和柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)两种方法测定对乙酰氨基酚注射液中抗氧剂盐酸半胱氨酸的含量差异,研究盐酸半胱氨酸含量测定方法的可靠性。方法紫外-可见分光光度法:通过盐酸半胱氨酸与酸性茚三酮溶液反应生成红色产物,在559 nm波长处测定吸收度;柱前衍生HPLC:以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,与对乙酰氨基酚注射液在60℃水浴暗处反应,HPLC测定。采用Agilent extend C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.014 mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸溶液调pH 8.2)(35:65)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长360 nm。结果使用紫外-可见分光光度法,测得3批样品的含量分别为0.24,0.24,0.23 mg/mL。使用柱前衍生HPLC,测得3批样品的含量分别为0.23,0.24,0.23 mg/mL。结论紫外-可见分光光度法和柱前衍生HPLC均可准确测定对乙酰氨基酚注射液中的抗氧剂盐酸半胱氨酸的含量。     

黑果枸杞、枸杞、黑加仑中原花青素含量对比研究

目的对比黑果枸杞、枸杞、黑加仑中原花青素的含量。方法用香草醛-盐酸法显色,用分光光度法测定黑果枸杞、枸杞、黑加仑中原花青素的含量。结果在所测的样品中,原花青素的平均含量为：黑果枸杞5.04%,枸杞0.48%,黑加仑0.58%。结论黑果枸杞中原花青素的含量相对最高,是较理想的提取原花青素的植物资源。     

链格孢侵染对枸杞鲜果挥发性物质释放的影响

目的 探究链格孢(Alternaria alternata)侵染对枸杞果实挥发性化合物释放的影响。方法 以宁杞1号枸杞果实为研究对象,通过损伤接种链格孢菌处理,分析测定接种后果实发病率和病斑面积,采用顶空-气相色谱-离子迁移谱法探究接种对果实挥发性成分释放的影响。结果 接种果实发病率和病斑面积均随贮藏时间延长显著增加,5-甲基-2-呋喃甲醇可作为区别损伤和非损伤处理的候选物质,损伤接种链格孢菌处理显著促进了第5 d果实中2,3-二甲基吡嗪、2-正戊基呋喃和二异丁基酮等物质和第1 d后果实中苄醇、2-丁酮、异戊酸乙酯、3-甲硫基丙醛和庚醛等物质的释放,这些物质可能与枸杞黑霉病的发生和严重度有关,可作为鉴定链格孢侵染枸杞果实的候选靶标物质,通过指纹图谱和主成分分析将不同处理枸杞样品的挥发性成分进行有效区分。结论 链格孢侵染可促进枸杞果实香气成分释放,为枸杞黑霉病快速诊断与评估奠定基础。     

枸杞多糖诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的形态学研究

采用热水法提取药材枸杞子中的枸杞多糖。本研究通过MTT 实验发现3.125～200mg/L 质量浓度范围内的枸杞多糖能显著抑制宫颈癌Hela 细胞的增殖;采用荧光显微镜、透射电镜和激光共聚焦扫描显微镜观察发现经枸杞多糖处理过的Hela 细胞呈现出典型的凋亡特征;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法进一步证实经枸杞多糖处理过的Hela 细胞呈现凋亡特征。结果提示枸杞多糖是一种潜在的抗癌复合物,其关键作用机制是诱导癌细胞凋亡。     

熟制过程对枸杞子挥发性成分的影响

本试验以普通干制枸杞为原料,通过三段式干制工艺制备熟制枸杞子,然后利用HS-SPME-GC-MS分析熟制枸杞子中的挥发性成分。结果表明,经过熟制的枸杞子果肉较柔软、厚实,味道酸甜,有独特的药香味,口感协调,颜色呈均一的棕黑色;熟制枸杞子的挥发性风味物质共有81种,酯类16种,醛类18种,酮类18种,醇类17种,呋喃类4种,酸类1种,酚类1种和烃类6种;与普通枸杞相比,熟制枸杞子中新产生了42种挥发性化合物,保留了39种,消失了39种;熟制枸杞子中醛类的相对含量为78.83%,比普通枸杞高25%左右,而酯类、酮类均低10%左右,醇类低5%左右;熟制枸杞子新产生了含量较高的3-甲基丁醛(33.84%)、糠醛(20.14%)和2-甲基丁醛(12.01%),为炮制药品中常见的焦香味物质,赋予了熟制枸杞子独特的药香气味。     

枸杞花抗氧化活性的研究

本研究以枸杞干花为材料,用超声波提取法得到水提取物和95%乙醇提取物。测得水提取物和95%乙醇提取物中含多酚类化合物分别为60.75 mg,13.55 mg,总量为74.30 mg,约占干枸杞花的1.49%;含黄酮类化合物分别为11.03 mg,3.45 mg,总量为14.48 mg,约占干枸杞花的0.29%;总还原力FRAP值分别为762/μL、287/μL;对DPPH的清除率依次为水提取物>95%乙醇提取物>VC。     

固相萃取-高效液相色谱法测定枸杞中甜菜碱

建立固相萃取液相色谱法净化和测定枸杞中甜菜碱的分析方法。方法采用混合型阳离子交换小柱(WatersOasis MCX)净化枸杞样品提取液,使用Atlantis HILIC 色谱柱,以乙腈- 水为流动相进行梯度洗脱,在195nm 波长处检测。结果表明,线性范围为0.2～5.0mg/mL,方法检出限为0.0066mg/mL,平均回收率为88.3%～104%。本方法能简便、快速、准确地检测枸杞中甜菜碱。     

不同枸杞挥发油提取工艺优化及其得率的差异性分析

目的:优化加热回流法提取枸杞挥发油工艺,在此基础上研究不同品种、年份枸杞的挥发油得率差异。方法:在优选有机溶剂的基础上,以料液比、浸泡时间、回流时间为因素,采用单因素试验和正交试验研究各因素对加热回流法提取枸杞挥发油的影响规律并对其工艺进行优化。结果:正交试验发现最佳的提取工艺为料液比1:8、浸泡时间4 h、回流时间4 h,获得最佳枸杞挥发油得率为3.68%±0.13%。在最优提取条件下提取不同品种、年份的枸杞挥发油,结果发现,小颗粒果、宁夏5号、2016年宁夏1号的枸杞挥发油得率差异显著(p < 0.05),小颗粒果枸杞的挥发油得率最高(5.92%±0.12%)。不同生产年份的枸杞挥发油得率差异显著(p < 0.05),2016年宁夏1号枸杞挥发油得率最高(3.69%±0.02%)。结论:枸杞挥发油得率在不同品种上具有一定的差异性,在不同年份上具有显著的差异。     

枸杞粉及其多糖对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫及肠道菌群的调节作用

枸杞是我国传统的药食两用资源,其鲜果喷雾干燥粉作为食品或功能食品原料被广泛应用,但其功效作用研究较少。本研究以环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）诱导免疫低下的小鼠为模型,探究枸杞粉（Lycium barbarum L. powder,LB）、枸杞多糖（Lycium barbarum L. polysaccharides,LBP）及复配物（LB＋LBP）对小鼠免疫力及肠道菌群稳态的影响。结果表明,LB、LBP及LB＋LBP均可不同程度地恢复免疫抑制小鼠的体质量和采食量,改善小鼠的脾脏、胸腺和结肠组织损伤,有效促进免疫抑制小鼠肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和免疫球蛋白A（immunoglobulin A,IgA）的分泌,调节结肠中免疫相关基因的表达,促进短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFAs）生成,显著调节Muribaculaceae_unclassified、Muribaculum、Mucispirillum、Helicobacter、Bilophila、Clostridiales等相对丰度（P＜0.05）,逆转CTX诱导的小鼠肠道菌群代谢功能异常,并使其趋于正常。相较于LBP,LB、LB＋LBP还可降低Clostridiales相对丰度,增加有益菌Duncaniella的相对丰度,LB＋LBP还可降低厌氧菌Anaerotruncus的相对丰度。本研究结果将为枸杞精深加工产业中功效针对性健康产品研发和多元化产品开发提供理论依据。     

NO熏蒸处理对冷藏枸杞鲜果细胞壁代谢的影响

为了探明NO熏蒸处理对冷藏枸杞鲜果细胞壁代谢的影响,本文以"宁杞七号"枸杞鲜果为试材,采用300μL/L(0μL/L NO为对照)的NO气体对"宁杞七号"熏蒸处理3 h,于3±0.5℃条件下贮藏36 d,定期测定果实腐烂率、硬度、细胞壁代谢相关酶活力.结果表明:300μL/L NO处理抑制枸杞鲜果多聚半乳糖醛酸酶(po...     

枸杞总黄酮提取工艺优化及其体外抗氧化活性分析

为了优化黄果枸杞黄酮提取工艺,比较三种黄果枸杞体外抗氧化活性,本文采用响应面试验设计,以"宁农杞5号"黄果枸杞为原料,优化黄果枸杞黄酮提取工艺,并对三种代表性黄果枸杞的黄酮提取物进行抗氧化活性测定与分析,同时以红果枸杞、黑果枸杞作为对照。结果表明:水浴温度是影响黄酮提取的主要因素,黄果枸杞黄酮提取的最佳参数为乙醇浓度70%、添加乙醇体积40倍、水浴温度70℃、水浴时间90 min,此时黄酮含量为(175.21±1.69)μg/g;体外抗氧化活性分析表明,三种黄果枸杞中"宁农杞5号"对ABTS和DPPH自由基清除能力最强,分别为27.71%±0.66%、15.3%±0.84%,高于红果枸杞(22.72%±0.50%、12.55%±1.20%),但不及黑果枸杞(33.33%±0.49%、81.61%±1.25%);通过相关性分析可知,总黄酮含量与ABTS清除率呈显著正相关,与DPPH清除率和FRAP值呈极显著正相关;总酚含量与ABTS清除率、DPPH清除率呈显著正相关。综合表明,黄酮类化合物是黄果枸杞表现抗氧化活性的主要成分。     

国内外枸杞农药残留限量标准对比分析

目的 对比不同国家、地区枸杞中农药的最大残留限量(maximum residues limits, MRLs)标准, 对其差异进行分析。方法 查阅整理我国、欧盟、国际食品法典委员会(Codex Alimentarius Commission, CAC)、韩国和日本关于枸杞农药MRLs的标准, 分析我国、欧盟、CAC、韩国和日本在枸杞农药MRLs标准体系上的差异。结果 我国规定了枸杞中116种农药MRLs标准, 而欧盟、CAC、韩国、日本分别规定了498、15、53、214种标准, 我国标准与欧盟、CAC、韩国和日本的标准共同关注度分别是13.9%、11.0%、5.7%和17.4。结论 我国对比欧盟、CAC、韩国及日本的枸杞农药MRLs标准中种类及数量均存在差异,但我国标准符合我国实际国情。为了避免枸杞出口受阻, 在修订我国枸杞农药MRLs标准时, 可以参考与我国有枸杞贸易往来的其他国家、地区及组织的标准。