三步沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白

鸡卵类黏蛋白（hen’s egg ovomucoid,HOVM）是鸡蛋清中最重要的过敏原蛋白,探讨三步沉淀（一步三氯乙酸沉淀以及两步硫酸铵盐析沉淀）从鸡蛋清中提取并纯化HOVM的工艺条件,并利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）技术检测纯化效果。结果表明：用等体积去离子水稀释的鸡卵清液加入质量分数10%三氯乙酸去除大部分杂蛋白后,所得上清液加入硫酸铵至终饱和度50%,盐析沉淀进一步去除非HOVM的杂蛋白,上清液中最后再追加硫酸铵至终饱和度80%,离心所得沉淀再经过透析冻干即为高纯度的HOVM;HPLC（检测波长220 nm）检测所获HOVM的纯度为99.202%,此工艺条件下得到HOVM的提取率约为27.05%。     

微波辅助提取林蛙卵油的工艺优化及脂肪酸组成分析

以林蛙卵为原料,以无水乙醇为提取剂,研究微波法对林蛙卵油提取率的影响。在单因素试验的基础上,进行响应面优化试验,研究料液比、浸泡时间、微波功率对林蛙卵油提取的影响。结果表明,提取最佳工艺条件为料液比1∶9.82(g/mL)、浸泡时间3.33 h、微波时间30 min、微波功率600 W;林蛙卵油的提取率可达到(20±0.67)%。与其他林蛙卵油提取方法比较,微波法辅助提取林蛙卵油具有得率高的优点。对得到的林蛙卵油采用气相色谱-质谱分析检测出27种脂肪酸,不饱和脂肪酸质量分数54.98%,其中以亚油酸、二十碳二烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、亚麻酸、棕榈反油酸、二十二碳五烯酸含量较高。     

鸡卵类黏蛋白结构与性质研究进展

鸡卵类黏蛋白是鸡蛋中最主要也是过敏原性最强的过敏原蛋白。本文总结该蛋白的结构,包括氨基酸序列、糖基组成、二硫键位置、二级结构以及组成该蛋白的3 个结构域,并描述其理化性质,最后着重分析讨论其过敏原性,特别是其分子结构中二硫键、糖基和结构域等因素与过敏原性之间的内在联系。     

鸡卵类黏蛋白过敏原性的在体与离体实验

通过观察卵类黏蛋白引起的豚鼠过敏性休克以及对致敏豚鼠离体肠平滑肌过敏性收缩反应（Schultz- Dale反应）的影响,研究鸡卵类黏蛋白的过敏原性,并初步建立其过敏实验的动物模型。结果显示：1）在实验 观察剂量下,1 mg/mL卵清白蛋白组豚鼠100%出现过敏性休克并死亡,全身性过敏反应呈极强阳性（4 分）; 卵类黏蛋白组豚鼠的反应与卵白蛋白组相似（P＞0.05）,大部分动物出现死亡,全身性过敏反应100%呈阳性 （2.04～3.68 分）;不同剂量的卵类黏蛋白引起的豚鼠全身过敏反应呈现出剂量依赖性,当致敏剂量为4 mg/mL 时,全身性过敏反应评分为3.68。2）卵类黏蛋白对Schultz-Dale反应的影响也与卵清白蛋白相似,使致敏的肠平滑 肌收缩活动明显加强;以2 mg/mL致敏时,豚鼠离体肠收缩力改变率最高,为538.5%。3）不同致敏剂量卵类黏蛋 白组豚鼠血清免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）G水平较对照组明显升高,且呈剂量依赖性。由此建立的卵类黏 蛋白在体与离体过敏实验的动物模型可用以检测卵类黏蛋白过敏原及评价其过敏原的消减效果。     

鳕鱼卵中磷脂提取工艺的优化

为了充分利用鳕鱼资源,提高海产品附加值,采用溶剂提取法,以乙醇液为提取溶剂,以磷脂得率及纯度为考察指标,通过单因素实验及正交实验,探讨乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间等四个因素对磷脂提取的影响,并制定出最优鳕鱼卵中磷脂的提取工艺。结果表明,鳕鱼卵中磷脂的最佳提取工艺条件为:以1:10 (g/mL)的料液比比例,采用乙醇浓度为90%的乙醇溶剂搅拌提取鳕鱼卵3 次,每次提取6 h。该工艺成本低、方法简单、污染少、易于实现工业化。     

响应面法优化番木瓜籽蛋白质提取工艺

作为食用和工业生产的废弃物番木瓜籽,提高其蛋白质提取率,实现资源的回收利用和扩大副产品价值。以番木瓜籽为原料,使用响应面法优化碱溶酸沉法提取番木瓜籽蛋白质提取工艺。以番木瓜籽蛋白质提取率为指标,研究pH值、液料比、时间、温度对蛋白质提取率的影响。结果表明番木瓜籽蛋白质提取率最优条件为:pH 11.3、料液比1∶45(g/mL)、时间224 min、温度47.5℃,针对蛋白质提取率的模型显示失逆项不显著,R2值为94.26%,表明模型拟合良好。在此试验条件下,验证试验结果平均值为53.74%,与理论值55.21%接近。     

超声协同等电点沉淀法提取螺旋藻藻胆蛋白工艺的优化

以螺旋藻粉为原料,通过正交试验,对超声波细胞破碎及等电点沉淀提取藻胆蛋白进行研究,并优化其工艺条件。结果表明,在藻液质量分数5%、630W(额定功率为900W)条件下超声20min,效果最佳;而采用冰醋酸作为等电点沉淀介质,在pH4.0 的条件下,从提取液中低温沉淀藻蛋白,其操作较为简便。由于冰醋酸溶液易挥发分离,简化了生产工艺。最后通过冷冻干燥,得到粗蛋白粉末。利用本法优化工艺后,提取液中藻蓝蛋白的含量高达4.36%;而经沉淀干燥得到的粗蛋白粉末得率为52.5%,其中藻蓝蛋白含量为7.7%、别藻蓝蛋白含量为7.9%、藻红蛋白含量为0.8%。     

墨鱼缠卵腺糖蛋白提取工艺优化及纯化

本文以墨鱼缠卵腺为实验原料,通过单因素实验及响应面试验优化墨鱼缠卵腺糖蛋白的提取工艺,随后对最优工艺下得到的糖蛋白进行分离纯化,电泳分析其纯度,并进一步研究其蛋白及总糖含量。结果表明,墨鱼缠卵腺糖蛋白提取最佳工艺为提取温度24 ℃,提取时间3.6 h,NaOH浓度0.4 mol/L,料液比1:20 g/mL,超声功率200 W。在此条件下进行验证试验,得出墨鱼缠卵腺糖蛋白实际得率为16.13%±0.16%;经DEAE-52纤维素离子交换柱层析、Sephacryl S-300HR柱层析分离后得到纯品糖蛋白,电泳分析表明所纯化的糖蛋白纯度达到电泳纯,其中蛋白含量为65.53%±0.8%,糖含量为31.74%±1.1%,得率为墨鱼缠卵腺去外层薄膜原料的0.91%。     

不同贮藏条件下鸡蛋清中主要蛋白质特性的变化

目的探讨贮藏条件对鸡蛋品质的影响及品质变化机制。方法研究25℃室温贮藏、4℃冷藏及50%CO2+9%O2+41%N2三元气体包装室温贮藏条件下,鸡蛋清卵白蛋白、卵黏蛋白、溶菌酶的品质变化。结果实验结果表明:在35 d贮藏期间,室温组蛋清S-卵白蛋白含量从初始值14.867%迅速增至94.345%;卵黏蛋白含量从2.931 mg/g降至0.341 mg/g;溶菌酶含量从1.488 mg/m L增加到4.851 mg/m L,溶菌酶活力从30166.7 U/m L降低到15933.3 U/m L。冷藏组和气调组均能有效降低卵白蛋白N-构型向S-构型转化的速度,降低S-卵白蛋白含量(P0.01);抑制卵黏蛋白分解,保持卵黏蛋白含量(P0.01),阻止溶菌酶变性和卵黏蛋白-溶菌酶复合体解离,保持溶菌酶含量(P0.01),并维持溶菌酶活力(P0.01),三者综合作用可以减缓蛋清稀化的进程。结论 4℃冷藏和气调包装室温贮藏均能保持蛋清蛋白质的特性。     

酶的分离纯化过程中的沉淀分离技术

沉淀分离技术被广泛地用于蛋白质的分离，酶作为一种特殊蛋白质，其分离也必然用沉淀分离技术。针对沉淀分离技术在酶的提取过程中的应用概况，重点介绍了几种常用的提纯酶的沉淀方法：有机溶剂沉淀法、盐析沉淀法、等电点沉淀法、热变性沉淀法和其他方法。     

蛋清中溶菌酶的提取

研究了从新鲜蛋清中提取溶菌酶的方法。通过控制温度，调酸和加盐，可以使溶菌酶得到分离和纯化。采用超滤的方法将溶菌酶提取液浓缩及脱盐并进一步纯化。最后采用喷雾干燥的方法制成产品。产品活力可达１１０００ｕ／ｍｇ．     

蛋清溶菌酶的提取及其酶学性质探究

采用阳离子交换法-超滤法协同分离提取蛋清中溶菌酶,首先通过单因素试验和Box-Behnken试验,优化蛋清中溶菌酶的提取工艺,然后对其酶学性质进行探究.结果表明:在树脂用量为蛋清滤液的24.2％,NaCl浓度1.00 mol/L,蛋清滤液pH 9.10,洗脱时间62.61 min时,溶菌酶经超滤离心后测得纯度为96.3...     

咸蛋清中几种重要蛋白质的提取和纯化

咸蛋清是蛋黄加工过程中的副产品。为提高咸蛋清的利用率,本研究建立了一种简单可行,低成本,可连续分离咸蛋清中几种重要蛋白质的工艺方法。本文利用等电点沉淀法、(NH₄)₂SO₄,盐析和醇沉等方法 从咸蛋清中依次分离出卵黏蛋白、卵白蛋白和卵类黏蛋白。研究结果显示:在实验室规模下,卵黏蛋白、卵白蛋白和卵类黏蛋白的产率分别达到83%,98%和76%,SDS-PAGE凝胶电泳显示,3种蛋白质的纯度分别为89%,92%和98%。此外,采用醇沉分离的卵白蛋白在复溶后仍具有良好的起泡性,说明分离方法能较好地保持蛋白质的功能特性。     

新型离子液体亲和萃取鸡蛋清中的溶菌酶

建立并优化利用辛巴蓝(Cibacron Blue F-3GA,CB)修饰[C₄MIM]Cl的新型离子液体[C₄MIM]₃CB特异性萃取分离鸡蛋清中溶菌酶的方法,并采用AutoDock Vina分析[C₄MIM]₃CB与蛋白的结合能,研究溶菌酶与[C₄MIM]₃CB相结合的能力。通过亲和萃取和反萃取并进一步脱盐、浓缩、冷冻干燥,得到溶菌酶产品。结果表明,通过对影响因素的研究,优化出最佳的萃取分离条件:蛋清粉溶液pH为7,新型离子液体中[C₄MIM]₃[CB]浓度为8 mg/mL,反应震荡时间为15 min,反萃取KCl溶液pH为7.0,浓度为1.5 mol/L。最终250 mg蛋清粉可得12.3 mg的溶菌酶产品,纯度为97.56%,酶活力为35000 U/mg,纯化倍数达到37.39,酶活回收率89.74%,且与其他蛋白达到完全分离。该方法具有选择性高、操作简便、产物纯度和活性高等优点。     

鸡蛋黄中卵磷脂的分离及分析方法研究

采用单一溶剂和混合溶剂提取鸡蛋黄中的卵磷脂,以期获得较经济、较环保的提取方法,并建立鸡蛋黄卵磷脂含量快速测定方法。分别利用单一溶剂和混合溶剂抽提法提取鸡蛋黄中的卵磷脂;将粗提蛋黄脂肪经高氯酸-硝酸消化液消化后与钼酸铵反应,于分光光度计400 nm处进行比色测定磷含量。最后测定了回收率。结果表明,混合溶剂在提取率和纯度上均优于单一溶剂;磷标准曲线在0～25μg/mL浓度内呈线性相关。回收率为84.3%～93.4%,精密度为1.93%～2.90%。该方法符合食品卫生分析要求,可用于鸡蛋黄卵磷脂含量分析。得到了提取卵磷脂较经济、环保的方法,对扩大卵磷脂生产规模有一定的参考价值。     

蛋清粉酶解制备蛋清肽工艺优化研究

筛选了用于酶解蛋清粉的蛋白酶,并对碱性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽的最佳工艺条件进行了优化。单因素试验结果表明酶解温度50℃、酶解p H值9.5和10%的底物浓度可以获得较佳的酶解产物抗氧化活性,正交试验表明,p H值9.5,底物浓度10%和反应温度50℃,酶解产物清除DPPH自由基能力最强;在p H值10.5,底物浓度5%和反应温度50℃时,酶解产物具有最佳的还原力0.514。基质辅助激光解析串联飞行时间质谱对酶解产物多肽分析结果表明,蛋清肽的分子量集中在2100-5000。     

蛋清肽的工艺优化、抗氧化作用及特性

以对DPPH自由基清除率为考察指标,筛选适宜蛋清肽制备蛋白酶。研究酶活、温度、蛋清含量及pH值对蛋清肽清除DPPH自由基的影响,利用正交试验探讨制备蛋清抗氧化肽的最佳工艺;以抗坏血酸(VC)为对照,研究蛋清肽总还原力大小、对羟自由基、超氧阴离子自由基的清除作用及对脂质过氧化的抑制作用;研究蛋清肽的部分特性。结果表明:风味蛋白酶适宜蛋清肽的制备,酶解时间选择90 min。最佳工艺为:pH 5,45℃,蛋清体积分数8%,酶活1 125 U。此条件下对DPPH自由基清除率为53.273%。蛋清肽对羟自由基(0.308 4～1.542 mg/mL)、超氧阴离子自由基(0.089～0.443 mg/mL)具有一定的清除能力,清除率随其质量浓度的增大而增加,且具有一定的还原力。对羟自由基,VC的IC50=0.092 mg/mL,蛋清肽IC50=1.24 mg/mL,对超氧阴离子自由基,VC的IC50=0.021 6 mg/mL,蛋清肽的IC50=0.054 mg/mL。在0.667～10.667 mg/mL范围内,蛋清肽对脂质过氧化的抑制作用随其质量浓度增加而减小,在0.667～10.667μg/mL范围内反而具有促进脂质过氧化作用。蛋清肽等电点在pH 3左右,其对羟自由基清除率随温度增加逐渐下降;在pH 2～10范围内,其溶解度几乎成线性增加。     

冬瓜皮果胶的提取工艺研究

摘要：用单因素试验和正交试验研究了冬瓜皮果胶的提取工艺条件。结果表明：从冬瓜皮中提取果胶的最佳工艺条件为：pH值2．0、提取温度90℃、料液比1：6、提取时间1．5h,在此条件下冬瓜皮果胶的提取率达8．61％;四因素对冬瓜皮果胶提取率的影响程度大小依次为：pH值〉提取时间〉提取温度〉料液比。     

白胡椒抑菌活性物质提取工艺优化

研究白胡椒中抑菌活性物质的提取工艺,以大肠杆菌做指示菌,以提取率×抑菌直径为活性追踪指标,在单因素试验的基础上通过二次回归通用旋转组合设计进行工艺参数优化。结果表明其最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数81%,浸泡720min,提取80min。