固定化亚油酸异构酶制备及其性质

以海藻酸钠、壳聚糖为载体,分别采用直接包埋、交联-包埋法制备固定化亚油酸异构酶;研究酶的固定化条件和固定化酶的部分性质。结果表明：以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋法以戊二醛为交联剂时固定化效果较好;最佳固定化条件为：海藻酸钠质量浓度为3g/100mL,戊二醛质量浓度为0.3g/100mL,CaCl2质量浓度为2g/100mL;固定化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.0;与游离酶相比,固定化酶的热稳定性显著提高,温度在20～60℃之间较稳定,pH值在2～8之间表现出较好的酸碱耐受性;固定化亚油酸异构酶的Km为0.36mg/mL。连续操作6次固定化相对酶活力仍保持70.6%,与游离酶相比,固定化亚油酸异构酶催化效率约提高了50%。     

PVA-SA-活性炭共聚物固定脂肪酶的研究

以聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(SA)-活性炭共聚物为载体,对脂肪酶进行固定化.研究了活性炭浓度、酶初始浓度、缓冲液pH值、吸附时间及温度对固定化酶的活性及蛋白载量的影响.结果表明:在聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠凝胶中加入1 g/dL活性炭制成复合凝胶球,在25 ℃、pH值5.5的条件下对30 mg/mL的酶液吸附12 h,所得吸附固定化脂肪酶的活性较好.吸附固定的脂肪酶较游离酶的最适作用温度升高10 ℃,最适作用pH范围变宽,且向碱方向偏移0.2个单位.     

聚乙烯醇复合固定化植酸酶方法研究

分别以海藻酸钠、聚乙烯醇(PVA)及聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠复合凝胶为载体,对植酸酶进行固定化研究.结果表明,由于PVA复合凝胶的多孔性网状结构,有利于物质传递.海藻酸钠有助于阻止酶活力的漏失,包埋效果优于其他两种方法.植酸酶经过固定化后,机械性能和化学稳定性都得到提高,可以重复多次对植酸钠进行水解反应.同时对该自南酶和固定化酶进行酶学特性研究.发现自南酶和固定化酶的最适pH值分别为5.5和7.0,最适反应温度分别为45和60%.固定化酶的Km(20mg/mL)大于自由酶的Km(14 mg/mL).植酸酶红固定化,提高了酶的操作、温度和贮藏稳定性.     

海藻酸钠、卡拉胶联合固定化木瓜蛋白酶特性研究

以海藻酸钠、卡拉胶共混包埋制备固定化木瓜蛋白酶,并对木瓜蛋白酶固定化条件和固定化酶的部分性能进行了探讨.在海藻酸钠浓度1.5%、卡拉胶浓度0.8%、木瓜蛋白酶浓度1.0%、氯化钙浓度4.0%、固定化时间11h、固定化温度为35℃、固定化pH7.5的条件下,可以获得最佳的固定化效果,固定化酶活力回收率为56.27%.与游离酶相比,制备固定化酶的最适酶促反应pH由7.0降至6.5,最适酶促反应温度由40℃升至50℃,其作用温度范围、pH范围均比游离酶范围宽.     

纳米SiO2改性壳聚糖载体的制备及固定化壳聚糖酶的研究

利用壳聚糖与硅酸乙酯(TEOS)形成的溶胶-凝胶制备杂化载体,经戊二醛交联后固定化壳聚糖酶,结合扫描电镜观察、X射线衍射及红外光谱分析对杂化载体进行了表征,初步比较了固定化酶与游离酶的酶学特性。结果表明,以5%的戊二醛浓度交联载体时,固定化酶的活性最高;最大结合酶量为2mL(U=2.5);固定化酶的最适pH7.0,酶活曲线向碱性偏移;固定化酶的最适酶促反应温度比游离酶升高5℃,在更宽的温度范围内具有活性。通过Lineweaver-Burk作图得出固定化酶的K’m为10.64g/L,较游离酶1.29g/L有所升高。该固定化酶具有较强的热稳定性,重复使用10次后,酶活力损失小于30%;在4℃低温条件下,稳定性较好,半衰期约为28d。     

琼脂包埋法固定化酪氨酸酶的研究

在海藻酸钠、明胶等5种固定化载体筛选的基础上,研究了以琼脂作为载体材料,采用包埋法固定化酪氨酸酶,优化固定条件,并对固定化酶特性进行了研究。结果表明,最适固定化条件为3%的琼脂、固定化时间为2h。固定化酶的最适pH为7·0、最适温度为30℃、最适底物浓度为0·01mol/L。同时具有较好的反应稳定性和贮存稳定性,重复使用7次后其活力回收率仍达到68·3%,12d后该固定化酶的残余活力保留原酶活的75·4%左右。     

陶瓷覆聚乙烯醇——海藻酸钠膜固定化糖化酶的研究

用陶瓷颗粒吸附糖化酶后,再以不同配比的聚乙烯醇-海藻酸钠复合溶胶覆膜,分别对固定化条件、米氏常数、酶活残留率进行了研究,结果表明:陶瓷颗粒聚乙烯醇复合溶胶固定化糖化酶的条件是:聚乙烯醇:海藻酸钠配比为6∶4,溶胶浓度为7%,固化时间为120min。米氏常数为60.17mg/mL,酶活残留率为78%;陶瓷颗粒覆海藻酸钠复合溶胶固定化糖化酶的条件是:海藻酸钠∶聚乙烯醇配比是8∶2,溶胶浓度为1.5%,固化时间为90min。米氏常数为35.5mg/mL,酶活残留率为38%。     

蔗糖异构酶PalI包埋和交联固定化方法比较

采用海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法两种固定化方法,对来源于Klebsiella sp. LX3的蔗糖异构酶PalI的稳定性和可重复利用性进行研究。结果发现,海藻酸钠包埋法在海藻酸钠、CaCl_2质量分数为1.5%、2%时,所得固定化酶的酶活最高,其最适反应温度为40℃,最适pH值为6;戊二醛交联法在(NH_4)_2SO_4质量分数为90%,戊二醛体积分数为2. 5%时得到的固定酶酶活最高,交联酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为5,通过对酶的稳定性比较,两种方法酶稳定性都优于游离酶。4℃保存20 d后游离酶的酶活降低到30%,而戊二醛交联酶活性在95%以上,海藻酸钠固定化酶残余酶活仍在60%左右。戊二醛交联法固定酶活性优于海藻酸钠固定化酶,重复利用12次戊二醛交联酶,其残余酶活仍为80%。     

海藻酸钠-琼脂混合固定化重组右旋糖酐蔗糖酶的研究

以海藻酸钠和琼脂混合物作为载体对右旋糖酐蔗糖酶固定化条件及其特性进行研究,结果表明:4%海藻酸钠和1%琼脂按1:1(V/V)混合后作为载体制备的微球固定化酶表现出持续高活力,在第6批次转化率仍在40%左右;海藻酸钠-琼脂混合载体与酶液体积比为2:1时固定化酶表现出的转化率最高;得到的固定化酶最适反应温度为40℃;最适反应pH值为5.4;最适底物质量浓度为5g/100mL蔗糖;35℃保温1h后剩余酶活力为原来的44%,固定化酶比游离酶的热稳定性好;固定化酶的动力学常数Km=0.02835mol/L。     

磷脂酶固定化方法的研究

分别采用海藻酸钠、海藻酸钠-壳聚糖和海藻酸钠-明胶固定化磷脂酶,研究发现固定化磷脂酶最适反应温度比游离酶提高10℃左右,反应适宜pH范围明显变宽.海藻酸钠-壳聚糖固定化磷脂酶的热稳定性最好,操作稳定性由强至弱为海藻酸钠-明胶固定化酶、海藻酸钠-壳聚糖固定化酶、海藻酸钠固定化酶,重复使用4次后酶相对活力分别为80%、80%和50%.固定磷脂酶的最佳载体为海藻酸钠-壳聚糖.