魁蚶防卫素分离纯化及其抑菌作用的研究

以魁蚶血浆为原料,经磷酸缓冲液抽提、75%饱和度硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析等步骤,获得了魁蚶防卫素。经SDS-PAGE检测,魁蚶防卫素分子量为76·2kDa。对魁蚶防卫素进行抗菌活性检测发现,魁蚶防卫素对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和产气杆菌均有较强的抑制作用。      

不同地理群体魁蚶的营养成分比较研究

分析和评价山东即墨、辽宁庄河、江苏连云港3个不同地理群体魁蚶的营养成分。用常规方法检测魁蚶软体部的一般营养成分,用氨基酸分析仪检测氨基酸组成;用气相色谱法检测脂肪酸成分。结果表明:蛋白质含量和能值以江苏连云港群体最高;碳水化合物以辽宁庄河群体最高;氨基酸的组成非常全面,各地理群体魁蚶干物质中氨基酸总量由高到低的变化顺序为山东即墨(719.75mg/g)>江苏连云港(703.54mg/g)>辽宁庄河(685.16mg/g);EAA/TAA比率在34.72%～34.91%之间,必需氨基酸指数IEAA以山东即墨群体最高;呈味氨基酸的含量较高,变化范围为276.92～293.21mg/g;脂肪酸中ω3脂肪酸相对含量高;钙、铁、锌、硒等矿物元素和维生素含量丰富。不同地理群体的魁蚶营养成分虽存在一定差异,但与其他一些双壳贝类相比,魁蚶是营养价值较高的海洋食品。     

魁蚶加工副产物中牛磺酸含量测定方法的建立和优化

目的建立和优化分光光度法检测魁蚶中牛磺酸含量的方法。方法以吸光度为响应值,研究显色剂、显色时间、显色温度各因素的交互作用及对牛磺酸回收率的影响,确定分光光度法测定魁蚶加工副产物牛磺酸含量的最优条件。结果本方法的线性检测范围为20~300μg/mL,检测条件如下:显色剂为乙酰丙酮:37%甲醛:1 mol/L乙酸钠(1:0.3:4,V:V:V),显色时间9 min,显色温度60℃,检测波长330 nm。结论该法重现性好、操作简单、检测时间短,可用于魁蚶等贝类中牛磺酸含量的测定。     

小红豆抗菌蛋白的分离纯化及其功能活性

研究旨在从小红豆中分离纯化得到一种具有抗菌活性的蛋白,对其部分生物活性进行表征和研究。通过缓冲液抽提（NaAc-HAc,20 mmol/L,pH5.4）、硫酸铵分级沉降、Affi-gel blue gel亲和色谱、Sephadex SP C-25离子交换色谱及Sephadex G-50凝胶过滤色谱进行分离纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析鉴定其相对分子质量,并对其抗真菌活性进行表征。结果表明,从小红豆中分离纯化出的一种抗菌蛋白,经SDS-PAGE鉴定达到电泳纯,且其相对分子质量约为4 kDa,通过纯化的抗菌蛋白对来自茄子、甜瓜及苦瓜的尖孢镰刀菌的抑制实验,证明此抗菌蛋白具有较强的抗真菌活性。从小红豆中分离纯化出的一种分子质量约为4 kDa的抗菌蛋白,其对真菌具有抑制作用,且其抑制率对浓度的依赖性较高。      

鸭小肠抗菌肽的分离纯化及抗菌活性研究

为了探究鸭肠道抗菌肽的高效提纯方法和抗菌活性,本研究将新鲜鸭肠黏膜破碎,高温处理,乙酸浸提后,再经超滤和Sephadex G50凝胶过滤层析,收集各组分并用琼脂糖弥散法检测抑菌活性。同时,采用TricineSDS-PAGE测定其主要抗菌肽的分子量。结果表明:采用\     

梓树根皮总黄酮分离纯化及其抑菌活性研究

以吸附率和解析率为评价指标,用大孔树脂对梓树根皮总黄酮的分离纯化工艺进行优化,并研究纯化后梓树根皮总黄酮的抑菌活性。结果表明,梓树根皮总黄酮分离纯化最佳工艺条件为:采用NKA-II树脂,上样液质量浓度0.538mg/mL,上样液流速1.66 mL/min,上样液pH值4.01,洗脱剂乙醇浓度70%,洗脱流速2.5 mL/min。该条件下,梓树根皮总黄酮纯度为(77.43±0.23)%,吸附率为(93.36±0.25)%,解析率为(95.51±0.17)%。抑菌活性表明,梓树根皮总黄酮对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌作用为极敏,对青霉菌、酿酒酵母菌抑菌作用为高敏;金黄色葡萄球菌的MIC值为(6.25±0.25)mg/mL;枯草芽孢杆菌、大肠杆菌MIC值为(12.50±0.36)mg/mL;酿酒酵母、青霉菌,MIC值为(25.00±0.27)mg/mL。     

韭菜汁分离成分的抑菌作用研究

用D-101大孔树脂吸附层析法对韭菜汁进行初步分离,对韭菜原汁及其分离成分进行平板法体外抑菌实验。结果表明：韭菜汁对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等4种供试菌都有抑制作用;大孔树脂分段分离成分中,蒸馏水洗脱成分对供试菌无抑菌能力,体积分数50%乙醇洗脱前段对4种供试菌均有较强的抑菌作用,体积分数95%乙醇洗脱段对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用。     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

发酵鹅肝肽的分离纯化及其抗氧化特性研究

为了提高普通鹅肝的综合利用价值,本研究利用解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）混合发酵制备鹅肝肽,采用Sephadex G-25凝胶层析法分离纯化出发酵鹅肝肽,并对其分离组分进行氨基酸分析和功能特性研究（抗氧化活性、金属螯合率测定）,最后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）测定高活性组分的相对分子质量。结果表明:Sephadex G-25凝胶层析依次出现P1、P2、P3三个峰;其中P3的必需氨基酸含量（70.32±5.35）mg/100 g明显高于P1（40.06±2.04）mg/100 g和P2（55.39±2.56）mg/100 g,含硫氨基酸（Met、Cys）和疏水性氨基酸（Val、Ile、Leu、Phe、Ala）分别占总氨基酸含量的17.78%和31.31%,均高于P1（8.18%,21.46%）、P2（6.63%,21.53%）。P1、P2、P3均具有较强的抗氧化能力。其中P3的TBRAS值为0.2495±0.016显著低于P1、P2（p<0.01）,抑制羟自由基能力,Fe2+螯合率和Cu2+螯合率分别为75.75%±0.49%、72.40%±0.80%和69.04%±0.40%,均显著高于P1、P2（p<0.05）;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定P3的相对分子质量范围在1.02 ku以下。      

黑曲霉抗菌活性组分分离研究

黑曲霉(Aspergillus niger)是曲霉属黑曲霉群霉菌,为低等真核生物。黑曲霉是集安全和具有许多活性强大酶系等诸多优点于一身的优良工业发酵用菌种。前期研究分离得到一株黑曲霉Aspergillus niger xj,其液体培养代谢物对根癌农杆菌、青枯雷尔氏菌、腐霉等常见农业病原菌有抑制作用。本文对黑曲霉的抗菌活性组分分离研究进行简要综述,对于进一步开发和利用黑曲霉这一真菌资源,研究开发新型的环境友好微生物杀菌剂具有较大的理论和实践意义。     

一株具有抗菌活性芽孢杆菌HN-7的分离及抗菌活性研究

研究采用琼脂平板扩散试验,以单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogene）54002为指示菌,从湖南传统发酵豆制品中筛选 出1株对其具有明显抑制作用的芽孢杆菌（Bacillus sp.）HN-7,通过酸碱稳定性、酶敏感性、热稳定性及紫外稳定性试验,可初步推测 该抑菌物质是脂肽。 研究结果表明,菌株HN-7所产抗菌肽抑菌谱较宽,耐热、耐酸性强,对单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、藤黄微球菌（Micrococus luteus）,枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 都具有抑制作用,并在121 ℃处理20 min、pH 2.0～12.0条件下仍具有抑菌活性。     

桃果实褐腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其拮抗活性

以桃褐腐菌(Monilinia fructicola)为靶菌,采用稀释分离法和平板对峙法从桃园土壤中筛选出对病原菌有较强拮抗作用的菌株12a和14b。通过离体和活体实验对拮抗菌抑菌活性进行研究,经菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析进行菌株鉴定。结果表明:菌株12a和14b分别鉴定为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)和高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis),其无菌发酵滤液和挥发性代谢产物对桃褐腐菌的生长有显著的抑制作用,其中12a挥发性代谢产物对其菌丝生长的抑菌效果更为显著(p<0.05)。两株拮抗菌的菌液浸泡和熏蒸桃果实,延缓了桃褐腐病发病时间,有效地控制了病斑的扩展。      

Preparation of water-soluble chitosan from shrimp shell and its antibacterial activity

Crude chitosan was prepared from shrimp shell by HCl, NaOH and ethanol solution successively. Hydrogen peroxide was used to degrade the crude chitosan into water-soluble chitosan. A mathematical model between degradation conditions (H₂O₂ level, time and temperature) and the recovery of water-soluble chitosan was constructed using response surface methodology. Each factor showed a significant effect on the recovery. The model was confirmed to have a good fitness by analysis of variance. The optimal conditions to obtain the highest recovery of water-soluble chitosan were 5.5% of H₂O₂ level, 3.5 h of time and 42.8 °C of temperature. The predicted recovery was 93.5%. Through testing the number of colony, both crude and water-soluble chitosan showed good inhibition activities against B. subtilis. By determination of inhibition zone diameter, water-soluble chitosan showed significantly (P < 0.05) higher inhibition capabilities against E. coli, B. subtilis and S. aureus than crude chitosan.Industrial relevanceChitin is the second abundant polymer next to cellulose over the world. Its deacetylated product, chitosan, is an important ingredient in medicine and food. However, the low solubility in water limits the application of chitosan. In this work, the chitosan was degraded by H₂O₂ to produce water-soluble chitosan. Response surface methodology was taken to construct a model between degradation conditions and the recovery of water-soluble chitosan. By determination of the antibacterial activity, water-soluble chitosan showed better antibacterial activity than crude chitosan without degradation treatment. The results indicated the high potential of water-soluble chitosan as an antibacterial agent. This work was helpful for applying this product in industry.     

一株曲拉源短乳杆菌的分离及其体外抑菌特性分析

摘要：目的 天然牦牛乳曲拉中蕴含着大量的乳酸菌，为丰富食品发酵的有益菌种资源，本试验分离筛选具有抑菌活性的乳酸菌。方法 以西藏牦牛乳曲拉为分离基质，MRS(De Man Rogosa Sharpe)加上1%CaCO3为选择鉴别培养基，运用形态学观察、生理生化试验、16S r RNA基因序列、药敏试验对分离菌株进行菌种鉴定，通过抑菌试验探究其抑菌活性。结果 分离菌株NWMCC0322被鉴定为短乳杆菌，其对青霉素类、四环素类、大环内酯类、酰胺醇类、喹诺酮类、磺胺类、头孢类药物敏感，对多烯类药物中敏。NWMCC0322对指示菌金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好，其抑菌圈直径达12.0±0.6 mm，其次为甲型副伤寒沙门氏菌11.3±0.3 mm，大肠杆菌11.0±0.5 mm。结论 该短乳杆菌对食品污染常见菌株具有抑菌效果，在食品发酵中有较好的应用价值。     

藠头抗菌成分的复合酶法提取及其抑菌性能评估

目的 采用复合酶法提取藠头的天然活性成分,并研究其抑菌性能。方法 以提取到的藠头天然活性成分对大肠杆菌的抑菌效果为评价指标,通过响应面设计获得果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶的最适复合酶添加量,并分析和评估藠头提取物的抑菌性。结果 当果胶酶的添加量为0.1%,纤维素酶的添加量为0.1%,木聚糖酶的添加量为0.5%时,提取物对大肠杆菌的抑菌效果最好。经实验验证复合酶法提取的提取物对大肠杆菌的抑菌圈直径为30.62 ± 0.48 mm,与预测值(30.02 mm)相符。复合酶解法提取的藠头提取物对大肠杆菌的24 h抑菌MIC为0.63%,MBC为1.25%;对金黄色葡萄球菌的24 h抑菌MIC为1.25%,MBC为2.5%;对白色念珠菌的24 h抑菌MIC为0.63%,MBC为1.25%。在1.25%浓度的藠头提取物胁迫下,大肠杆菌体内的丙二醛含量增加2倍,超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶这三个抗氧化酶活力降低,膜脂质过氧化加剧,细胞开始凋亡。结论 响应面法分析所得的复合酶提取藠头提取物的工艺参数准确可靠,蕌头提取物的广谱抗菌作用应用前景广阔,可以被开发成为天然食品防腐剂。     

1株具广谱抑菌活性的乳酸乳球菌的分离鉴定与保鲜效果

为开发出新型冷却肉保鲜剂,从土壤中分离到1株具有较宽抑菌谱的乳酸菌,对冷却肉上7种常见的腐败和致病菌有明显的抑菌活性,包括热死环丝菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、乳酸乳球菌、荧光假单胞菌、致病性大肠杆菌和沙门氏菌,并且排除了因产乳酸和过氧化氢而具备抑菌作用的可能性。根据细胞形态、菌落形态、生理生化反应特性和16Sr DNA序列和具菌株特异性的N-乙酰胞壁酸水解酶基因序列的比对分析,这株菌被鉴定为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis),命名为NFL。菌株NFL发酵液中的抑菌物质对热有极强的耐受性,在121°C的灭菌温度下处理90 min抑菌活性基本不变。经121℃下灭菌20 min的菌株NFL发酵上清液对托盘包装冷却猪肉具有明显的保鲜效果,尤其是可显著减少腐臭味。     

Isolation and identification of pentagalloylglucose with broad-spectrum antibacterial activity from Rhus trichocarpa Miquel

Rhus trichocarpa Miquel has been utilised both as a food and for medicinal purposes. In this study, we determined that the methanol extracts of the stem and leaf portions of R. trichocarpa inhibited the growth of both Gram-negative and Gram-positive bacteria. The active constituent was isolated, and identified via mass spectrometry and NMR as 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-d-glucose. The compound also evidenced a broad spectrum of antibacterial activity against both Gram-negative and Gram-positive bacteria including Staphylococcus aureus (both methicillin-resistant S. aureus and quinolone-resistant S. aureus), Bacillus subtilis, Streptococcus mutans, Escherichia coli, Salmonella typhimurium, and Pseudomonas aeruginosa with MRC values of 16–32 μg/ml, whereas gallate failed to inhibit the growth of Gram-negative bacteria, even at a concentration of 128 μg/ml. The antibacterial activity of penta-O-galloylglucose was restored by the addition of Fe²⁺, whereas gallate was not, thereby indicating that its antibacterial activity could be attributable to the chelation of iron. The results of the time-kill study against S. aureus and E. coli revealed that penta-O-galloylglucose exhibited bacteriostatic activity. These findings indicate that the extracts of R. trichocarpa as well as its active component, penta-O-galloylglucose, may have profound potential for the control of both Gram-positive and negative pathogens.     

扬州稀甜酱中乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性初探

以扬州稀甜酱为研究对象,采用经典乳酸菌筛选法从样品中分离、纯化乳酸菌,采用形态学观察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对乳酸菌进行鉴定,并采用牛津杯法对发酵滤液的抑菌活性进行研究。结果表明,从扬州稀甜酱中共分离、纯化出33株乳酸菌,其中15株菌株被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,12株菌株被鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）,4株菌株被鉴定为类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）,2株菌株被鉴定为酸鱼乳杆菌（Lactobacillus acidipiscis）,屎肠球菌和乳酸片球菌为扬州稀甜酱中的优势乳酸菌。乳酸片球菌TJ17和TJ31发酵滤液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）均有明显的抑制作用,且乳酸片球菌TJ31抑菌效果较好。     

对羟基苯甲酸异丁酯的合成及抑菌活性

以NaHSO4·H2O为催化剂合成了对羟基苯甲酸异丁酯,单因素法确定了最佳的反应条件,抑菌实验表明,该产品具有较强的抗菌活性。