青霉素酰化酶制备光学纯β-苯丙氨酸的HPLC分析

建立了青霉素酰化酶制备光学纯β-苯丙氨酸(BPA)过程中各成分的HPLC分析方法。用ZorbaxXDB-C18柱在流动相为含35%(v/v)乙腈的7mmol/LpH3.0磷酸缓冲液(含SDS0.68g/L),流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为210nm等条件下,四种物质苯乙酰胺、BPA、N-苯乙酰-BPA、苯乙酸可以被有效分离,且在≤0.2mg/mL浓度下,四种物质含量与出峰面积均呈良好的线性相关。用ChirobioticT和ChirobioticR手性柱分别对手性物质N-苯乙酰-BPA和BPA的对映异构体进行了分离检测,并确定了最佳的洗脱条件。     

乳饮料中乙酰磺氨酸钾的测定

目的:建立高效液相色谱法测定乳饮料中乙酰磺胺酸钾的检测方法.方法:选用乙腈和适当的沉淀剂对样品处理,对检测条件进行了优化.结果:在0.02mol/L硫酸铵:甲醇:乙腈(870/100/30,v/v/v)为流动相,流速0.8mL/min,检测波长214nm的条件下,样品中的乙酰磺胺酸钾可得到很好的分离.     

钛胶反相高效液相色谱法测定饮料中的柠檬酸

建立了钛胶反相高效液相色谱法测定饮料中酸味剂柠檬酸含量的快速检测方法.色谱条件:分离柱为Titania Sachtopore-RP柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为水∶甲醇=60∶40 (v/v)、流动相中含磷酸盐3mmol/L,流速0.SmL/min,柱温60℃,检测波长210nm.线性范围为0.02mg/mL～8.0mg/mL,检出限2.4μg/mL (3σ),回收率为92.79％～99.30％,RSD (n=8) ＜0.72％.准确度和精密度均可满足饮料中柠檬酸的测定要求.     

一种简化方法测定果蔬汁饮料中脱氢乙酸含量

建立一种简化的脱氢乙酸含量测定方法.将同一样品液分别使用C18(碳十八)固相萃取柱和C18硅胶粉净化,取净化后样品液上机测定.采用C18柱(150mm×4.6mm,5μm)为分离色谱柱,以甲醇-0.02mol/L乙酸铵(10:90,v/v)为流动相,柱温30℃,流速1.0mL/min,检测波长293nm.两种方法检测结...     

奶粉中N-乙酰神经氨酸的检测

建立一种高效液相色谱荧光测定奶粉中N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)含量的分析方法。该方法利用酸水解释放出奶粉中的Neu5Ac,用邻苯二胺盐(OPD)作为衍生化试剂,80℃避光衍生100 min,采用高效液相色谱荧光检测。色谱条件为:用Thermo Hypersil GOLD柱(250mm×4.6mm, 5μm)分离;流动相选择超纯水-乙腈作为梯度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0mL/min;进样体积为10μL;荧光检测器激发波长为337 nm,发射波长为448 nm。结果表明:N-乙酰神经氨酸在0.5～200μg/g范围内线性关系良好(R~2=0.9994),回收率为98%～119%,检出限为0.5μg/g。该方法具有灵敏度高,重复性好等特点,可准确测定市售奶粉中N-乙酰神经氨酸的含量。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定母乳及婴儿配方粉中的唾液酸

该文建立了高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测母乳和婴儿配方粉中常见唾液酸N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid, Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolyl neuraminic acid, Neu5Gc)的方法。利用酸水解法释放母乳和婴儿配方粉中的唾液酸,用离子色谱前处理柱纯化婴儿配方粉水解液。采用Dionex CarboPac PA20高效阴离子色谱柱分离,以NaOH和乙酸钠为淋洗液进行梯度洗脱,流速0.5 mL/min,进样体积10μL,柱温30℃,脉冲安培检测器检测,优化了酸水解时间和婴儿配方粉纯化条件。所测2种组分在该实验条件下能够很好的分离,且在较宽的浓度范围内离子峰面积呈良好的线性关系(R²>0.999)。Neu5Ac和Neu5Gc的检出限分别为3和2μg/L,定量限为10和6μg/L。母乳和婴儿配方粉的加标回收率在87.65%～102.33%,稳定性的相对标准偏差在1.86%～5.21%。该方法样品处理简单,具有较低的检出限与定量限,较宽的线性范围,较好的稳定性,良好的重复性与回收率,能广泛用于乳基唾液...     

高效液相色谱法同时测定食品接触材料水性模拟物中三聚氰胺和苯代三聚氰胺

建立了食品接触材料水性模拟物中三聚氰胺和苯代三聚氰胺的高效液相色谱(HPLC)分析方法。样品根据拟装食品类型不同,经水、3%(w/v)乙酸水溶液、4%(v/v)乙酸水溶液、10%(v/v)乙醇水溶液、20%(v/v)乙醇水溶液或50%(v/v)乙醇水溶液6种不同水性模拟物提取,0.45μm滤膜过滤后直接由高效液相色谱分析。色谱分离采用强阳离子交换与反相C18混合填料分析柱(混合比例1∶4),柱温35℃,流动相为乙腈-20mmol/L乙酸铵缓冲溶液(pH3.0)(40∶60,v/v),流速为0.2mL/min,检测波长为240nm。结果表明:在优化的条件下,三聚氰胺和苯代三聚氰胺标准品在0.2~20mg/L浓度范围内,线性相关系数为0.9997~0.9999,方法定量限(S/N10)为0.015~0.033mg/dm2。在0.025~0.70mg/dm2三个水平加标测试,平均回收率在80.0%~103.3%之间,相对标准偏差(n=6)为0.5%~4.0%。该方法前处理简单、分析速度快,可用于食品接触材料水性模拟物中三聚氰胺和苯代三聚氰胺的同时检测。     

高效液相色谱-串联质谱法测定母乳中的 N-乙酰神经氨酸

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定母乳中N-乙酰神经氨酸的分析方法。方法用盐酸对样品进行酸水解释放出母乳中的结合态N-乙酰神经氨酸,高速离心后,采用C_(18)柱进行分离。以0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾质谱检测,正离子多反应监测模式(MRM)进行定性和定量分析。结果在优化的条件下,N-乙酰神经氨酸在0.01~0.5 mg/L范围线性关系良好(r=0.9997)。以10、50、100 mg/kg 3个添加水平进行加标回收试验,N-乙酰神经氨酸的平均回收率为95.0%~98.7%,相对标准偏差为11.6%~14.5%,N-乙酰神经氨酸的检出限为0.21μg/kg。结论该方法简单、快速、重复性好、灵敏度高,可广泛用于母乳中N-乙酰神经氨酸的测定。     

HPLC-ELSD法同时测定饮料中四种高倍甜味剂的含量

为建立高效液相色谱法同时检测饮料食品中4种高倍甜味剂的方法,样品经水溶后超声波振荡提取,Inertsil C18色谱柱(250mm×4.6mm;5μm)分离,甲醇:水(43:57)(v/v)流动相洗脱,流速:1mL/min;柱温:25℃;蒸发光散射检测器检测器条件:漂移管温度:85℃;气体压力:25psi;雾化器温度:25.2℃.进样量20μL.结果表明:安赛蜜、甜蜜素、三氯蔗糖和阿斯巴甜进样量0.110mg/mL的范围线性良好,相关系数分别为相关系数均为0.9947、0.9993、0.9998、0.9976.检出限分别为8.8μg/mL、4.0μg/mL、3.2μg/mL、1.4μg/mL:样品平均回收率在98.30%99.00%之间,RSD%<1.63%.本方法可同时对三氯蔗糖、甜蜜素、安塞蜜和阿斯巴甜等四种高倍甜味剂的分离与检测,该方法灵敏度高,重复性好,为快速检测食品中的高倍甜味剂提供了技术支持.     

重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体蛋白的柱上复性

N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAO)具有广泛的底物选择性,可用于多种活性氨基酸的酶法拆分,具有广阔的工业应用前景。文中采用多种洗涤剂对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行洗涤去杂,并用DEAE Sepharose Fast Flow层析柱和三缓冲体系作为复性系统对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行复性实验。结果表明,4mol/L尿素与0.5%Triton X-100联合洗涤可以大量去除杂质;三缓冲体系能有效地实现重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的柱上复性。在流速为0.5 mL/min,尿素梯度为21 mL,尿素终浓度为1.8mol/L,蛋白质上样量为0.99 mg的实验条件下,蛋白回收率和复性酶比活分别达到52%和10.27 U/mg。     

RP-HPLC同时检测发酵液中7-脱氢胆固醇与胆固醇的研究

7-脱氢胆固醇是维生素D3的直接前体,试验研究了RP-HPLC同时检测发酵液中7-脱氢胆固醇及其前体胆固醇的方法和条件.应用Waters sunfire C18(φ416×150 mm,5μm)色谱柱,乙腈异丙醇=80:20(v:v)为流动相,1.0mL/min流速,38℃柱温,于波长210 nm紫外检测器检测.在此条件下,7-脱氢胆固醇和胆固醇呈现较好的分离和重现性,其保留时间分别为8.248min和9.598min左右,最低检测浓度分别为8mg/L和10 mg/L,平均回收率分别为99.53%和97.67%.     

N-乙酰氨基葡萄糖月桂酸酯的非水相催化合成及其抗菌性的初探

研究了非水相酶催化合成N-乙酰氨基葡萄糖月桂酸酯的反应条件,并对其抑菌性进行了探索.对影响合成N-乙酰氨基葡萄糖月桂酸酯反应的因素(DMF的含量、温度、反应时间、底物摩尔比、加酶量)进行了探讨.结果显示,N-乙酰氨基葡萄糖月桂酸酯合成反应的最佳溶剂为叔丁醇和DMF的混合溶荆,摩尔比为叔丁醇:DMF=7:3,在此溶剂条件下,在酸糖摩尔比为3:1,糖浓度为lmmol/L,反应温度为60℃,反应时间为48h,加酶量为20mg/mL时,产率达到最高.N-乙酰氨基葡萄糖月桂酸酯抑茵性的研究结果显示,该物质对革兰氏阳性茵的抑制性稍强,而对酵母基本无抑制作用.     

高效液相色谱法测定茴三硫片的有关物质

目的 建立用HPLC测定茴三硫片中茴三硫有关物质的方法.方法 用Agilent XDBC18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(80:20),检测波长351 nm,柱温35℃,流速1.0mL/min,进样量10μL.结果 在此色谱条件下,茴三硫有关物质与主药有效分离,检测限0.12 ng(S/N≥3).结论 本方法简便、准确、耐用性良好,可用于茴三硫片中茴三硫有关物质的检测.     

重组大肠杆菌全细胞催化法生产N-乙酰神经氨酸

N-乙酰神经氨酸具有多种生物学功能,在食品添加剂和药物合成等方面有着重要的应用。为了降低成本,作者利用重组大肠杆菌,并以含有N-乙酰葡萄糖胺的发酵液为底物进行全细胞催化生产N-乙酰神经氨酸。结果表明,在温度为30℃、转化液初始pH为6.5、底物丙酮酸浓度为1.38 mol/L、Triton X-100添加质量分数为0.4%、菌体OD₆₀₀为30的条件下在5 L发酵罐等条件下进行全细胞转化,可以得到N-乙酰神经氨酸180 mmol/L,摩尔转化率为65.45%。用阴离子树脂对产物进行初步分离纯化,经高效液相色谱分析证实纯化后产品为高纯度N-乙酰神经氨酸,其纯度为98.3%,结晶回收率为42.5%。作者建立并优化了一种以含有N-乙酰葡萄糖胺的发酵液为底物直接进行全细胞催化生产N-乙酰神经氨酸的工艺流程,既节约了成本,又具有可持续发展的优势。     

高效液相色谱法测定茴三硫片的有关物质

目的 建立用HPLC测定茴三硫片中茴三硫有关物质的方法.方法 用Agilent XDBC18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(80:20),检测波长351 nm,柱温35℃,流速1.0mL/min,进样量10μL.结果 在此色谱条件下,茴三硫有关物质与主药有效分离,检测限0.12 ng(S/N≥3).结论 本方法简便、准确、耐用性良好,可用于茴三硫片中茴三硫有关物质的检测.     

营养强化剂乙二胺四乙酸铁钠中氨基三乙酸的检测方法研究

建立了用反相离子对液相色谱分离和测定营养强化剂乙二胺四乙酸铁钠(NaFeEDTA)中氨基三乙酸(rcrA)的方法.该方法将样品与二价铜盐进行络合后,以Zorbax C8(4.6mm×150mm,51.μm)色谱柱作为固定相,含10%(v/v)甲醇、0.2%四丁基氢氧化铵(TBAOH)和pH为7.3的磷酸水溶液作为流动相,流速为2.00mL/min进行分离,在紫外波长244nm下检测.NaFeEDTA中NTA检测的平均回收率为97.5%,最低检出限为20ms/kg.本方法灵敏、准确.可以用于NaFeEDTA中NTA的检测.     

分散液相微萃取-液相色谱法测定奶瓶中的双酚A

建立了分散液相微萃取提取婴儿奶瓶中溶出痕量双酚A(BPA)的方法,并用高效液相色谱测定了其含量。奶瓶浸泡液用0.5 mL氯仿作萃取剂,0.5 mL甲醇作分散剂,以3 500 r/min离心10 min,吸取萃取剂20μL,进样,采用高效液相色谱法(HPLC)测定BPA的含量。色谱柱为Inertsil C18柱(5μm,4.6×150 mm),流动相为甲醇∶水(V∶V)=70∶30,流速为0.8 mL/min,检测波长为280 nm。该方法 BPA在0.05 mg/L~0.25 mg/L范围内线性关系良好(R=0.999 7),BPA检出限(S/N=3)为0.50μg/L。该法用于婴儿奶瓶中BPA含量的检测,测得婴儿奶瓶中双酚A的含量范围在0~18.93μg/L,平均加标回收率为96.44%,RSD为4.57%(n=4)。方法结果满意,可适用于婴儿奶瓶、矿泉水等食品和饮料容器中溶出BPA的含量测定。     

HPAEC-PAD测定乳清粉和乳粉中唾液酸的含量

建立了一种简便、快速同时测定乳清粉和乳粉中N-乙酰神经氨酸（Neu5Ac）和N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc）的离子色谱分析方法。利用单因素变量法对酸解条件进行优化,借助固相萃取柱去除杂质干扰和溶剂转换,采用外标法定量。试验结果表明：采用0.05mol/L的硫酸溶液80℃水解1h,Dionex CarboPac PA20作为色谱柱洗脱,效果较为理想。N-乙酰神经氨酸（Neu5Ac）和N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc）分别在0.03μg/mL～3μg/mL、0.00208μg/mL～0.208μg/mL内线性关系良好,样品平均回收率在96.6%～101.2%之间,重复性试验RSD值均小于5%。本方法简便、分析速度快、检测灵敏度高、重复性好、结果准确可靠,适用于乳清蛋白粉和奶粉中N-乙酰神经氨酸（Neu5Ac）和N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc）的含量测定。     

发酵食品中多种防腐剂检测方法的建立

该实验建立了高效液相色谱法同时测定苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的方法。在以C18柱为分离柱,流动相为甲醇-0.020 mol/L乙酸铵（20∶80,V/V）,色谱柱温为25 ℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为220 nm条件下,12 min内可实现苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的分离。该方法在0.25～50.00 mg/L范围内具有良好的线性关系（相关系数R2＞0.998）,检出限（LOD）＜50.00 ng/mL,回收率为96.93%～118.42%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为0.39%～6.21%。该方法操作简便、结果准确度高,可用于发酵食品中苯乳酸、苯甲酸和山梨酸的同时分析检测。     

高效液相色谱法测定无糖乳制品中4种高倍甜味剂的含量

为建立高效液相色谱法同时分离测定无糖乳制品中多种高倍甜味剂的含量,样品提取净化后,AtlantisT3C18色谱柱分离,甲醇:0.02mmol/L的硫酸铵溶液(v:v)=45:55等梯度洗脱,流速0.8mL/min,柱温30℃,二极管检测器205nm检测,进样量20μL。结果表明:糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜、甜蜜素4种甜味剂均能很好分离,糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜在浓度为1.00～20.0μg/mL,甜蜜素在浓度为0.05～0.5μg/mL范围内呈良好线性关系,RSD为1.7%～5.83%,平均加标回收率为85%～108%。该方法可同时对食品中的4种高倍甜味剂进行分离与检测,该方法灵敏度高,重复性好,为快速检测无糖乳制品中的高倍甜味剂提供技术支持。