肽类藻毒素液质联用检测研究进展

介绍了微囊藻毒素（MCs）和结球藻毒素（NOD）的结构与毒性。相比于其他方法,在检测肽类藻毒素的应用上,液质联用法（LC-MS）具有操作简单,检测限低,可有效分析组分结构等优点。对检测过程中提取、纯化、分离和检测等重要步骤的适合条件和方法特点以及质谱检测方法前景进行了评述。      

藻毒素的危害及分析方法进展

随着水休污染和富营养化程度的加剧，藻类“水华”危害日趋严重，本文简述了淡水中藻毒素的产生、化学结构及毒性机理，重点综述了检测藻毒素的各类分析方法以及最新的研究进展，尤其对目前国内外广泛应用的灵敏、高效的色谱分析方法(如HPLC／MC，GC／TMS／MS／CE)和更快速、更有效的免疫分析方法进行了详细的综述，提出了开发更新的仪器分析技术、生化分析技术、生物传感器等，及操作更简便、特异性更强、检测速度更快捷的免疫检测技术是今后藻毒素分析方法的发展方向。     

高效液相色谱-二极管阵列检测法和超高效液相色谱-串联质谱法检测鱼腥藻毒素的比较研究

目的比较高效液相色谱-二极管阵列检测法(high performance liquid chromatography-photodiode array detector, HPLC-PDA)和超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)对鱼腥藻毒素的检测。方法样品经酸性甲醇提取后使用超滤管去除杂质,采用HPLC-PDA和UPLC-MS/MS检测样品中鱼腥藻毒素AnTX-a及HAnTX-a的含量。结果 2种方法均能有效分离分析AnTX-a及HAnTX-a,且均能排除样品中L-苯丙氨酸的干扰。HPLC-PDA检测法对AnTX-a及HAnTX-a的检测限分别为0.052和0.070μg/mL;UPLC-MS/MS检测法对AnTX-a及HAnTX-a的检测限均为0.010 ng/mL。结论 2种方法准确、灵敏度高, UPLC-MS/MS较HPLC-PDA检测法具有高灵敏度、高检测效率的优势,但HPLC-PDA检测法更具普遍适用性。     

环介导等温核酸扩增技术快速检测产毒亚历山大藻

DNA环介导等温扩增(LAMP)方法是一种新型的核酸扩增技术,该方法是在等温的条件下进行的,具有反应时间短、灵敏度高、特异性强的特点.本文以产麻痹性贝毒(PSP)的亚历山大藻为研究对象,采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,利用LAMP技术进行产毒藻种的快速检测,同时,着重对LAMP技术与PCR技术在检测微小亚历山大藻细胞的灵敏度方面做了比较.向LAMP终产物中加入SYBR Green I 染料后可直接用肉眼观察结果而不需要通过凝胶电泳来观察.结果表明,LAMP技术在恒温65℃,1h内就可以检测到产毒藻种;LAMP技术检测微小亚历山大藻的最低检测限为200个/ml,而PCR技术的最低检测限为1000个/ml,LAMP扩增方法比PCR扩增方法的程序简单、反应时间短、灵敏度高;LAMP技术不需要精密的温度循环装置,有恒温加热设备就可以满足检测条件,可用于野外检测.     

同时检测淡水鱼加工中土霉素和微囊藻毒素(MC-LR)残留量

目的:土霉素是限制我国淡水鱼深加工产品出口的关键抗生素之一;此外,由于水污染加重,淡水鱼中藻毒素残留问题也很严重。研究和开发同时快速检测技术已成为当前急需解决的问题。方法:鲫鱼鱼肉进行不同前处理,利用高效液相色谱测定毒素残留量。结果:土霉素和微囊藻毒素的最低检测限分别为0.1μg/kg、5ng/L。质量浓度范围0.1⁵.0μg/mL的土霉素、微囊藻毒素标准品制备标准曲线,线性关系较好,相关系数分别为0.995、0.998。精密度分别为1.82%、1.68%;回收率范围分别88.1%5.0μg/mL的土霉素、微囊藻毒素标准品制备标准曲线,线性关系较好,相关系数分别为0.995、0.998。精密度分别为1.82%、1.68%;回收率范围分别88.1%¹02.8%、90.6%102.8%、90.6%¹05%。结论:对比酶联免疫反应试剂盒的检测,2种方法结果没有太大差别。     

T-2毒素的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

以时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法建立快速灵敏的T-2毒素的全自动检测方法. 采用T-2-BSA包被96孔板作为固相抗原,与游离的T-2竞争有限的抗T-2单克隆抗体,以Eu3+标记的羊抗鼠抗体示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立T-2-TRFIA.同时对这一方法的稳定性、灵敏度、回收率和特异性进行考核.此方法灵敏度为0.2 μg/L,测量范围0.2～500 μg/L,批内变异为7.5%,批间变异为12.7%,平均回收率为89.6%.与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白无交叉反应.10条不同时间进行的间接竞争T-2-TRFIA的效应点均值ED80、ED50和ED20分别为2.66,6.97,29.11 μg/L.同时,用TRFIA和ELISA试剂盒同时检测T-2毒素,在ELISA和TRFIA产品的共同可测范围之内,两者的相关系数为0.926.     

石房蛤毒素免疫亲和柱制备及柱效测试研究

目的阐明石房蛤毒素(saxitoxin, STX)免疫亲和柱对11种麻痹性贝类毒素的亲和作用。方法通过纯化的STX单克隆抗体与琼脂糖凝胶(sepharose 4B)制备STX免疫亲和柱,采用11种麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)标液进行过柱实验,优化上柱条件,采用液相色谱-质谱串联法进行毒素检测。结果STX免疫亲和柱对新石房蛤毒素(neosaxitoxin,neo-STX)、脱氨甲酰基新石房蛤毒素(decarbamoylneosaxitoxin dihydrochloride,dcneo-STX)、膝沟藻毒素1(gonyautoxin-1,GTX1)、膝沟藻毒素4(gonyautoxin-4, GTX4)基本没有亲和力作用;而对7种PSP的亲和力强弱顺序为:STXN-磺酰氨甲酰基类毒素5(gonyautoxin-5, GTX5)脱氨甲酰基石房蛤毒素(decarbamoylsaxitoxin dihydrochloride, dcSTX)膝沟藻毒素3(gonyautoxin-3,GTX3)脱氨甲酰基膝沟藻毒素3(decarbamoylgonyautoxin-3,dcGTX3)脱氨甲酰基膝沟藻毒素2(decarbamoylgonyautoxin-2, dcGTX2)膝沟藻毒素2(gonyautoxin-2, GTX2),其中对STX、GTX5、dcSTX、GTX3的回收率为61.2%～99.0%。结论该STX免疫亲和柱对STX、GTX5、dcSTX、GTX3有较好的吸附效果,能够满足样品检测前处理的要求,为水产品中麻痹性贝类毒素的提取方法研究提供了新技术的参考依据。     

应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1

利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。     

黄曲霉毒素检测技术的研究进展

黄曲霉毒素（AFT）检测方法和技术的了解与掌握对黄曲霉毒素快速，准确的检测有重要意义，本中介绍了黄曲霉毒素的几种常见检测方法，并对其特点及检出限进行了概括性的分析。     

应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1

利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。