产苯乳酸乳酸菌的筛选鉴定

利用厌氧培养法,从猪的盲肠、小肠、大肠和粪便中筛选得到24株乳酸菌,液相色谱法测定产苯乳酸,有7株乳酸菌的苯乳酸产量在80～110mg/L之间,有4株的产量超过119mg/L,其中分离自猪粪便的菌株r16的苯乳酸产量最高,达到233.0mg/L。经16SrDNA系统发育分析,结合菌落形态、细胞形态、生化反应实验,最终确定菌株r16和m15为植物乳杆菌,而菌株m343和m462为粪肠球菌。     

一株植物乳杆菌产苯乳酸特性的研究

研究了一株植物乳杆菌DL-13产苯乳酸特性,通过反相液相色谱对发酵产物进行了鉴定。结果表明:DL-13能还原苯丙酮酸生成苯乳酸,最佳发酵条件为:温度36℃,初始培养p H 7.0,苯丙酮酸浓度10 g/L,摇瓶转速为100 r/min。在此条件下24 h时获得最大苯乳酸含量为3.86 g/L,转化率达到38.6%。DL-13对其他底物如苯丙氨酸、苯丙酮酸钠、苯丙酮酸铵、苯丙酮酸钙等都具有一定的发酵能力。     

苯乳酸高产乳酸菌的分离鉴定及其生长特性的研究

通过溶钙圈法和琼脂柱扩散法从泡菜中分离到了一株苯乳酸高产乳酸菌,并对其进行了种属鉴定及其生长特性的初步研究。结果表明,在39株具有抑菌效果的菌株中,苯乳酸最高产量为91.5mg/L,经菌落形态、细胞形态、生理生化特性和16s rDNA鉴定表明,该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其最佳生长初始pH为6.0,最佳生长温度为30℃,培养16h即达到稳定期,60h时苯乳酸产量趋于稳定。     

苯乳酸生产菌的筛选及鉴定

苯乳酸是一种具有宽广抑菌谱的新型生物保鲜剂,为筛选得到苯乳酸高产菌株,采用改良的碳酸钙溶解圈法和抑菌圈法,从自然环境中采集的50个样品中分离筛选得到2株高产苯乳酸的乳酸菌,分别命名为BLPC002和SCPC008,并对其进行了初步鉴定。结果显示,BLPC002和SCPC008在以苯丙氨酸为底物的条件下,摇瓶发酵苯乳酸产量分别为358 mg/L和333 mg/L,较改良前不到100 mg/L有明显的提高,说明改良后的筛选方法更加高效、准确。进一步通过对菌株形态和16S rDNA序列分析初步鉴定,均为植物乳杆菌。     

鱼肠道中高产苯乳酸乳酸菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

该研究通过采用高效液相色谱（HPLC）法测定苯乳酸含量,从50株鱼肠道来源的乳酸菌中筛选高产苯乳酸的菌株,通过形态观察、生理生化试验及分子生物技术对其进行菌种鉴定,并以苯乳酸产量为响应值,通过单因素试验和响应面试验对其产苯乳酸发酵条件进行优化。结果表明,筛选到1株产苯乳酸能力较好的菌株DY2,其苯乳酸产量达2.45 mg/m L,经鉴定,菌株DY2为融合魏斯氏菌（Weissella confuse）。菌株DY2产苯乳酸的最适发酵条件为初始pH 6.0,发酵时间50 h,接种量3%、发酵温度34℃。在此优化条件下,苯乳酸产量达2.99 mg/m L,是优化前的1.22倍。     

一株高产苯乳酸菌株的安全性评价与发酵工艺优化

该研究利用传统生物发酵技术生产苯乳酸,并对高产苯乳酸菌株种属、安全性以及发酵工艺进行研究。通过反相高效液相色谱法筛选得到1株高产苯乳酸菌株BLCC2-0069,该菌株发酵24 h后发酵液中苯乳酸的含量为1.26 g/L;借助菌株形态观察和16S r DNA序列鉴定,初步确定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillu plantarum);该菌株培养4 h进入对数生长期,10 h进入稳定期,活菌数可达到1.78×109 cfu/mL。通过对该菌株的小鼠体内安全评价,初步确定该菌株的体内安全性。同时还对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BLCC2-0069的发酵工艺进行研究,发现在培养基中添加3.00 g/L苯丙酮酸为底物时发酵液中苯乳酸产量最高可达3.96 g/L。综上,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BLCC2-0069对小鼠无毒,具有较高生物安全性,直接发酵苯乳酸的产量可达到1.26 g/L,添加底物发酵苯乳酸产量可达到3.96 g/L。研究结果可为菌株的安全应用提供理论基础。     

产苯乳酸的乳酸菌分离筛选及菌种鉴定

通过对自然发酵泡菜中乳酸菌的分离,建立了一种准确、快速的苯乳酸产生菌的筛选方法。在112株筛选菌株中,获得1株苯乳酸高产菌株SK007。研究了苯丙氨酸对苯乳酸合成的影响,即增加苯丙氨酸的浓度可以提高苯乳酸产量,苯丙氨酸是苯乳酸合成的前体。高产菌株经16S rDNA序列初步鉴定为Lactobacillus sp.,Gen-Bank接受号为DQ534529。系统发育分析表明它与植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)亲缘关系最近。     

高产苯乳酸菌株的筛选及其在豆粕发酵中的应用

以实验室保存的性能优良的乳酸菌为研究对象,采用薄层层析（TLC）法和高效液相色谱（HPLC）法筛选出高产苯乳酸的菌株,并利用该菌株对豆粕进行固体发酵,研究其对发酵豆粕的微生物、pH值、水分含量、粗蛋白、酸溶蛋白、总酸和苯乳酸含量的影响。结果表明,筛选得到3株产苯乳酸的菌株,其中植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）BLCC2-0069为高产苯乳酸的菌株,其以3 g/L苯丙酮酸为底物发酵48 h时发酵液中苯乳酸含量最高为4.39 g/L。利用该菌株固态发酵豆粕3 d时,乳酸菌活菌数＞109 CFU/g,霉菌活菌数≤10 CFU/g,大肠杆菌未检出;pH值降至4.5左右,水分、粗蛋白、酸溶蛋白、总酸和苯乳酸含量分别为36.78%、46.65%、10.51%、26.37 g/kg和424.02 mg/kg,发酵效果显著优于对照组（P＜0.05）。     

鹑鸡肠球菌m661的抗氧化、降胆固醇作用

经厌氧培养,从猪胃液中分离得到1株生长良好的肠球菌m661,菌株能产乳酸、革兰氏染色阳性、接触酶阴性。经系统发育分析,结合菌落形态、细胞形态、生化反应实验,确定菌株m661为鹑鸡肠球菌。鹑鸡肠球菌m661具有抗氧化活性,对羟自由基(?OH)、DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O2－?)的清除率与细胞浓度呈正相关。在细胞浓度为5×108CFU/mL时,菌株m661对?OH、DPPH自由基和O2－?的清除率分别为1.58%、36.6%和57.1%。菌株m661还具有清除培养基中34.4%的胆固醇、产生89.9mg/L苯乳酸等益生特性。菌株m661可作为益生菌进行开发利用。     

傣族发酵淘米水的初步研究

本文对傣族淘米水的发酵菌株及物质基础进行初步研究,为傣族淘米水在日化领域的开发应用提供实验依据。从传统发酵的淘米水中分离发酵菌株,结合菌株形态和分子生物学方法进行菌株鉴定,通过凯氏定氮法检测不同时间发酵淘米水的总氮及非蛋白氮含量,采用高效液相色谱法分析测定淘米水发酵液中的乳酸和乙酸含量。结果表明,从发酵淘米水样品中分离得到1株乳酸菌和1株酵母菌,通过16S rRNA基因序列及26S rRNA序列分析,结合表形特征,初步鉴定两株菌为乳杆菌属菌株和毕赤酵母属菌株。经48 h发酵,与未发酵淘米水相比,总氮含量提高105%,非蛋白氮含量提高77%,乳酸含量提高551%,乙酸含量提高342%。     

酒醅中产纤溶酶细菌的分离及发酵产酶研究

该研究从酒醅中筛选高产纤溶酶的细菌。经过初筛和复筛得到1株高产纤溶酶的菌株,命名为DL-1。通过菌株形态学和生理生化试验初步鉴定菌株DL-1为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株DL-1产纤溶酶发酵试验结果表明,最适菌龄为4 h,最适碳源为牛肉膏,最适氮源为豆饼粉。在此条件下,所产的纤溶酶在血纤维蛋白平板上形成的溶圈面积可达379.79 mm2。     

雪莲果汁褐变抑制条件的优化研究

研究了抑制雪莲果汁褐变的条件,通过单因素试验选取各因素的水平,根据Box-Benhnken 的中心组合试验设计原理,利用SAS 软件进行响应面回归分析,以褐变变化率为响应值,确定了雪莲果汁褐变抑制条件中各影响因素的水平,结合验证实验结果得到了最佳条件,即抗坏血酸0.31%、DL- 苹果酸0.30%、L- 半胱氨酸0.30%、漂烫温度89℃、褐变变化率20.88%。     

广西生榨米粉中益生乳酸菌的筛选及鉴定

通过革兰氏染色、过氧化氢酶试验、溶血性试验、耐酸、耐胆盐试验及体外抗氧化能力测定从广西本地传统发酵食品生榨米粉中筛选优良益生乳酸菌，对其生长情况及产酸性能进行测定，并通过分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明，共分离得到146株γ-溶血乳酸菌，其中22株乳酸菌对pH 2.0和0.3%胆盐均具有良好耐受性，且乳酸菌PM20、PM22、FD13及PM44的综合体外抗氧化能力较好。4株菌株的生长及产酸趋势一致，其中菌株PM44的生长速度和产酸能力最强。经鉴定菌株PM20、PM22、FD13均为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum），菌株PM44为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）。     

降解苹果酸酵母菌的筛选及鉴定

使用YPD培养基从猕猴桃果园的土壤、猕猴桃叶片、猕猴桃果浆和猕猴桃酒酒渣中筛选出酵母菌,通过传代培养及镜检获得纯培养物。用苹果酸降解指示培养基厌氧培养,通过培养液蓝色的深浅筛选出能降解苹果酸的酵母菌,检测酵母菌的降酸能力,进行分子生物学鉴定和同源性分析,再测试酵母菌对酒精、SO2、酸、糖的耐受性,最终得到具有较强苹果酸降解能力的酵母菌株ZJ22、PJ34、ZG13,对苹果酸的降解比例分别为28.36%、25.92%和25.68%。经鉴定,菌株ZJ22和菌株PJ34是酿酒酵母,菌株ZG13是毕赤酵母。耐受性试验表明:酿酒酵母-ZJ22对酒精、SO2、酸和糖的耐受性较好,具有潜在使用价值。     

Rapid and reliable protein extraction from yeast

The methods currently used for protein extraction from yeast are either laborious or insufficiently reliable. Here I report a method for protein extraction for electrophoretic analysis that is both easy and reliable. In this method, yeast cells are subjected to mild alkali treatment and then boiled in a standard electrophoresis loading buffer. The method was tested for different strains of Saccharomyces cerevisiae and for yeast Hansenula polymorpha DL-1. It yields virtually complete extraction independently of the strain, growth conditions and protein molecular weight and allows working with small amounts of yeast cells grown on agar plates.     

Production of D-lyxose from D-glucose by microbial and enzymatic reactions

D-arabitol was first prepared from D-glucose using Candida famata R28. The reaction gave 5.0% D-arabitol from 10.0% D-glucose. D-arabitol was then almost completely converted to D-xylulose using Acetobacter aceti IFO 3281. Finally, D-lyxose was prepared from D-xylulose enzymatically using L-ribose isomerase from toluene-treated cells of Acinetobacter sp. strain DL-28. The isomerization reaction progressed steadily and the concentration of D-xylulose increased from 1.0 to 10.0%. About 70% of D-xylulose was converted to D-lyxose in all cases. Separation of residual D-xylulose from the reaction mixture is very difficult to achieve by column chromatography, but D-xylulose could be selectively degraded easily using Saccharomyces cerevisiae IFO 0841. The product was crystallized and was confirmed to be D-lyxose by HPLC, 13C-NMR spectra, IR spectra analysis, and optical rotation measurement.     

Sequencing and functional analysis of the Hansenula polymorpha genomic fragment containing the YPT1 and PMI40 genes

A 6.0 kb genomic DNA segment was isolated by its ability to rescue the temperature-sensitive growth defect and the hypersensitivity to sodium deoxycholate of a spontaneous vanadate-resistant mutant derived from Hansenula polymorpha DL-1. The genomic fragment contains four open reading frames homologous to the Saccharomyces cerevisiae genes YPT1 (which codes for a GTP-binding protein; 75% amino acid identity), PMI40 (encoding phosphomannose isomerase; 61% identity), YLR065c (30% identity) and CST13 (28% identity). The H. polymorpha YPT1 homologue (HpYPT1) was found to be responsible for the complementation of the temperature-sensitive phenotype and the sodium deoxycholate sensitivity of the mutant strain. Disruption of the H. polymorpha PMI40 homologue (HpPMI40) resulted in the auxotrophic requirement for D-mannose. The heterologous expressions of HpYPT1 and HpPMI40 were able to complement the temperature-sensitive phenotype of S. cerevisiae ypt1-1 mutant and the mannose auxotrophy of S. cerevisiae pmi40 null mutant, respectively, indicating that the H. polymorpha genes encode the functional homologues of S. cerevisiae YPT1 and PMI40 proteins. The nucleotide sequence has been submitted to GenBank under Accession No. AF454544.     

玉米淀粉深层发酵生产L－乳酸

本文报道了使用米根霉（ＲｈｉｚｏｐｕｓＯｒｙｚａｅ）ＴＬ－５２７－９菌株用玉米淀粉深层发酵生产Ｌ－乳酸。探讨了不同碳源、氮源、底物浓度、液化条件、通气量、种龄对Ｌ－乳酸生成的影响，在３Ｍ３发酵罐中，当玉米淀粉投料浓度为１３％时，７罐平均产Ｌ－乳酸９．４１ｇ／１００ｍｌ，对糖转化率７９．５５％。发酵液经分离提取精制，Ｌ－乳酸纯度达９８％以上。同时在研究过程中利用高压液相色谱测定了Ｌ－乳酸代谢变化。本结果表明米根霉ＴＬ－５２７－９菌株具有Ｌ－乳酸产率高和发酵快的特点。     

根霉发酵L-乳酸

本文报道了选育一株产L-乳酸的根霉JSMI-R73,对该菌的性能及影响产酸的条件进行了研究,并进行了500升罐的扩大试验。当口服葡萄糖浓度为10％时产酸70g/l以上,13％时产酸101g/l,其中L-乳酸稳定在85％以上,最高达98％。该菌能适应玉米作培养基,当玉米浓度为12％时产酸70g/l以上,20％时产酸105g/l以上,其中L-乳酸在88％以上,最高可达99％,达到了与葡萄糖相似的发酵水平,这是较有实用意义的结果。     

高效降胆固醇降甘油三酯乳酸菌的分离鉴定和功能分析

筛选出高效降胆固醇降甘油三酯(Triglyceride,TG)菌株,为新型药物、保健食品的研制提供优良菌株。从6种西北特有样品中筛选分离出乳酸菌,采用磷硫铁比色法测定菌株降胆固醇能力,并测定菌株降甘油三酯能力,通过抑菌实验、耐酸、耐胆盐及小鼠体内毒性试验研究菌株各项性能,利用生理生化及16S rDNA法对菌株进行鉴定。结果表明,本试验筛选出3株高效降胆固醇降甘油三酯乳酸菌,其中菌株ZL010降胆固醇、降甘油三酯效果最强,蛋黄中胆固醇的降解率为73.65%,高纯度胆固醇降解率为40.06%,甘油三酯降解率为5.10%。3株菌都具有很好的抑菌、耐酸、耐胆盐能力,菌株经生理生化及16S rDNA鉴定ZL005为耐久肠球菌(Enterococcus durans),ZL010为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),ZL016为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。小鼠毒性试验表明,菌株无毒副作用,小鼠各脏器一切正常,菌株可用于降脂降胆固醇保健药品及功能食品的制备。