糖基化反应条件对鲢鱼鱼肉木瓜蛋白酶酶解产物清除DPPH自由基影响

为提高鲢鱼鱼肉蛋白酶酶解产物抗氧化活性,将葡萄糖和低聚异麦芽糖通过糖基化反应分别引入到鲢鱼鱼肉木瓜蛋白酶酶解产物中,利用分光光度计测定其清除DPPH自由基能力。研究结果表明,木瓜蛋白酶酶解物与葡萄糖以1:4的比例、在60℃下进行糖基化反应,可以得到清除DPPH自由基能力较强的产物,其清除能力可达78.12%。     

鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性评价

以鳕鱼为原料,分别用风味蛋白酶、动物蛋白复合酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,研究其在不同酶解条件下,酶解产物的苦腥味、溶解性、热稳定性以及亚铁离子螯合力和DPPH自由基清除力的差别。结果表明:酶解产物均具有较好的溶解性和热稳定性体外试验有一定的亚铁离子螯合能力和DPPH自由基清除力,其中动物蛋白复合酶酶解产物抗氧化性显著高于其他酶的酶解产物,并具有较弱的苦腥味。     

牦牛乳酪蛋白酶解产物清除DPPH自由基活性分析

以牦牛(Bos grunniens)乳酪蛋白为原料,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶制备酪蛋白酶解产物,分别测定其DPPH自由基清除活力,发现碱性蛋白酶酶解产物的清除活力显著高于其他酶解产物(P<0.05).测定不同水解时间点酪蛋白酶解产物的DPPH自由基清除活力,发现第7h酶解产物的清除活力显著高于其它水解时间点的样品(P<0.05).还分析了碱性蛋白酶7h酶解产物的理化指标,发现其水解度、三氯乙酸氮溶解指数和蛋白质回收率均较高,表明此时大部分酪蛋白已降解,且酶解产物中短肽段的含量较高,用碱性蛋白酶制备具有DPPH自由基清除能力的酪蛋白酶解产物时得率较高,而其氨基氮含量相对较低,适宜作为保健食品功能性基料.     

鹅血红蛋白抗氧化活性肽的制备及工艺研究

以新鲜鹅血为原料提取血红蛋白,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶及风味蛋白酶来酶解鹅血红蛋白,采用甲醛滴定法测定鹅血红蛋白水解液的水解度,通过研究水解液对DPPH自由基清除能力来检测水解产物的抗氧化活性,并分析了酶解温度、时间、pH及酶与底物比对鹅血红蛋白水解产物的影响.结果表明,采用中性蛋白酶获得的酶解产物抗氧化活性最高.在中性蛋白酶的作用下,通过单因素及正交实验,优化出产物抗氧化活性较高的酶解工艺条件:温度50℃,酶解时间8h,pH7.0,酶与底物比8000U/g,在最佳酶解条件下,产物对DPPH自由基的清除率为89.6％.     

鳄鱼骨双酶酶解产物的功能特性及其抗氧化活性

为了全面了解酶解时间、蛋白酶种类对鳄鱼骨蛋白酶解产物抗氧化性和功能特性的影响,采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及双酶(先加入木瓜蛋白酶,后加入碱性蛋白酶)在各自最适条件下对其进行酶解,制备了不同水解度的酶解产物,并对其功能特性及抗氧化性进行分析。结果表明:随着酶解时间的延长,酶解产物的亚铁离子螯合能力和还原力均有所增强。在酶解0.25 h时,酶解产物具有较强的清除DPPH自由基的能力,随着酶解时间的延长,木瓜蛋白酶酶解产物清除DPPH自由基的能力不断下降,碱性蛋白酶先下降后上升,而双酶酶解产物则没有显著变化。在2～4 h内相同酶解时间下,与单酶酶解产物相比,双酶酶解产物具有较强的亚铁离子螯合能力、还原力及清除DPPH自由基的能力(P<0.05)。在酶解产物的功能性质方面,随着酶解时间的延长,双酶酶解产物较单一酶酶解产物具有更好的溶解性、热稳定性及乳化性。结果表明,双酶酶解较单一酶酶解得到的产物具有较强的抗氧化性。     

鳙鱼鱼肉不同酶解产物的加工特性及抗氧化性

为了研究酶解时间、pH值及酶解产物分子质量大小对鳙鱼(Aristichthys nobilis)鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性的影响,本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鳙鱼鱼肉进行酶解,对其酶解产物进行加工特性和抗氧化性分析。结果表明:2种蛋白酶酶解产物在pH 4条件下的溶解性和热稳定性均低于pH 7。其中,碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物分别在酶解4.0 h和1.0 h具有较优的溶解性及热稳定性。碱性蛋白酶酶解产物具有较优的亚铁离子螯合能力,而乳化性、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率及还原力则是风味蛋白酶酶解产物更优。酶解产物的加工特性及抗氧化性受蛋白酶种类、酶解时间、pH值及酶解产物分子质量大小的影响。     

虾夷扇贝生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物抗氧化特性研究

本文选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶及木瓜蛋白酶制备虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物,再与核糖进行美拉德反应获得虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物。采用DPPH自由基和亚油酸过氧化体系,评价美拉德产物的抗氧化能力。结果显示,碱性蛋白酶酶解效果较好,在酶解3 h时其水解度及TCA可溶性寡肽得率最高,分别达24.16%和20.79%。以DPPH自由基清除活性及亚油酸过氧化抑制活性为指标,确定了pH7条件下制备的虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物-核糖美拉德产物抗氧化能力相对较强。通过比较半抑制浓度(IC50),美拉德产物的抗氧化能力较酶解物及核糖本身均显著提高(p0.05),但弱于抗氧化剂2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)。以上研究结果说明,虾夷扇贝生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物具有一定的抗氧化能力,具有潜在的开发价值。     

蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe3+还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

酶解方式对核桃蛋白肽及其抗氧化活性的影响

分别采用7种蛋白酶对核桃蛋白进行单酶水解,并与双酶复合酶解进行比较,考察不同酶解方式对酶解产物水解度、短肽得率和抗氧化活性的影响。结果表明,碱性蛋白酶单酶酶解核桃蛋白,产物的水解度和短肽得率显著高于其它单酶处理,分别达到18.94%和76.37%,对DPPH自由基清除能力的IC50值仅为3.23mg/mL,抗氧化活性显著高于其它处理;将碱性蛋白酶分别与其它蛋白酶组合酶解,核桃蛋白酶解产物的水解度和短肽得率均有所提高,其中与木瓜蛋白酶组合处理的水解度可达28.36%,短肽得率可提高至85.62%。双酶酶解产物对提高清除DPPH自由基和羟自由基的活性不显著,碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的组合可以显著提高酶解产物清除超氧阴离子自由基的活性。     

鳄鱼皮酶解产物功能特性及抗氧化活性

为了解鳄鱼皮酶解产物功能特性和抗氧化活性,采用2种商业蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶)在各自最适反应条件下分别酶解鳄鱼皮,研究水解度(DH)、酶种类及pH值对酶解产物功能特性及抗氧化活性的影响.结果显示:随着酶解时间延长,鳄鱼皮水解度逐渐增加,鳄鱼皮在碱性蛋白酶酶解作用下水解度较高,水解4h时可达12％;木瓜蛋白酶酶解产物与碱性蛋白酶酶解产物的溶解性差异不显著(P＞0.05).相同水解度下,碱性蛋白酶酶解产物的热稳定性在pH4时优于木瓜蛋白酶酶解产物.酶解时间在1h之内,木瓜蛋白酶酶解物亚铁离子螯合力明显增强;随着时间延长,酶解产物亚铁离子螯合能力变化不显著(P＞0.05).酶解3h后碱性蛋白酶酶解产物亚铁离子螯合能力高于木瓜蛋白酶酶解产物,但木瓜蛋白酶酶解产物具有较强的清除DPPH自由基能力.综上表明,碱性蛋白酶水解作用的鳄鱼皮水解度较高,其酶解产物乳化活性和热稳定性优于木瓜蛋白酶酶解产物;鳄鱼皮酶解产物抗氧化能力较强,有较高的开发利用价值.     

美拉德反应修饰的鲢鱼肽抗氧化活性初探

美拉德反应修饰是改善肽抗氧化活性的新途径。本实验采用鲢鱼肽与葡萄糖作为反应原料,以不同的浓度反应0,2,4,6,8,10h,并分别对棕色变化、还原糖、游离氨基、还原力和DPPH自由基清除活性进行了测定,结果表明美拉德反应产物均表现出很好的抗氧化活性,还原力在一定的范围内随时间的增加而增强,E组(10g鲢鱼肽和5g葡萄糖)最大,在10h时为A组的6.09倍。清除DPPH自由基的活性则在2h时达到较高的值,E组具有最高的的自由基清除率为64.45%。美拉德反应产物的还原力与DPPH自由基清除活性不一致,而且其抗氧化能力不完全依赖于产物的褐变程度。     

不同蛋白酶突变子对鲢鱼蛋白酶解及产物抗氧化性的影响

本实验采用芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶及其突变产物对淡水鱼类白鲢鱼肉蛋白进行酶解,对比分析了酶的不同突变产物对水解过程水解度的影响及其酶解产物的抗氧化活性变化。大部分蛋白酶在水解反应前40 min内反应速率较高,水解度迅速增加,40min~120 min之间水解曲线变得平缓甚至下降。其中细菌丝氨酸蛋白酶突变子239对白鲢鱼肉蛋白的水解能力最强,其2 h水解产物水解度最大,为11.51%;突变蛋白酶33的水解能力最差,最终水解产物的水解度只有3.08%。细菌丝氨酸蛋白酶及其突变酶的酶解产物均具有较高的抗氧化性,其中蛋白酶突变子166的酶解产物抗氧化活性最强,经测定其DPPH清除能力为91.02%,蛋白酶突变子169的酶解产物抗氧化活性最弱,DPPH清除能力为61.41%。结果表明,与三联体催化活性中心相关的突变对丝氨酸蛋白酶的水解能力和水产品蛋白的水解度影响较大,而酶底物特异性方面的改变则影响酶解产物的抗氧化活性。     

Effect of substrate ratios and temperatures on development of Maillard reaction and antioxidant activity of silver carp (Hypophthalmichthys molitrix) protein hydrolysate–glucose system

The study of antioxidant activity of the hydrolysates is necessary during its processing in which Maillard reaction would often occur. To understand the effect of Maillard reaction on antioxidant activity of silver carp protein hydrolysates (SPH), the Maillard reaction products (MRPs) were prepared at different ratios between SPH and glucose by Maillard reaction in powdered state, respectively. MRPs possessed a strong 2, 2‐diphenyl‐1‐picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity and reducing power (P < 0.05). The hydrolysate and glucose heated with the ratio of 2:1 at 60 °C showed high browning intensity and good antioxidant properties (P < 0.05). According to the correlation coefficients of variables included in the hydrolysate–glucose system, good correlations were observed among the antioxidant activities, the absorbance at 294 nm and the loss of free amino groups. The results suggested that Maillard reaction has a good potential to improve the antioxidant activity of SPH.     

大豆蛋白的酶水解及类蛋白反应对其抗氧化活性的影响

采用Alcalase 2.4L FG 蛋白酶水解大豆蛋白,筛选并制备出ABTS+·清除率最高的水解物,其水解度为14.0%,对ABTS+·清除率为43.6%。以此水解物为底物,以修饰产物的游离氨基减少量为指标,应用响应面分析得到类蛋白反应的优化条件为：酶添加量1037U/g pro、底物质量浓度30g/100mL、温度20℃。在此条件下反应6h,水解物的修饰反应程度和抗氧化活性均为最大。制备反应程度不等的3 个修饰产物,进一步抗氧化活性分析表明：大豆蛋白水解物及其修饰产物的抗氧化活性好于大豆蛋白;修饰产物与水解物的DPPH 自由基清除能力、还原力、超氧阴离子自由基(O2 － ·)清除率差别不显著,但是对羟自由基(·OH)清除率差别显著。     

酶水解鲫鱼蛋白质及产物抗氧化活性初探

本实验主要研究了碱性蛋白酶对鲫鱼的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶浓度、底物浓度、水解温度、时间、pH对鲫鱼蛋白质水解度的影响,同时用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基法和改进的邻苯三酚法测定分析水解液的抗氧化活性。结果表明:酶解条件为E为4%,S为10%,pH8.0,时间为4h,温度为50℃时可以获得较高水解度,同时水解液对DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O2·)具有较高清除率。     

Gelatin hydrolysates from sliver carp (Hypophthalmichthys molitrix) improve the antioxidant and cryoprotective properties of unwashed frozen fish mince

In this study, gelatin extracted from silver carp skin was hydrolysed by different enzymes (alcalase, papain and flavourzyme), aiming to improve the storage stability of unwashed fish mince during freeze-thaw cycles. Flavourzyme hydrolysates exhibited the highest DPPH• scavenging activity (1.2-fold of alcalase, 1.6-fold of papain) and reducing ability (1.2-fold of alcalase, 2.3-fold of papain), while the alcalase hydrolysates demonstrated the highest Fe²⁺ chelating ability. Moreover, fish mince treated with the mixture of flavourzyme hydrolysates and sucrose exhibited higher sulfhydryl and salt-soluble protein contents, greater Ca²⁺-ATPase activity and better water holding capacity. Hence, the gelatin hydrolysates of flavourzyme from silver carp skin are promising candidates as natural and high-performance antioxidant and cryoprotectants in fish mince processing.     

Effects of washing and membrane removal pretreatments on the antioxidant properties of grass carp (Ctenopharyngodon idella) protein hydrolysates produced by in vitro digestion

The effects of washing and membrane removal pretreatments on the antioxidant properties of grass carp protein hydrolysates prepared through in vitro digestion were investigated. Furthermore, antioxidant hydrolysate was fractionated using ultrafiltration membranes (10, 5, 3 and 1 kDa). Oxygen radical antioxidant capacity (ORAC), DPPH and ABTS‐scavenging activity in a gastrointestinal digest produced from pretreated minced grass carp was increased 1.74‐fold, 1.08‐fold and 1.72‐fold, respectively, compared to untreated minced carp. Compared to the alkaline protease hydrolysate, ORAC, ferric reducing antioxidant power, ABTS‐ and DPPH‐scavenging activity in a gastrointestinal digest prepared from pretreated minced carp were reduced by 11.5%, 60.9%, 16.3% and 78.4%, respectively. The ultrafiltration fraction (<1 kDa) displayed the highest antioxidant activity. The size of molecular weight and the amount of hydrophobic and aromatic residues in hydrolysates played an important role in antioxidant activity. Low‐molecular‐weight fish hydrolysates could serve as a potential source of functional ingredients for promoting health.     

鳙鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

采用优化酶法从鳙鱼肉蛋白中制备具有清除Fenton体系产生的羟自由基(·OH)活性的抗氧化肽.应用响应面分析法以酶解液对Fenton体系产生的羟自由基(·OH)的清除率为指标优化最佳酶解工艺;酶解液相对分子质量分布采用凝胶层析法测定.复合蛋白酶是水解鳙鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适合酶,最佳酶解条件为:温度40℃、酶解时间30 min、PH=7.0、酶加量为600 U/g底物、底物:水=1:2;活性肤相对分子质量范围为519～1088.响应面分析法是优化酶解工艺可行的方法;具有清除羟自由基活性的肽是一些寡肽.     

大豆糖蛋白的抗氧化特性

大豆分离蛋白（soy protein isolate,SPI）与葡萄糖按质量比1∶1混合后通过美拉德反应生成大豆糖蛋白, 通过测定不同反应温度（70、80、90 ℃）、反应时间（0、1、2、3、4、5、6 h）大豆糖蛋白的还原能力、羟自由 基清除能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力、游离氨基含量、 褐变程度、紫外光谱扫描分析和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）等指标,探讨大豆糖蛋白的抗氧化性及其作用机理。结果表明：随着反应时间的延 长、反应温度的升高,大豆糖蛋白的抗氧化性越高、游离氨基含量下降越多、反应褐变程度越大,90 ℃、6 h制 得的大豆糖蛋白还原能力达到最高,比SPI还原能力高4.6 倍;90 ℃、5 h的大豆糖蛋白羟自由基清除能力最高,为 5.87%,是SPI羟自由基清除率的1.69 倍;同时在90 ℃、5 h制得的大豆糖蛋白还具有最高的DPPH自由基清除率,比 SPI提高了2.68 倍。由大豆糖蛋白的紫外光谱二阶导数分析可知,经过美拉德反应后蛋白中色氨酸发生偏移,而从 SDS-PAGE的分析中也看出蛋白质与糖发生聚合。因此,大豆蛋白葡萄糖反应生成的大豆糖蛋白具有很强的抗氧化 性,并且抗氧化性与蛋白结构的变化密切相关。     

亚麻籽粕抗氧化肽制备工艺的响应面法优化

以亚麻籽粕蛋白为原料,酶解制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为实验指标,通过单因素实验,筛选最佳蛋白酶并考察底物浓度、酶添加量、温度、pH及时间等对酶解物抗氧化能力的影响。在单因素实验基础上,采用响应曲面法进行酶解工艺条件的优化。结果表明:采用胰蛋白酶作为最适酶,酶解的最佳工艺条件为:底物浓度2%,温度37 ℃,酶解时间3.00 h,加酶量为4000 U/g,pH8.5,在该条件下,1 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率及超氧阴离子自由基清除率分别为(63.64%±0.023%)和(19.98%±0.098%),0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由请清除率为(88.11%±0.059%)。说明亚麻籽粕抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。