菲律宾蛤仔糖胺聚糖RG-1的结构特征及免疫活性研究

目的:对菲律宾蛤仔糖胺聚糖RG-1的一级结构特征及细胞免疫调节活性进行研究。方法:采用高效液相色谱法测定相对分子质量和单糖组成,通过红外光谱、高碘酸氧化和Smith降解等研究其糖链主要结构特征;用MTT法分析对小鼠脾淋巴细胞的影响。结果:RG-1主要由葡萄糖、氨基半乳糖和半乳糖通过1→6、1→4或1→4,6键连接构成主链,在主链中还含有大量的半乳糖醛酸,重均相对分子质量为9.94×105。RG-1具有显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用和脾淋巴细胞的增殖作用(p<0.01)。结论:菲律宾蛤仔糖胺聚糖可通过增强细胞免疫活性而起到抗肿瘤作用。     

菲律宾蛤仔糖胺聚糖的分离纯化及结构表征

为研究菲律宾蛤仔中糖胺聚糖（glycosaminoglycans,GAGs）的结构特征,采用水酶法提取菲律宾蛤仔粗多糖,利用二乙胺基乙基纤维素-650M（diethylaminoethyl cellulose-650M,DEAE-650M）离子交换柱层析进行分离纯化后,通过紫外光谱（ultraviolet,UV）、红外光谱（infrared,IR）和核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）等方法对纯化后的菲律宾蛤仔GAG-1进行结构表征与分析。结果表明,采用水酶法提取的菲律宾蛤仔GAGs粗品,得率为1.04%。应用DEAE-650M离子交换柱层析分离纯化得到峰GAG-1和峰GAG-2。其中GAG-1的含量为89.56%,比粗品提高了82.43%,而GAG-2含量很低。紫外光谱分析结果表明,菲律宾蛤仔GAG-1中含微量核酸或蛋白质杂质;红外光谱分析表明GAG-1含有羧基、乙酰氨基、硫酸基等基团,其单体为吡喃型;1H-NMR和13C-NMR图谱分析结果显示GAG-1 以 β-D-Glc（1→4）-为主要连接方式。     

江苏产菲律宾蛤仔提取物的抗疲劳作用

研究了江苏产菲律宾蛤仔提取物(RE)对运动小鼠抗疲劳能力的影响。将小鼠随机分为6组,正常组、模型组、阳性组以及低、中、高3个剂量组。小鼠灌胃15 d后,采用小鼠游泳疲劳模型,观察各组小鼠负重游泳时间、不负重游泳后血清乳酸(LA)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)指标的差异。结果:高、中剂量组小鼠负重游泳时间明显长于模型组和低剂量组;与模型组相比,3个剂量组小鼠血清乳酸(p0.01)含量显著降低,且呈剂量依赖性;肌酸激酶(p0.01)、乳酸脱氢酶(p0.01)活力均下降,超氧化物歧化酶(p0.05)活力升高,尿素氮含量仅高剂量有显著性差异。结论:菲律宾蛤仔提取物能提高小鼠运动耐力,加速疲劳的消除。     

菲律宾蛤仔氨基多糖的分离提取及其抗肿瘤活性的初步研究

以湛江地区盛产的菲律宾蛤仔全脏器为原料,经酶解、脱色、离心去蛋白后醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(CRG),再将所得的CRG经一次纯化(吸附、透析)、二次纯化(CTAB络合)、醇沉等方法进行纯化,得到菲律宾蛤仔纯化产物(PRG)。PRG含有氨基已糖、乙糖醛酸、硫酸基和少量的岩藻糖(Fuc)、半乳糖(Gal),琼脂糖凝胶电 泳可分为F—1、F—2两个级分。红外光谱与CS—6相似。体外抗肿瘤实验表明,1.0mg/mL菲律宾蛤仔CRG具有显著的抗肿瘤活性,24h内对HL—60细胞的抑制率达59.8％。      

菲律宾蛤仔氨基多糖的分离提取及其抗肿瘤活性的初步研究

以湛江地区盛产的菲律宾蛤仔全脏器为原料,经酶解、脱色、离心去蛋白后醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(CRG),再将所得的CRG经一次纯化(吸附、透析)、二次纯化(CTAB络合)、醇沉等方法进行纯化,得到菲律宾蛤仔纯化产物(PRG)。PRG含有氨基已糖、乙糖醛酸、硫酸基和少量的岩藻糖(Fuc)、半乳糖(Gal),琼脂糖凝胶电 泳可分为F—1、F—2两个级分。红外光谱与CS—6相似。体外抗肿瘤实验表明,1.0mg/mL菲律宾蛤仔CRG具有显著的抗肿瘤活性,24h内对HL—60细胞的抑制率达59.8％。     

菲律宾蛤仔过敏原的性质研究

文章以菲律宾蛤仔为对象,对其过敏原进行性质研究。采用丙酮沉淀、等电点沉淀、硫酸铵盐析及加热处理等方法纯化过敏原;采用SDS-PAGE和Western-blot鉴定该过敏原;通过p H稳定性试验、消化稳定性试验进一步分析其性质。结果显示菲律宾蛤仔中主要过敏原的分子量为35k Da,耐酸碱性良好,且具有较高的消化稳定性,其降解产物仍具有抗原性。研究验证了菲律宾蛤仔中的主要过敏原是原肌球蛋白(tropomyosin,TM),并对其性质进行了分析,为过敏原的安全控制提供了基础数据。     

美拉德反应对菲律宾蛤仔原肌球蛋白结构及免疫活性的影响

以菲律宾蛤仔原肌球蛋白为研究对象,探讨美拉德反应导致核糖糖化后对其结构及免疫原性的影响。利用酶联免疫及点印记技术分析核糖对原肌球蛋白IgE/IgG结合能力的影响。通过圆二色谱（circular dichroism,CD）、有效赖氨酸含量测定等分析蛋白二级结构及相关基团的变化。结果表明,以美拉德反应为基础的与核糖的糖化反应时间达到12 h后,产物的IgE结合能力下降76.2%,IgG结合能力下降了86.8%,α-螺旋含量下降了71.7%,蛋白表面疏水性增加了192%,有效赖氨酸含量降低了45.5%。实验表明,与核糖的糖基化反应时间达到4 h后能够有效地改变菲律宾蛤仔原肌球蛋白的结构,从而降低其免疫活性。     

菲律宾蛤仔糖蛋白的分离纯化与理化性质的研究

对菲律宾蛤仔全脏器中的糖蛋白进行分离纯化,并分析其理化性质.菲律宾蛤仔全脏器经热水煮提、DEAE-52 纤维素柱层析及Sephadex G-100柱层析分离纯化,所得纯化组分用SDS-PAGE鉴定纯度并测定其相对分子质量;用HPLC检测糖链的单糖组成,再用IR分析其基团结构.结果表明:菲律宾蛤仔经柱层析纯化得到1种中性糖蛋白(NGP)和3种酸性糖蛋白(AGP,主要组分为AGP-Ⅲ).NGP的相对分子质量为35000, 总糖及总蛋白质量分数分别为60.5%和18.2%,糖链部分主要是由木糖、葡萄糖、半乳糖组成.AGP-Ⅲ的相对分子质量为43 000,总糖与蛋白的质量分数分别为57.4%和22.0%,糖链部分主要含有木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等.IR分析表明,NGP和AGP-Ⅲ均含有多糖的-OH、-COO-、-NH、-C-O-C等特征基团.     

菲律宾蛤仔净化技术初步研宄

采用紫外线制备无菌海水对菲律宾蛤仔进行净化处理,以细菌总数和大肠菌群为指标,探讨影响菲律宾蛤仔净化效果的几个关键因素.结果表明,在20℃条件下,菲律宾蛤仔净化的最佳工艺条件为:贝水比1:15、海水流量1.5 X10-5m3/s、净化处理时间为16h,细菌总数和大肠菌群指标符合海水贝类卫生标准(GB2744-1996).     

烹煮时间对菲律宾蛤仔质构及烹煮液性质影响的研究

研究不同烹煮时间下菲律宾蛤仔烹煮液中蛋白质及总糖含量、抗氧化活性及菲律宾蛤仔肉质构的变化。研究发现随烹煮时间的增加,烹煮液中蛋白质和总糖浓度上升,在烹煮20min时,烹煮液中蛋白质及总糖浓度分别为6mg/m L及181.1μg/m L。烹煮液清除羟基自由基及ABTS+自由基能力均高于未烹煮时菲律宾蛤仔浸出液,而烹煮5min以后,烹煮时间对烹煮液清除自由基能力的影响不显著。菲律宾蛤仔肉的硬度、弹性、内聚性及耐咀性在5min后显著升高（p<0.05）,而各烹煮时间之间,变化不显著。研究结果表明,菲律宾蛤仔烹煮5min后,菲律宾蛤仔肉质构变化不显著,在实际加工过程中,可以将菲律宾蛤仔烹煮时间定为5min,同时烹煮液中含有蛋白质、多糖成分及抗氧化活性物质,适合继续加工利用。      

菲律宾蛤仔氨基多糖的分离纯化及化学性质

以湛江地区盛产的菲律宾蛤仔全脏器为原料，经酶解，脱色，离心去蛋白后醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(CRG)，再将所得的CRG经一次纯化(吸附、透析)、二次纯化(CTAB络合)、分级分离(乙醇分级、CTAB分级)等方法进行化学纯化，得到菲律宾蛤仔纯化产物(GAG—2—3—2)。GAG—2—3—2主要有氨基己糖与己糖醛酸组成，两者分子比例接近1：2，硫酸基含量达到13.3％；琼脂糖凝胶电泳显示单一区带，Rf为0．89，介于肝素与硫酸软骨素之间。     

Purification and characterization of lysozyme from filipino venus, Ruditapes philippinarum

Lysozyme from Filipino venus (Ruditapes philippinarum) was purified by ion-exchange and gel filtration chromatography. The purification fold and yield were 3,402 and 32.4%, respectively. The molecular weight was determined to be 13.4 kDa by SDS-PAGE. The specific activity of lysozyme was 3.76×10⁵ units/mg protein with Micrococcus lysodeikticus as a substrate. The optimum temperature and pH of lysozyme were 75°C and 5.5, respectively. Lysozyme activity was decreased with about 45% after heat treatment for 30 min at 80°C, and completely inactivated at 100°C. It was activated by NaCl (10–70 mM), MgCl₂, and CaCl₂ (2–5 mM) whereas it was inhibited by ZnCl₂ (2–30 mM).     

菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆

目的了解菲律宾蛤仔中过敏原的情况,对其主要过敏原进行鉴定和分子克隆。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹验证原肌球蛋白,双向电泳对蛋白等电点进一步确定。利用差示扫描量热法对蛋白的热性能测定以及蛋白克隆和测序来分析原肌球蛋白。结果菲律宾蛤仔原肌球蛋白的分子量在37 k Da左右,等电点为5.1,热稳定性较强。原肌球蛋白的基因序列全长为855 bp,编码284个氨基酸,对序列进行同源对比,相似性较高。结论本实验证实了原肌球蛋白为菲律宾蛤仔的过敏原,为认识菲律宾蛤仔过敏原提供基础数据。     

菲律宾蛤仔调味软罐头的工艺研究

目的以菲律宾蛤仔为原料,开发制备调味软罐头。方法以风味、质地和色泽感官评分项目为评价指标,通过预实验确定最佳熟制方式和熟制时间,在盐用量、糖用量、味精用量和酱油用量4个单因素实验的基础上采用响应面法优化菲律宾蛤仔软罐头的调味配方。结果在盐用量为2.5%、糖用量为2.7%、味精用量为1.2%和酱油用量为0.3%条件时,其余以五香料液补至100%,感官评分预测值高达8.28,通过实验验证的感官评分结果为8.68,与预测值接近。结论菲律宾蛤仔调味软罐头制备工艺可行,可为后期其他贝类的生产加工研究提供借鉴。     

Isolation and characterization of antitumor polysaccharides from the marine mollusk Ruditapes philippinarum

Aqueous purified extract (PE) was isolated from the crude extract (CE) of the marine mollusk, Ruditapes philippinarum. Two water-soluble polysaccharides, PEF1 and PEF2, were purified from PE. The chemical structures were determined using FTIR, GC, HPLC and ¹³C NMR. The results indicated that PEF1 and PEF2 were homoglucan–protein complexes with a protein content of 26.0 and 8.2%, and their average molecular weights were about 2.0 × 10⁶ and 5.0 × 10³, respectively. The glucan moiety of PEF1 was mainly a (1 → 6)-branched (1 → 4)-α-d-glucan, while that of PEF2 contained (1 → 4)-α-d-glucan and (1 → 6)-β-d-glucan. PE fractions contained large quantities of glutamic acid and aspartic acid, but no cysteine. The antitumor activities were tested both in vitro and in vivo. PE showed significantly the highest tumoricidal activity against human hepatoma SMMC-7721 cells, and PEF1 had better cytotoxicity than PEF2. There was no observed cytotoxicity in human hepatocyte HL-7702 cells within the experimental concentration range for all PE fractions. PE showed antitumor activity against solid tumor Sarcoma 180 in a dose-dependent manner. It also demonstrated stimulating effect on murine lymphocyte proliferation induced by concanavalin A. The results demonstrated that the presence of bound protein, compositional glucan and moderate molecular mass would be helpful to the enhancement of antitumor activities. This study suggested that the polysaccharides isolated from the marine mollusk had a potential application as natural antitumor and immunomodulator agents.     

菲律宾蛤仔对扑草净的生物富集与消除规律

采用半静态水质接触染毒法,研究菲律宾蛤仔对养殖海水中扑草净的生物富集和消除规律。生物富集实验结果表明：在水温（20±1） ℃条件下,在扑草净质量浓度分别为1.0、10.0、200.0 μg/L的养殖海水中,菲律宾蛤仔中扑草净残留量随所暴露海水中扑草净质量浓度的升高而逐渐增加,二者之间呈正相关。3 个实验组分别在第24、24、6小时达到最大富集值,最大富集系数分别为40.3、9.54、5.35。随着时间的延长,菲律宾蛤仔的扑草净残留量均表现为先迅速上升,升至最高值后迅速降低,低至一定质量浓度后再次上升至一个高点然后下降,之后维持在某一质量浓度水平呈小幅波动的变化趋势。消除实验结果表明：在消除实验初期,3 个实验组菲律宾蛤仔中扑草净的残留量均迅速下降,24 h时降至原质量浓度的10%左右,此后下降缓慢,1.0、10.0、200.0 μg/L暴露实验组菲律宾蛤仔的扑草净残留量降至10.0 μg/kg以下的时间分别为2、24、768 h,其中1.0 μg/L组在消除实验持续96 h时检测结果低于检出限,其余2 组在为期45 d的消除实验结束时仍可检出扑草净残留量。研究表明,菲律宾蛤仔对扑草净具有快速富集能力,但完全消除需要较长时间。     

近江牡蛎糖胺聚糖体内外抗肿瘤作用研究

研究近江牡蛎糖胺聚糖体内外抗肿瘤活性。采用MTT法测定近江牡蛎糖胺聚糖(CG)对K562、CNE-2Z、Hela细胞增殖的影响;采用动物体内移植性肿瘤模型,观察CG对S180实体瘤和艾氏癌腹水型(EAC)、白血病L1210腹水瘤的影响。实验显示近江牡蛎糖胺聚糖级分CG、CGIa和CGIIa均可以抑制K562、CNE-2Z、Hela细胞的生长(p0.05),其中CGIa对肿瘤细胞增殖的抑制作用最强,72 h时对K562、CNE-2Z细胞增殖抑制作用的IC50分别为1.95、7.36 mg/L;且对抗肿瘤药物5-Fu具有增敏作用。CG对移植性S180肉瘤抑瘤率可达到44.66%,与CTX合用后可提高至67.96%,且对CTX损伤的小鼠免疫功能有一定的修复作用;CG与CTX合用后能延长L1210腹水瘤小鼠和荷EAC小鼠的生命,其生命延长率分别高达50.27%和55.27%。表明近江牡蛎糖胺聚糖具有体内外抗肿瘤活性,其作用可能与直接细胞毒作用及增强机体免疫功能有关。