透性化海藻糖合酶的研究

海藻糖是一种新型食品添加剂 ,目前其主要生产方法是利用微生物酶法合成。文章研究了在不易破壁取得胞内酶的情况下 ,采用渗透处理细胞技术生产透性化细胞酶的方法 ,获得较高酶活力     

海藻糖合酶固定化及细胞透性化技术的研究进展

介绍了海藻糖合酶性质、固定化及细胞透性化技术.通过几个海藻糖合酶固定化及透性化技术的实例,探讨适合海藻糖工业化生产的方法,展望海藻糖合酶固定化及透性化技术的研究趋势.     

恶臭假单胞菌透性化细胞海藻糖合酶的酶反应工艺及其特性研究

用甲苯对恶臭假单胞菌细胞进行透性处理,研究了透性化细胞海藻糖合酶的酶反应工艺及其特性。研究结果表明,该细胞酶的最适反应条件为pH7.8,转速180 r/min,温度为40℃,反应时间为8 h。透性化细胞海藻糖合酶具有极强的底物特异性,激活离子有Na+、K+,重金属离子强烈抑制菌体生长和酶活。     

海藻糖合酶研究进展

介绍了海藻糖合酶的来源、性质、固定化及细胞透性化技术.并通过实例探讨适合海藻糖工业化生产的方法,展望海藻糖合酶固定化及透性化技术的研究趋势.     

透性化酒精酵母细胞产海藻糖方法的研究

研究了海藻糖生物合成中酒精酵母细胞渗透处理工艺。试验结果表明,用15mL浓度为0.5%(v/v)的吐温-60为渗透剂,在30℃条件下渗透处理1g湿酵母45min即得透性化酵母细胞,经发酵培养后海藻糖含量可达0.917g/L。     

一株海藻糖产生菌T007酶学特性的研究

对自行从土壤中筛选分离出的一株能合成海糖藻的菌株T007的酶学特性进行了研究。该酶最适反应温度为38～40℃，最适反应pH为pH6．6～7．2，Mg^2＋、K^＋对该酶有一定的激活作用，Ca^2＋、Ba^2＋、Mn^2＋对该酶有抑制作用，而Zn^2＋、Cu^2＋、Hg^2＋则可强烈地抑制该酶活力。试验证实，该菌株是在海藻糖合酶（trehalose svnthase）作用下特异性地以麦芽糖为底物转化为海藻糖的。该细胞酶在4℃保存14d酶活力仍保持稳定，-18℃保存期可延长到30d。     

透性化细胞乳糖酶与提纯的乳糖酶酶学性质比较

通过透性化细胞处理技术和提取纯化两种方法制备乳糖酶,对两种乳糖酶的酶学性质进行了分析比较,结果表明,两种酶的最适反应温度和最适反应pH值相近,透性化细胞乳糖酶pH值稳定性和热稳定性范围大于纯乳糖酶.K 、Mn2 、Mg2 、Ca2 对两种乳糖酶都有激活作用,Cu2 有较强的抑制作用,金属离子对纯乳糖酶活性的影响大于对透性化细胞乳糖酶的影响.麦芽糖、葡萄糖等糖类对两种乳糖酶的活性有抑制作用.在完全相同的反应条件下测定的两种乳糖酶的Km和Vmax有所不同.     

壳聚糖固定化海藻糖合酶

利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4~60 ℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH3.5~8.5范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于60%,酸碱稳定性优于游离酶。反应进程试验结果表明,2 h时海藻糖得率达最大,为61.4%。     

酶法生产海藻糖研究进展

海藻糖是一种安全的非还原性二糖,广泛存在于自然界中,具有保湿性,抗冻抗干燥性,热酸稳定性等特殊的生物学功能,对生物大分子有着非特异性的保护作用,因此在医学、农业、化妆品、食品等行业应用潜力巨大.自20世纪80年代后,各国相继开展了海藻糖生理生化和分子生物学的研究,该糖现已成为国际上最近开发的主要低聚糖之一.本文介绍了海藻糖的生产背景、功能和机理、研究意义和酶合成的生产方法,着重讨论了透性化细胞技术生产海藻糖的国内外研究进展和意义,列举了一些有实际意义的实例,并指出在多种发酵生产海藻糖的技术中,利用基因工程大幅度提高酶活,将透性细胞固定,连续化生产海藻糖成为未来生产的趋势,特别是利用海藻糖合酶一步法转化麦芽糖为海藻糖最具应用前景.     

细菌纤维素固定化海藻糖合酶的研究

以细菌纤维素为载体，采用吸附-交联的方法将海藻糖合酶固定化，在最适固定化条件下，15℃吸附20h，然后与6％戊二醛在15℃交联20h。实验发现，与游离酶相比，固定化酶的最适pH值向碱性方向移动0、4，为pH7．4，最适作用温度为45℃，比游离海藻糖合酶提高10℃，酸碱稳定性、热稳定性均有较大提高；重复使用6次后，酶剩余活力保持在87％左右，有较好的操作稳定性和重复使用稳定性。     

海藻糖合酶基因在毕赤酵母中的表达

首次构建来源于恶臭假单胞菌海藻糖合酶基因（AE015451.1）的真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达。PCR扩增目的基因,经EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的pPICZaA中,经PCR检测和序列测定准确后,通过电击法将重组质粒转入毕赤酵母GS115中,利用含Zeocin的YPD平板筛选到阳性转化子,提取阳性转化子基因组并利用特异性引物PCR得到一条与目的基因大小相同的条带,说明目的基因转入成功,诱导重组蛋白表达并用SDS-PAGE检测可见一条约76 ku与目的蛋白大小预测相符合的蛋白条带,最后HPLC检测重组蛋白可将麦芽糖特异转化为海藻糖,说明外源表达的海藻糖合酶具有一定酶活。通过PCR、SDS-PAGE和HPLC结果说明成功构建重组pPICZaA-TreS质粒并整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,且海藻糖合酶基因得到预期的表达并具有活性,为下一步研究奠定基础。     

海藻糖合成酶的分离纯化及部分酶学性质研究

食尼古丁节杆菌JNU-1（Arthrobacter nicotinovorus JNU-1）菌株所产胞内海藻糖合成酶，该酶能转化麦芽糖合成海藻糖，将食尼古丁节杆菌JNU-1进行大量的培养，富集发酵菌丝体，经超声破碎、浸提、离心后获得粗酶液，粗酶液经硫酸铵分级沉淀后，收集相应的活性部分，用葡聚糖凝胶进一步纯化，通过电泳来测定海藻糖合成酶的纯度和分子量。     

产海藻糖合酶嗜热菌的筛选

采用薄层层析及高效液相色谱对酶反应产物进行分析的方法,从地热水样中筛选出一株产胞内海藻糖合酶的嗜热菌CBS-01菌株。该菌株在固体培养基中细胞为杆状,在液体培养基中细胞通常为丝状,丝状体长度可变,好氧,革兰氏染色阴性,无芽孢,菌落呈圆形,表面光滑,凸起,边缘整齐,暗红色,生长温度范围为40～70℃,最适生长温度为55～60℃,生长pH范围为6.5～9.5,最适生长pH值为7.5～8.5,初步鉴定为亚栖热菌(Meiothermus sp.)。     

极地微生物产海藻糖合成酶菌株的筛选

来源于极地的微生物经过筛选,得到能产海藻糖合成酶的耐冷菌株S1和S2,分别用TLC、DNS和HPLC的方法确证其酶反应的产物为海藻糖.以质量分数1%麦芽糖为底物,S1粗酶液能将麦芽糖转化为海藻糖,并且没有明显的葡萄糖生成,在pH值7.0的磷酸盐缓冲液下15℃反应48h,经过HPLC测定转化率最高达到75.2%.     

海藻酸锶凝胶固定化含海藻糖合酶细胞的研究

含有海藻糖合酶的亚栖热菌CBS-01菌株细胞经过透性化处理后,以海藻酸锶凝胶对透性化细胞进行了固定化,当加酶量为12U/g海藻酸钠时,所得固定化细胞的载酶量可达6U/g海藻酸钠.细胞固定化后,最适酶反应pH值由6.5升至7.0,最适酶反应温度未变,为60℃,但热稳定性有所提高,70℃保温60min时,固定化细胞的残存酶活为60%,而未固定化细胞的残存酶活约30%.间歇反应时,固定化细胞催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率可达60%,重复使用10次,仍可保持约70%的酶活.     

高压脉冲电场激活啤酒废酵母细胞中海藻糖酶活性研究

以啤酒酵母细胞中海藻糖酶活性为研究对象,以海藻糖得率为衡量指标,考察不同的电场强度、脉冲数及放置时间对啤酒酵母细胞中海藻糖酶活性的影响情况。研究发现：在pH值为3时,在电场强度为0～50kV/cm、脉冲数为0～10的条件下,未经电场处理的啤酒酵母细胞中海藻糖得率要略高于经电场处理过的,同时在经电场处理并放置2h以后,海藻糖的得率逐渐降低,这说明高压脉冲电场能够在不同程度上激活海藻糖酶的活性,但海藻糖酶在一定时间内持续作用于已溶出的海藻糖,导致海藻糖降解。