黑木耳胶原蛋白酶法提取及分离纯化研究

为获得优质的黑木耳胶原蛋白,本研究通过单因素实验和响应面法对碱性蛋白酶法提取黑木耳胶原蛋白的工艺条件进行优化,并采用盐析、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤等方法对黑木耳胶原蛋白进行分离纯化。结果表明：在酶解温度55℃、pH 8.5条件下优化得到的黑木耳胶原蛋白最佳提取条件为：碱性蛋白酶（2240 IU/mg）添加量7%、料液比1∶68 g/mL、酶解时间2.0 h,此条件下,黑木耳胶原蛋白得率为0.65%;最佳盐析条件为：4 mol/L NaCl、24 h、15℃;最佳DEAE-52分离条件为：洗脱时间160 min、上样浓度300μg/mL、上样pH 7.2、NaCl洗脱浓度0.2 mol/L;经Sephadex G-75凝胶过滤层析后胶原蛋白纯度可达到72.6%,胶原蛋白回收率74.3%。因此,碱性蛋白酶法及盐析、DEAE-52、Sephadex G-75层析可有效提取纯化黑木耳胶原蛋白,为黑木耳胶原蛋白的深入研究及应用开发提供了理论依据。     

黑木耳酪氨酸酶的分离纯化与酶学性质研究

本文分离纯化了黑木耳酪氨酸酶,并对酶学性质进行了研究。采用经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100和DEAE-Sepharose-FF柱层析对粗酶液进行分离纯化,得到电泳纯的黑木耳酪氨酸酶,比活力提高了21.43倍,酶活回收率为27.41%。该酶的酶学性质研究表明:蛋白亚基分子量为12.62ku;最适pH7.0,在中性和碱性条件下稳定;最适温度为40℃,50℃以下温度条件较为稳定;以酪氨酸为底物,米氏常数K m为5.88mmol/L,V max为64.10μmol/min。实验结果表明黑木耳酪氨酸酶具有其它酪氨酸酶相似的酶学特性。      

鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究

本文研究了鲨鱼、鲢鱼、草鱼和罗非鱼鱼骨胶原蛋白的纯化方法并对其特性进行了初步研究.SDS-PAGE电泳结果表明,所提取的四种胶原蛋白纯度均较高,相比之下,鲨鱼骨胶原蛋白纯度最高.通过蛋白酶解研究发现,四种鱼鱼骨胶原蛋白均可被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,水解产物分予量大小各异,成分复杂.酶解蛋白图谱结果表明,不同鱼种鱼骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱有一定差异.鱼品种越接近,提取的骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱差异越小;反之,鱼品种差异越大,骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱差异也越大.氨基酸组成分析表明,鲨鱼和鲢鱼骨胶原蛋白中,甘氨酸含量最丰富,依次是丙氨酸、谷氨酸和精氨酸.     

海参胶原纤维形态及胶原蛋白理化性质研究

海参体壁除水分外主要成分是胶原蛋白,对其理化性质研究将为海参加工提供理论基础。本文以鲜活刺参为原料,通过组织学方法分析了其体壁胶原纤维特征,采用胃蛋白酶促溶法提取海参胶原蛋白,并对其理化性质进行分析。研究表明,海参体壁中以胶原纤维为主,呈网状排列,少见肌原纤维;海参胶原蛋白的紫外特征吸收峰位于235 nm处,在280 nm附近吸收峰较小;傅立叶红外光谱显示其保持三螺旋结构;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示海参胶原蛋白分子组成为(α1)3,且不含二硫键,α1链的分子量约为135kDa;氨基酸组成以甘氨酸含量最高(33.3%),脯氨酸与羟脯氨酸含量为16.4%,符合水产胶原蛋白特征;海参胶原蛋白热收缩温度(Ts)为67.56℃,高于狭鳕鱼皮胶原蛋白,海参热变性温度(Td)为22.3℃,与狭鳕鱼皮胶原蛋白类似。     

黑木耳多糖的提取、纯化及降血脂作用的研究

为明确黑木耳多糖的组分及其生理功能,以复合酶法对黑木耳多糖进行了提取,并以柱层析法对其进行了纯化;以纯化的黑木耳多糖喂饲大鼠,考察了其降血脂的功能。通过试验得到两种黑木耳多糖,即APE I和APE II;各剂量的APE I对大鼠体重没有显著影响;100mg/kg体重及以上的APE I可以显著降低高脂大鼠血清的TG、TC、LDL-C水平,提高其HDL-C水平;200mg/kg体重的黑木耳多糖对高脂大鼠血清的TG、TC、LDL-C和HDL-C的影响与70mg/kg体重的脂必妥的效果没有显著差异,并能够显著提高高脂血症大鼠的HDL-C/TC水平。黑木耳多糖(APE I)具有降血脂功能,对高脂血症的发生有一定的预防作用,同时对冠心病和动脉粥样硬化也有一定的预防作用。     

原型胶原蛋白的提取分离及其结构鉴定

目的 比较不同产品中的原型胶原蛋白构型和理化性质差异。方法 经酶法、盐析等步骤对市售胶原蛋白产品进行提取分离纯化, 利用氨基酸测序技术、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis , SDS-PAGE)和圆二色谱技术对其结构进行鉴定。结果 1号胶原蛋白为变性胶原蛋白, SDS-PAGE方法未检测到蛋白的电泳条带, 表明其无明显的空间结构; 2号胶原蛋白存在混杂现象, 为非纯的原型胶原蛋白; 3号胶原蛋白为典型的Ⅱ型胶原蛋白结构特征, SDS-PAGE结果中存在单一的α链和β链, 与文献资料相符合。结论 3种胶原蛋白均具有典型的胶原蛋白蛋白氨基酸组成, 但由于生产工艺的不同、物种来源、部位的差异, 导致表现出了3种不同的空间构型。     

猪皮中胶原蛋白的提取与结构鉴定

以猪皮为原料,使用酶法提取胶原蛋白,对提取条件和过程进行筛选和优化,并对胶原产物的结构性质进行表征。结果表明,胶原蛋白产物的提取率为65.33%;纯度为87.38%;热变性温度在118.79℃;紫外最大吸收波长为203 nm;相对分子质量为3.63×10~5 g/mol;红外光谱和圆二色谱结果显示,产物具有典型的胶原蛋白吸收峰,说明提取出的胶原蛋白三螺旋结构保存完整;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果显示所得胶原产物主要由3种亚基组分组成。     

鮟鱇鱼皮中胶原蛋白的提取及性质研究

采用0.5 mol/L醋酸提取,结合NaCI沉淀法从鮟鱇鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白(ASC).并对鮟鱇鱼皮胶原蛋白与Sigma公司的牛跟腱I型胶原蛋白(BATC)进行比较,探讨二者在热变性温度、溶解度、黏度及氨基酸组成等方面的差异.SDS-PAGE结果显示ASC有2条α链(α1和α2链)、β链和γ链,表明该胶原为典型的I型胶原蛋白.DSC分析显示两种胶原的热变性温度分别为22.09℃和38.13℃.氨基酸组成分析结果是亚氨基酸含量ASC低于BATC,分别为14.69%和21.59%;甘氨酸含量相近,分别占所有氨基酸总数的40.05%和38.97%.溶解度结果显示ASC和BATC分别在pH 3和pH 4时达到最大值,在pH 7时两者都呈现最小溶解度;NaCl含量对两者溶解度的影响相同,当其含量低于2%时对溶解度的影响不明显,而随着NaCl舍量的增加,溶解度迅速下降.     

鲢鱼鳞胶原蛋白的制备及性质研究

采用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶3种蛋白酶对鱼鳞中的胶原蛋白进行初步提取,选取效果最好的酶用正交实验优化胶原蛋白制备工艺。结果表明,用胃蛋白酶提取鱼鳞胶原蛋白效果最佳,最佳工艺条件为:40℃、48h、酶量4%、pH2,提取率为56.8%。经SDS-PAGE分析,所提取胶原蛋白分子量主要分布在30.0～94.0ku之间。氨基酸组成分析表明,鲢鱼鳞酶解蛋白液中甘氨酸(Gly)含量最高,脯氨酸(Pro)和谷氨酸(Glu)含量次之,而半胱氨酸(Cys)与酪氨酸(Tye)含量较低,符合I型胶原蛋白的组成特征。鱼鳞胶原蛋白随温度的升高黏度下降,乳化性次于对照的I型胶原蛋白。     

鲨鱼鱼皮、鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究

胶原蛋白有许多优良性质且用途广泛。水产动物下脚料如皮、骨、鳍等含丰富的胶原蛋白。本文研究了灰星鲨鱼皮、骨胶原蛋白的提取及纯化方法。SDS-PAGE电泳分析结果显示,所提取的胶原蛋白纯度均较高。通过酶解性质的研究发现:灰星鲨鱼皮、骨胶原蛋白均可被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,水解产物相对分子质量大小各异,成分复杂。酶解蛋白图谱结果提示:鲨鱼皮、骨胶原蛋白一级结构相近。氨基酸组成分析表明,灰星鲨鱼皮及骨胶原蛋白中,甘氨酸含量最高,其余依次是丙氨酸、谷氨酸和精氨酸。     

胶原蛋白结构的研究进展

胶原蛋白来源和应用相当广泛,经济前景可观,胶原分子结构的研究日益重要.本文概括总结了近年国内外胶原蛋白结构研究的重要进展,着重描述了胶原主要的组织分布、类型和结构,为在此基础上揭示胶原蛋白的结构与性能之间的关系,更有效地利用胶原蛋白提供理论指导.     

黑木耳超微粉多糖相对分子质量分布及降血脂功能研究

采用酸法对黑木耳粗粉和超微粉多糖进行分离提取。研究了超微粉粗多糖DEAE-Cellul ose52离子交换层析的分离纯化工艺。样品分出两个峰,将超微粉与两个组分收集后浓缩,采用HPLC法分析多糖组成及相对分子质量分布,并做黑木耳超微粉多糖与粗粉多糖的降血脂功能动物试验。结果表明,最佳分离条件为:洗脱液浓度0.25mol/L,流速200s/mL,上样质量浓度3.5mg/mL。黑木耳经超微粉碎后多糖相对分子质量降低明显;相对于未经超微粉碎获得的粗多糖,超微粉碎后得到的多糖具有更明显的降血脂作用。     

重组人源胶原蛋白的分离纯化及其结构表征

采用巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115/p PIC9KG6进行高密度发酵,获得细胞外分泌型重组人源胶原蛋白(recombinant human-source collagen,RHSC)。SDS-PAGE电泳分析证明:RHSC具有确定的分子质量,分别约为56 k Da的蛋白单体与112 k Da的二聚体。实验中运用透析法、盐析与柱层析结合法对工程菌的发酵上清液进行纯化,结果如下:(1)透析法——最佳条件为4℃,透析24 h,RHSC单体与二聚体混合物回收率接近100%,纯度82.5%。(2)盐析-柱层析结合法——发酵上清液通过40%饱和度硫酸铵沉淀与Sephadex G100纯化后获得二聚体,达到了电泳纯。通过DSC、紫外光谱、红外光谱与核磁共振波谱对分离纯化得到的RHSC进行结构表征,与标准Ⅲ型胶原蛋白比对,确定RHSC具有Ⅲ型胶原蛋白的特征结构。     

黑木耳多糖的酶法提取、纯化及性质研究

本文以双酶法提取黑木耳粗多糖,利用DEAE-Cellulose 52和Sepharose CL-4B柱层析对其进行纯化,以Sephadex G-100凝胶柱层析测定了多糖的分子量。结果表明黑木耳多糖含有两个主要组分APE Ⅰ和APE Ⅱ,分子量分别为31.7×104和18.3×104,均为非淀粉类多糖,不含单糖、蛋白质、核酸及多酚类物质。     

气相色谱法测定黑木耳多糖

黑木耳多糖在黑木耳子实体中是一种非常关键的物质,它除拥有一般物质的生化性质外,还有着一些能够调节免疫、抑菌、抗肝炎、抗突变、抗溃疡、降血糖、降血脂和促进血清蛋白生物合成等其他对人体有用的功效。文中以广西特产的黑木耳子实体为试验材料,经过热水的煮提和乙醇的沉淀之后得到水溶性质的粗多糖,通过使用气相色谱的测定,得到粗多糖组成为,甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖、葡萄糖。     

胶原蛋白的分离纯化及氨基酸组成分析

以新鲜猪皮为原料,用酶法提取胶原蛋白。对提取物用超滤、盐析等方法进行分离纯化,超滤方法较合适。通过电泳方法确定胃酶提取物中胶原蛋白的分子量分布范围在8～10ku,胰酶提取物中胶原蛋白的分子量分布范围在3～5ku。氨基酸分析表明胶原蛋白中Hyp含量达8.5%。     

一种黑木耳酸性多糖的分离纯化及其结构鉴定

采用水提醇沉法从黑木耳粉中提取黑木耳多糖。通过离子交换纤维素(Diethylaminoethyl-52,DEAE-52)及葡聚糖凝胶层析Sephadex G-100对黑木耳子实体多糖(Auricularia auricula polysaccharide,AAP)进行纯化,采用红外光谱(infrared spectroscopy,FT-IR)、高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)、气质联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技术对其主要组分的理化性质和化学结构进行分析,结果表明:AAP为一种具有高分支结构的葡聚糖,黏均分子量为4.50×10~3 Da,其所含鼠李糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和半乳糖的含量比分别为0.3%、17.1%、0.3%、3.1%和63.2%,通过进一步对AAP甲基化分析,并对其糖残基的连接方式进行分析,AAP含有→6)-α-D-Galp-(1→、-Manp-(1→、→3,4)-α-D-Manp-(1→、→3)-α-D-Manp-(1→和→6)-α-D-Glcp-(1→等残基。     

黑木耳天然黑色素理化性质及其抗氧化活性的研究

对黑木耳天然黑色素的理化性质与抗氧化活性进行了研究,结果表明:黑木耳天然黑色素粉末呈黑色(L*=41.03),略带红色和黄色(a*=2.26,b*=3.78),具有与其他黑色素相似的溶解性;黑木耳黑色素热稳定性较强,100℃加热4h后,色素保存率仍达到88.0％,但对光照敏感,自然光照射5d时残存的黑色素仅为25.3％;黑木耳黑色素具有较强的抗氧化能力,1.0mg/mL浓度的黑色素溶液羟自由基清除率和脂质过氧化抑制率均在40％以上.黑木耳黑色素可进一步开发为具有保健功能的天然食用色素.     

黑木耳胶质对豌豆淀粉黏度和质构性质的影响

以黑木耳为原料,采用RVA和质构仪分别测定了黑木耳全粉、黑木耳多糖及黑木耳胶质对豌豆淀粉糊化黏度和质构的影响,发现黑木耳胶质对豌豆淀粉的影响效果明显好于黑木耳全粉和黑木耳多糖;然后与卡拉胶和明胶进行了比较并测定了溶解度和溶胀度.研究结果表明:添加8％黑木耳胶质的淀粉糊峰值黏度、谷值黏度、末值黏度和衰减值均显著提高,分别达到819、568、861、250 RVU,约是原淀粉的3倍;与添加卡拉胶和明胶相比,添加黑木耳胶质对提高豌豆淀粉糊黏度效果更明显,且添加黑木耳胶质的豌豆淀粉凝胶硬度、回复力和内聚力均较高;黑木耳胶质的添加使得豌豆淀粉的溶解度降低,并显著提高了豌豆淀粉的溶胀度.     

草鱼鱼鳞胶原蛋白的提取及其理化性质研究

以草鱼鱼鳞为原料,在低于蛋白变性温度的条件下提取酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对其理化性质进行系统测定。实验结果表明,ASC 和PSC 的热变性温度分别为30～35℃和28～35℃; PSC 在溶解性能、乳化性能和乳化稳定性方面优于ASC,而在溶液黏度、吸水性能、吸油性能、起泡性以及泡沫稳定性方面,ASC 明显好于PSC。