枸杞中绿原酸对转化生长因子-β1诱导心肌成纤维细胞纤维化的影响

目的：考察枸杞中分离得到的绿原酸对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs）纤维化的干预效果。方法：质量浓度10 ng/mL TGF-β1诱导CFs建立心肌纤维化细胞模型，用不同质量浓度绿原酸处理纤维化细胞，细胞毒性实验（cell counting kit-8，CCK-8）检测绿原酸对CFs增殖的影响；酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测纤维化标志蛋白胶原蛋白（collagen，Col）I、Col III和免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）检测Twist1、Acta2、Snail2及纤维化蛋白S100A4等mRNA表达水平；Western blot检测TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白及其磷酸化表达水平。结果：CCK-8检测表明枸杞中分离得到的绿原酸能抑制细胞异常增殖；ELISA和免疫荧光检测表明，枸杞中分离得到的绿原酸能下调纤维化标志蛋白Col I、Col III和α-SMA的表达；qPCR检测表明枸杞中分离得到的绿原酸能高度显著下调纤维化转录调控因子Acta2、Twist1、Snail1、Snail2、Smad4及纤维化蛋白S100A4的mRNA表达（P＜0.001）；Western blot检测表明枸杞中分离得到的绿原酸能高度显著下调TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达（P＜0.001）。结论：在本研究质量浓度范围内，枸杞中分离得到的绿原酸抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化过程，其机制可能与TGF-βl/Smads信号通路有关。     

枸杞多糖抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞活化作用机制

目的：探究宁夏枸杞多糖对转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）诱导的心脏纤维化细胞模型干预作用。方法：分离培养小鼠原代心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs），用质量浓度10 ng/mL TGF-β1作用于CFs，建立心脏纤维化细胞模型，采用宁夏枸杞多糖进行处理，观察细胞形态；免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达水平；Western blot检测TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达及其磷酸化水平；实时荧光定量聚合酶链式反应检测Snail、Twist和S100A4 mRNA的表达水平。结果：与对照组相比，模型组加入TGF-β1后，CFs细胞的形态由梭形变得狭长，细胞数目显著增多；α-SMA蛋白相对表达量升高；TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达及其磷酸化水平升高；Snail、Twist和S100A4的mRNA表达水平高度显著升高（P＜0.001）；给予宁夏枸杞多糖处理，可高度显著抑制TGF-β1诱导的CFs增殖（P＜0.001），减少CFs细胞中α-SMA及TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达，高度显著下调Snail、Twist和S100A4的mRNA表达（P＜0.001）。结论：枸杞多糖对TGF-β1诱导的CFs纤维化具有改善作用，其作用机制与抑制TGF-β1/Smads信号通路有关。     

樟芝提取物Fr.3抑制TGF-β1诱导的肝纤维化机制

探讨樟芝菌丝体正己烷提取物Fr.3组分对TGF-β1诱导的肝星状细胞(CFSC-8B)活化的影响及作用机制。采用TGF-β1诱导CFSC-8B活化,通过MTT、WST-1、小室迁移、qRT-PCR及western blotting法检测Fr.3组分对TGF-β1诱导后的CFSC-8B细胞增值、迁移及细胞外基质的变化,并研究了其对TGF-β1介导的Smad、PI3K、MAPK信号通路中相关蛋白质表达的影响。Fr.3组分的IC_(50)值为54.56μg/mL;在细胞存活率80%以上范围内,Fr.3组分(20μg/mL)可显著抑制TGF-β1诱导的CFSC-8B细胞增值及迁移、明显下调ECM中的相关基因的表达水平及降低α-SMA、Col1、p-Smad2、p-ERK、p-P38及p-AKT的蛋白质表达水平。樟芝菌体正己烷提取物Fr.3可通过调控TGF-β1介导的Smad、PI3K、MAPK信号通路来抑制肝纤维化。     

桑叶生物碱对肝纤维化小鼠的改善作用及机制

目的：观察桑叶生物碱对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/Smads信号通路及基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）mRNA表达的调节作用，探讨桑叶生物碱改善小鼠肝纤维化的作用机制。方法：采用腹腔注射体积分数10% CCl4 橄榄油溶液（5 mL/kg mb）联合高脂饮食诱导小鼠肝纤维化模型。造模8 周后，正常对照组和模型组给予蒸馏水，低、中、高剂量组分别灌胃50、100、200 mg/kg mb剂量的桑叶生物碱，阳性药物组给予100 mg/kg mb水飞蓟宾，持续45 d。采用酶联免疫试剂盒测定各组小鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、I型胶原蛋白（collagen I，Col I）及III型胶原蛋白（collagen III，Col III）含量；采用实时定量聚合酶链式反应测定肝组织TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7、MMP-13、TIMP-1 mRNA表达水平。结果：与模型组比，灌胃高剂量桑叶生物碱（200 mg/kg mb）的小鼠肝组织中α-SMA、Col I、Col III含量分别降低19.55%、19.93%、13.84%（P＜0.05）；TGF-β1、Smad3、Smad4、TIMP-1 mRNA表达水平分别下降59.04%、56.73%、50.70%、49.09%（P＜0.05），Smad7、MMP-13 mRNA表达水平分别上升48.29%、25.72%（P＜0.05）。结论：桑叶生物碱能改善小鼠肝纤维化，其机制可能是对TGF-β1/Smads信号通路相关因子和TIMP-1、MMP-13的基因表达具有调控作用。     

CTGF-siRNA对TGF-β1诱导的肝星状细胞胶原分泌的影响

目的:研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的小RNA(CTGF-siRNA)对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)胶原分泌的影响。方法:实验分为5组:正常组(单纯HSC-T6细胞组)、对照组(TGF-β1诱导组)、siRNA组、非特异siRNA组、lipo组(脂质体组)。培养大鼠HSC-T6细胞,以10ng/mL终浓度的TGF-β1对培养的HSC-T6细胞进行诱导,再通过脂质体法将CTGF-siRNA转染入HSC-T6细胞,通过RT-PCR、Western blotting方法研究各实验组细胞中CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen type I,Col 1a1)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)mRNA及蛋白的表达水平。结果:正常组细胞内CTGF有低水平的表达,在给予TGF-β1诱导后表达水平显著升高(P0.05);TGF-β1刺激24h后,靶向转染入特异性siRNA后,CTGF、Col 1a1、FN及α-SMA的表达均显著下调(P0.05)。结论:本研究提示,通过RNA干扰使CTGF基因沉默后,在体外可明显抑制HSC-T6肝成纤维细胞的表型转化及细胞外基质的合成,进一步提示CTGF是促肝纤维化的关键性细胞因子,而RNA干扰是一种特异高效的很有前途的干预手段,为基因治疗肝纤维化提供实验依据。     

樟芝提取物Fr.2组分对PDGF-BB活化CFSC-8B的抑制作用

为了探讨樟芝分离组分Fr.2对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激的大鼠肝星状细胞(HSCs)的作用,建立PDGF-BB活化的CFSC-8B细胞模型,并对细胞增殖、迁移、细胞外基质表达及机制进行了研究。结果表明,10 ng/mL PDGF-BB作用48 h可诱导CFSC-8B细胞增殖;Fr.2的IC50值为56.46μg/mL;25μg/mL Fr.2显著抑制PDGF-BB刺激CFSC-8B细胞的增殖及其迁移,下调α-SMA、Collagen I(Col 1)、CollagenⅢ(Col 3)和Fibronectin(Fn)mRNA表达水平,并下调p-ERK、p-JNK、p-P38蛋白质表达。表明樟芝Fr.2可抑制PDGF-BB诱导的细胞增殖、迁移及细胞外基质的表达,其机制可能与抑制MAPK信号转导通路有关。     

3S,3’S构型虾青素改善小鼠心肌缺血再灌注损伤的作用研究

摘 要：目的 3S, 3’S构型虾青素（3S,3’S Astaxanthin, 3S,3’S-AST）具有较强的抗氧化活性,然而,其对小鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury, I/R）的保护作用以及可能的机制尚未被研究。Na/K-ATP酶（NKA）/Src信号的激活对增加活性氧（reactive oxygen species, ROS）的产生有重要作用。本研究旨在探讨3S,3’S-AST对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 取SPF级ICR雄性小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为：假手术组（Sham）,心肌缺血再灌注组（I/R）,心肌缺血再灌注给予虾青素组（I/R+AST）,虾青素组（AST）。小鼠心脏经冠状动脉左前降支结扎30 min后,再灌注7 d。qRT-PCR检测心肌重构相关基因TGF-β1、ColⅠ（CollegenⅠ）和ColⅢ（CollegenⅢ）mRNA表达水平,western-blot检测心肌重构、凋亡、NKA/Src/Erk1/2/ROS信号扩增环路相关蛋白ColⅠ、ColⅢ、Bcl-2、Bax、p-Src/c-Src和p-Erk1/2/Erk1/2的表达水平,通过试剂盒检测小鼠血清中心肌损伤及氧化应激标志物LDH、MDA、GSH-PX和CK-MB酶活性,通过ELISA试剂盒检测心肌组织中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α的水平。结果 心肌缺血再灌注小鼠中,心脏组织胶原含量和心肌细胞凋亡损伤明显增加,发生心脏重构。而经口给予3S,3’S-AST能显著减低TGF-β1、ColⅠ和ColⅢ mRNA水平（P＜0.05,P＜0.001）,降低ColⅠ、ColⅢ、Bax蛋白表达并促进Bcl-2表达增高（P＜0.05,P＜0.001）,抑制Src和Erk1/2活化（P＜0.05）,减少心肌纤维化和心肌细胞凋亡。结论 3S,3’S-AST通过抑制NKA/Src/Erk1/2/ROS扩增环路,产生抗氧化及抗炎作用,从而减轻细胞氧化应激损伤导致的细胞凋亡和心肌纤维化,改善I/R心肌重构。     

羊栖菜多酚通过核转录因子-κB/丝裂原活化蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的：研究羊栖菜多酚对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法：噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮（NO）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的基因相对表达量;流式细胞术测定细胞吞噬能力;蛋白免疫印迹法测定信号通路丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）和核转录因子（nuclear factor,NF）-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果：羊栖菜多酚对RAW264.7细胞的安全质量浓度范围为0～160 μg/mL。与LPS组相比,羊栖菜多酚剂量依赖性降低巨噬细胞吞噬能力并抑制NO的生成。同时,羊栖菜多酚下调促炎细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）和炎症诱导酶（iNOS、COX-2）的mRNA水平,且作用效果与给药剂量及LPS刺激时间相关。这些炎性介质的表达与羊栖菜多酚抑制p38 MAPK和NF-κB p65的激活有关。结论：羊栖菜多酚可通过减弱p38 MAPK和NF-κB p65信号通路的激活水平,抑制下游炎症介质的转录表达,从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。     

MAPK信号通路调节卷烟烟气诱导的炎症因子的释放

为评估卷烟烟气对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性效应,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)对BEAS-2B细胞进行检测,使用光学显微镜对细胞形态进行观察,采用Western Blot实验检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)和p38的磷酸化水平的变化,采用酶联免疫吸附实验检测炎症因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的释放水平。结果表明:①卷烟烟气染毒会显著降低BEAS-2B细胞的存活率。②卷烟烟气染毒会激活磷酸化的ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路,并且会诱导炎症因子IL-1β、IL-6和IL-8释放水平升高。③特异性抑制剂分别抑制ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路后,炎症因子释放水平显著下降。卷烟烟气诱导的炎症受MAPK信号通路的调节,该结果可为卷烟烟气诱导的肺部炎症相关疾病的机制研究提供参考。     

天麻素调控SIRT3改善BV2细胞衰老和炎症的作用

目的:探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制。方法:使用不同浓度（10、20、30和40 μg/mL）的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h,建立细胞衰老模型,并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度;实验分为4组:正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3（SIRT3）抑制剂+天麻素组和天麻素组;用CCK-8法检测不同浓度（10、20、30、40和50 μmol/L）的天麻素对D-半乳糖刺激的BV2细胞活力的影响,并筛选出最佳的天麻素浓度;使用β-半乳糖苷酶（Senescence β-Galactosidase,SA-β-Gal）染色检测细胞衰老面积;使用生化法检测各组细胞活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平;使用Enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）法检测各组细胞神经炎症因子IL-1β（Interleukin 1β,IL-1β）、IL-6（Interleukin 6,IL-6）和TNF-α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）水平;使用免疫荧光法检测各组细胞SIRT3荧光强度;使用Western Blot法检测细胞SIRT3、P16和P21的蛋白表达水平。结果:30 μg/mL的D-半乳糖刺激BV2细胞活力极显著降低（P<0.01）,引起BV2细胞中SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达极显著增加（P<0.01）,细胞中ROS水平和炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平极显著增高（P<0.01）,细胞内SIRT3蛋白表达极显著降低（P<0.01）。而30 μmol/L天麻素能极显著提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力（P<0.01）,并且极显著降低细胞SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达水平（P<0.01）,极显著降低ROS水平和神经炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平（P<0.01）,极显著提高细胞内SIRT3蛋白荧光强度和表达水平（P<0.01）。结论:天麻素能够提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力,改善BV2细胞衰老染色和衰老蛋白表达,并降低ROS水平和减缓炎症反应,这可能与天麻素提高SIRT3蛋白表达有关。     

蛹虫草多糖调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的分子机制

多种真菌多糖近年来因其免疫调节活性成为保健食品领域研究的热点。本实验以食药用真菌蛹虫草提取物蛹虫草多糖（Cordyceps militaris polysaccharides,CMP）为研究材料,初步探究CMP对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的调节机制。噻唑蓝实验结果显示CMP无细胞毒性,且100、200 μg/mL CMP可以明显增强RAW264.7细胞活性;中性红法、Griess法和酶联免疫吸附检测结果表明25～200 μg/mL的CMP以剂量依赖方式增强RAW264.7细胞吞噬活性并增加一氧化氮（nitric oxide,NO）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）分泌,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌呈先升高后降低的趋势,在100 μg/mL时达到最高值;抑制剂中和实验结果显示当Toll样受体4（Toll-like receptors 4,TLR4）和甘露糖受体（mannose receptor,MR）受到抑制时,CMP诱导的RAW264.7免疫反应显著降低,这表明TLR4和MR均为CMP激活巨噬细胞的受体;此外,Western blot结果显示丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路也参与CMP诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β。表明TLR4和MR/MAPK信号传导途径在CMP诱导巨噬细胞RAW264.7产生免疫应答时发挥了重要作用。     

沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性

本实验在体外应用脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立炎症模型的基础上,探讨沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性。应用CCK-8法检测0、50、100、200、400、800 μg/mL沙葱总黄酮水洗组分对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活力的影响;将细胞分为空白对照组、LPS应激模型组及不同质量浓度沙葱总黄酮水洗组分预处理组,采用Griess法及酶联免疫吸附测定法分别测定各处理组细胞上清液中NO浓度和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、IL-10的质量浓度,反转录实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各处理组细胞中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、髓样分化蛋白（myeloid differential protein,MyD）88、核因子 κB（nuclear factor κB,NF-κB）mRNA的表达水平。结果显示：与对照组相比,沙葱总黄酮水洗组分在50～800 μg/mL时对小鼠腹腔巨噬细胞无明显细胞毒性作用。与LPS应激模型组相比,沙葱总黄酮水洗组分能够极显著抑制促炎介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.01或P＜0.001）;高度显著提高抗炎细胞因子IL-10质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.001）,且呈剂量依赖效应;极显著降低MyD88、NF-κB mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.001）。由此得出,沙葱总黄酮水洗组分对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞具有抗炎作用,其抗炎活性可能是通过抑制促炎性介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌并提高抗炎性细胞因子IL-10的质量浓度实现的,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

小麦麸皮阿拉伯木聚糖的免疫调节作用

该研究以小麦麸皮阿拉伯木聚糖（AX）为研究对象,探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用及机制。用不同浓度的AX处理小鼠腹腔巨噬细胞,检测AX对小鼠腹腔巨噬细胞活力及NO释放量的影响,用AX处理小鼠腹腔巨噬细胞0、1、3、6 h,检测AX对小鼠腹腔巨噬免疫关联基因及MAPK、Akt通路相关蛋白表达的影响。结果显示6.25和12.5 μg/mL的AX对小鼠腹腔巨噬细胞没有显著毒性,细胞的存活率分别为90.42%和89.99%（p>0.05）。当浓度高于12.5 μg/mL时,细胞存活率显著降低（p<0.05）;与对照组相比,AX（6.25~200 μg/mL）能显著增加小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放量（p<0.05）;同时可以促进免疫关联基因（1L-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX-2、Nfkbia）mRNA的表达,进一步研究发现AX可以增加MAPK和Akt信号通路蛋白（ERK1/2、JNK、p38 MAPK、Akt）的磷酸化水平。上述研究结果表明,AX可以通过活化小鼠腹腔巨噬细胞,增加NO的产生,促进免疫关联基因mRNA的表达,激活MAPK和Akt信号通路,来调节免疫。     

红汁乳菇中愈创木烷型倍半萜化合物的抗炎活性

以新鲜红汁乳菇子实体为原料,采用有机溶剂浸提提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析得到单体化合物,通过紫外-可见光谱、高效液相色谱、质谱和核磁共振波谱分析鉴定单体化合物的结构,利用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导RAW264.7巨噬细胞炎症模型,通过聚合酶链式反应和免疫印迹法分析单体化合物对炎症因子mRNA和蛋白相对表达水平的影响,以及对丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）炎症信号通路的作用。结果：从红汁乳菇中提取出具有较强抗炎活性的单体化合物,经鉴定为愈创木烷型倍半萜类化合物;与模型组相比,该倍半萜能极显著降低脂多糖刺激巨噬细胞中白细胞介素-6（interleukin,IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的mRNA相对表达水平（P＜0.01）;该倍半萜能降低LPS刺激的巨噬细胞中炎症因子环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α蛋白相对表达水平,且呈现一定的浓度依赖性;该倍半萜能降低磷酸化的细胞外信号激酶（p44/42）、p38 MAPK（简称p38蛋白）和c-Jun氨基端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）3 种蛋白激酶的磷酸化水平,从而抑制MAPK炎症通路的活性。     

人参叶多酚GLP-8调控AhR/NLRP3信号通路抑制BaP诱导的气道上皮细胞炎症因子过表达

基于活性追踪方法分离人参叶多酚化合物（Ginseng leaf polyphenols,GLPs)并研究其抗环境污染物苯并芘（Benzo(a)pyrene,BaP）诱发气道上皮细胞（16HBE）氧化、炎症损伤的作用机制。最终分离、鉴定11个人参叶多酚化合物GLP-1~ GLP-11,其中GLP-8（Albaspidin AA,Ginseng leaf polyphenol-8）能够显著抑制BaP诱导的16HBE细胞损伤;相比于BaP组,GLP-8使16HBE细胞活力提升13.90%;GLP-8使BaP诱导的活性氧（Reactive oxygen species,ROS）过量分泌分别降低了19.30%（5 μg/mL）和41.30%（25 μg/mL）;GLP-8使Bap诱导的16HBE细胞凋亡率分别降低5.80%（5 μg/mL）和9.30%（25 μg/mL）;25 μg/mL GLP-8作用后,BaP诱导的炎症因子IL-33、IL-25、IL-1β及IL-6的表达分别减少60.10%、28.90%、33.50%及41.90%;GLP-8抑制芳香烃受体（AhR）及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）信号通路激活。因此得出,GLP-8具有通过调控AhR/NLRP3信号通路抑制BaP诱导的ROS过量分泌及炎症因子过表达来发挥保护气道上皮细胞活性的功能。     

金雀异黄酮通过调控Ca2＋-CaMKIV通路对Aβ25-35诱导海马神经元损伤的保护作用

目的：观察金雀异黄酮通过Ca2＋-钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（calmodulin-dependent protein kinase IV,CaMKIV）通路对Aβ25-35诱导海马神经元损伤的保护作用。方法：取24 h内新生SD乳鼠的海马组织,进行神经元的分离纯化和培养,并用免疫荧光染色进行鉴定。神经元细胞随机分为空白对照组、模型组、金雀异黄酮组（50 μmol/L）和阳性对照戊酸雌二醇组（10 μmol/L）,金雀异黄酮组和戊酸雌二醇组预处理3 h后,除空白对照组外,其他各组采用Aβ25-35诱导海马神经元构建细胞损伤模型。利用噻唑蓝法检测细胞存活率,荧光探针检测神经元细胞内Ca2＋荧光强度,Western blot检测钙调蛋白（calmodulin,CaM）、钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinase kinase,CaMKK）、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（p-calmodulin-dependent protein kinase,p-CaMKIV）和p-Tau蛋白的相对表达量。结果：免疫荧光分析结果显示大鼠海马神经元分离成功。与空白对照组比较,模型组海马神经元细胞存活率极显著下降（P＜0.01）,细胞Ca2＋荧光强度极显著升高（P＜0.01）,CaM、CaMKK、p-CaMKIV和p-Tau蛋白相对表达量极显著提高（P＜0.01）;与模型组比较,金雀异黄酮极显著提高了Aβ25-35所致海马神经元损伤模型中细胞的存活率（P＜0.01）,降低了细胞Ca2＋荧光强度（P＜0.01）,下调了CaM、CaMKK、p-CaMKIV和p-Tau蛋白相对表达量（P＜0.01）。结论：金雀异黄酮对Aβ25-35诱导的海马神经元损伤具有明显的神经保护作用,其作用可能是通过Ca2＋-CaMKIV通路介导的。     

紫甘蓝总花色苷提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的炎症反应

探讨紫甘蓝总花色苷提取物对脂多糖(LPS,1μg/mL)诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响。以不同质量浓度(1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL)的紫甘蓝总花色苷提取物处理RAW264.7细胞后,试剂盒法分别检测一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE_2)的分泌水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8分泌水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达水平。结果显示,紫甘蓝总花色苷提取物能有效下调iNOS与COX-2的m RNA表达,抑制NO和PGE_2的释放。特别地,高浓度的紫甘蓝总花色苷提取物(50μg/mL)能显著地抑制LPS所诱发的iNOS(65.80%)与COX-2(48.28%)的m RNA表达,降低NO(58.81%)和PGE_2(46.26%)的释放水平。同时,紫甘蓝总花色苷提取物还能显著下调TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达水平,并抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的分泌。结果表明,紫甘蓝总花色苷提取物具有较强的抗炎活性,能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞所发生的炎症反应。     

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人单核白血病细胞（Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1）炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g（纯度>96.5%）。用不同质量浓度（0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL）Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS（质量浓度50 ng/mL）与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac...     

连花清瘟胶囊对急性肺损伤小鼠炎症因子的影响

目的探讨连花清瘟胶囊对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠炎症因子的影响。方法 60只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组、连花清瘟高(8.04 g生药/kg)、中(4.02 g生药/kg)、低剂量组(2.01 g生药/kg),除正常对照组外,均气管滴注细菌脂多糖(LPS)5 mg/kg进行造模,造模后24 h取血,流式细胞术检测全血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素8(IL-8)表达;取肺组织,Western blot法检测肺组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白表达。结果与模型组相比,连花清瘟高、中剂量组TNF-α、IL-1β、IL-8的表达水平显著降低(P0.05);连花清瘟高剂量组p-p38 MAPK蛋白表达显著下调(P0.05)。结论连花清瘟胶囊对LPS诱导的小鼠急性肺损伤有一定的保护作用,其机制可能与调控p38 MAPK通路,抑制炎症因子释放有关。