牛乳中αs、β-酪蛋白组分的分离

以新鲜脱脂牛乳为原料,在碱性条件下添加钙盐进行选择性沉淀分离αs-、β- 酪蛋白组分,并用十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从CaCl2 溶液终浓度、冷却温度和反复溶解﹑沉淀次数三个方面对αs-、β- 酪蛋白的分离效果进行研究。结果表明：CaCl2 溶液终浓度0.065mol/L,冷却温度2℃,经3 次反复溶解﹑沉淀,分离得到的αs- 酪蛋白组分纯度较高,可达83.33%,β- 酪蛋白组分纯度为109.53%。     

超高压处理对酪蛋白中α/β-酪蛋白消化性影响

以市售酪蛋白为原料,分别研究了0.1、100、200、300、400、500、600 MPa压力对酪蛋白进行处理,并考察α-酪蛋白、β-酪蛋白组分在模拟胃、肠液中的消化性。采用高效液相色谱法,以0.1%的三氟乙酸水溶液和0.1%的三氟乙酸乙腈溶液为流动相,流速为0.8 m L/min,在280 nm波长下检测α-酪蛋白、β-酪蛋白峰面积变化。结果表明,在压力为500 MPa、保压时间20 min,温度为37℃条件下酪蛋白胶束结构被破坏,且所含α-酪蛋白、β-酪蛋白在胃、肠液中的可消化性均得到改善。     

牦牛奶中不同酪蛋白的提取及其功能特性研究

本研究以新鲜牦牛乳为原料,添加钙盐后利用其等电点分离提取牦牛奶中的不同酪蛋白,利用单因素实验筛选牦牛奶中α-、β-、κ-酪蛋白的提取分离参数;并利用电泳(SDS-PAGE)分析牦牛乳不同酪蛋白纯度。同时对牦牛乳中α-、β-、κ-酪蛋白的溶解性、乳化性、发泡性进行分析比较。结果表明:牦牛奶不同酪蛋白分离的最佳Ca~(2+)浓度为0.08 mol/L,最佳温度2℃,此时牦牛乳中α-、β-酪蛋白分离效果较好。牦牛乳不同酪蛋白在等电点(p I)附近时,α-、β-、κ-酪蛋白溶解性、乳化性、发泡能力最低,泡沫稳定性最好。等电点附近酪蛋白的溶解度最低,α-、β-酪蛋白pH值在2.1时溶解度最高(分别为60%、80%),而k-酪蛋白在pH值6.22时最高(43%);在40～80℃范围内,κ-酪蛋白溶解度受温度影响显著;当pH值为2.1时,α-、β-、κ-酪蛋白的乳化能力和发泡能力都最大,其乳化稳定性则是远离等电点后逐渐上升;本研究旨在为牦牛乳酪蛋白的利用和深加工提供思路,为云南特色乳制品的开发利用提供科学依据。     

低温微滤处理对牛乳组成、胶束结构及凝乳性质的影响

β-酪蛋白具有低温溶出的特性。本文通过低温微滤处理制备了β-酪蛋白脱除率为10、20、30%的牛乳,运用HPLC、场发射扫描电镜、流变仪以及激光共聚焦研究了这些牛乳的蛋白组分、酪蛋白胶束结构及凝乳性质变化。结果表明：脱脂乳与低温微滤处理得到的牛乳样品的脂肪含量,总钙含量及pH值无显著性差异,但总蛋白含量有显著性差异,其中κ-酪蛋白和αs2-酪蛋白浓度无差异,αs1-酪蛋白浓度有显著差异,但低温处理样品间αs1-酪蛋白浓度则无差异,β-酪蛋白及乳清蛋白浓度差异极显著,其浓度随处理时间增加显著减小。脱脂乳与牛乳样品均可形成致密的具有空隙的凝胶结构,且其酸凝乳及酶凝乳所表现的流变学变化趋势相似,但随着β-酪蛋白脱除率升高,表征凝乳块硬度的最大G''逐渐下降,凝胶结构逐渐变疏松,出现的孔隙则更大更多。     

牛乳αS1-酪蛋白与大豆蛋白交叉过敏原的识别鉴定

为识别牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原,鉴定其致敏特性,揭示交叉过敏机理,首先以牛乳过敏患者血清、αS1-酪蛋白小鼠单克隆抗体为探针,通过免疫印迹方法识别大豆蛋白交叉过敏原,然后通过生物信息学工具比对了交叉过敏原与αS1-酪蛋白的氨基酸序列相似性,进而通过体外消化实验和加热实验探究交叉过敏原的稳定性。结果表明：牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原为β-伴大豆球蛋白α亚基（Gly m Bd 60K）,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明Gly m Bd 60K在2 min消化完全,并且加热对过敏原的交叉反应性没有影响。     

干酪素中αs-酪蛋白组分分离

以干酪素为原料,以αs-酪蛋白的得率和纯度为指标,对传Urea体系、Ca2+-低温体系分离αs-酪蛋白的方法进行比较分析,并综合两者的特点,建立Ca2+-Urea体系分离αs-酪蛋白的方法.Ca2+-Urea体系先采用pH值为7.0,Ca2+浓度0.05 mol/L条件处理去除原料中的k-Cn;再用pH值为4.6,浓度为3.3 mol/L尿素溶液处理,去除β-和γ-Cn.结果表明,Ca2+-Urea提系优于Urea体系和Ca2+-低温体系,最终α-酪蛋白的得率为38.3%,纯度为97.8%.     

干酪素中α_s-酪蛋白组分分离北大核心

以干酪素为原料,以αs-酪蛋白的得率和纯度为指标,对传统Urea体系、Ca2+-低温体系分离αs-酪蛋白的方法进行比较分析,并综合两者的特点,建立Ca2+-Urea体系分离αs-酪蛋白的方法。Ca2+-Urea体系先采用pH值为7.0,Ca2+浓度0.05 mol/L条件处理去除原料中的κ-Cn;再用pH值为4.6,浓度为3.3 mol/L尿素溶液处理,去除β-和γ-Cn。结果表明,Ca2+-Urea提系优于Urea体系和Ca2+-低温体系,最终αs-酪蛋白的得率为38.3%,纯度为97.8%。     

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用,从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３ 个纯组分,并对各组分的氨基酸组成和Ｎ 末端２～３ 个氨基酸序列进行了分析测定,从而确定了３ 个组分的结构,它们分别是αｓ１（６１～７９）、αｓ１（４３～７９）和β（７～２４）．与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较,用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短．     

低聚半乳糖糖基化法降低牛乳αs1-酪蛋白抗原性和免疫原性

用等电点沉淀法从牛乳中提取酪蛋白,根据αs-酪蛋白对尿素溶液溶解特性从酪蛋白中提取αs-酪蛋白,并用阴离子交换层析使αs1-酪蛋白与αs2-酪蛋白分离。用低聚半乳糖通过在一定条件下的美拉德反应对αs1-酪蛋白进行糖基化处理,通过竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的抗原性。结果表明,该糖基化产物的抗原抗体结合常数Kd较αs1-酪蛋白上升3.7倍,即低聚半乳糖糖基化处理使αs1-酪蛋白的抗原性得到显著降低。用动物实验和非竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的免疫原性,结果显示免疫原性降低19%,该实验证实对降低牛乳αs1-CN抗原性和免疫原性具有显著效果,为开发较理想的、切实可行的新脱敏奶粉生产技术提供了科学依据。     

牛乳酪蛋白性质的研究

研究和比较了牛乳中α＿ｓ－酪蛋白和β－酪蛋白的酸凝性质和酶水解性质，指出牛乳中α＿ｓ－酪蛋白的大量存在是造成不易消化的根本原因。     

山羊β-酪蛋白的分离及其含量的测定

从呼和浩特市周边地区采集的新鲜山羊奶，通过离心脱脂，调节等电点沉淀蛋白，对所得沉淀物进行DEAE离子交换层析，分离出α-酪蛋白和β-酪蛋白，并且β-酪蛋白被完全纯化出来。建立ELIsA双夹心方法对β-酪蛋白的含量进行测定，该法可直接用于培养液中β-酪蛋白的定量分析。     

酪蛋白肽电荷性质对其肽-锌螯合物的胃肠稳定性及吸收的影响

为研究酪蛋白肽的电荷性质对肽-锌螯合物的胃肠稳定性及生物利用率的影响,以酪蛋白为原料,经碱性蛋白酶水解后,采用Sephadex C-25阳离子交换柱分离酪蛋白肽,对分离得到的肽组分的ξ电势以及氨基酸组成进行分析,并以此酪蛋白肽制备肽-锌螯合物;随后采用体外胃液-肠液-Caco-2细胞的三段式消化吸收模型考察肽-锌螯合物的胃肠消化稳定性。研究结果表明,酪蛋白肽的表面净负电荷越多,对锌的螯合能力越强,在胃肠消化过程中也越稳定;同时,较低的ξ电势也有利于肽-锌螯合物的吸收。因此,带有负电荷的酪蛋白肽可以作为一种促锌吸收剂应用于功能性食品中。     

A2β-酪蛋白的功能性及其在乳制品中应用的研究进展

牛奶中富含多种营养成分,包括蛋白质、脂质、碳水化合物等,每100 g牛奶中就含有3 g蛋白质,其中主要包括乳清蛋白和酪蛋白。β-酪蛋白占牛奶蛋白总量的24%～28%,其主要包括两种基因型：A1型与A2型。A1β酪蛋白经消化后产生的β-酪啡肽-7会导致人体消化功能紊乱、心血管疾病等不良反应。A2β-酪蛋白则产生较少甚至并不产生β-酪啡肽-7,在胃肠道消化、提高抗氧化功能、降低胆固醇浓度等方面具有益生作用。本文综述了β-酪蛋白基因型在人体内消化后所产生的影响,并阐述了A2β-酪蛋白的益生功能,讨论其对人体健康的作用。并从β-酪蛋白基因型在乳制品中的应用入手,阐述A2β-酪蛋白乳制品的研究进展,为今后乳制品中A2β-酪蛋白的功能研究提供指导意义。     

辣木凝乳酶水解酪蛋白位点及其酪蛋白磷酸肽、酪蛋白糖巨肽

基于十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,液相色谱-串联质谱法研究辣木凝乳酶对酪蛋白的酶切位点和水解特性,并分析该凝乳酶水解产生的酪蛋白糖巨肽和酪蛋白磷酸肽。结果表明,辣木凝乳酶酶切κ-酪蛋白的Arg 93-His 94位点导致凝乳,区别于其他已报道的凝乳酶,具有明显特异性。酶作用下κ-酪蛋白的米氏常数Km=0.49 mg/mL,最大反应速率Vm=45.2 U/min,有效促进酪蛋白胶束的聚集和凝乳。该酶对α-、β-、κ-酪蛋白产生不同程度的水解,对α-酪蛋白的水解速度最快,说明其适用于软质奶酪的加工。以酪蛋白为底物,通过钡-乙醇沉淀法得到酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides,CPPs）,产率为15.87%,得到的CPPs可以使钙沉淀推迟23 min,有利于钙离子被肠道有效吸收。以水牛乳为底物时,乳凝固后析出的乳清中含酪蛋白糖巨肽6.61 mg/mL,糖基化程度477.527 μg/mg。研究为新型植物凝乳酶的研发,及其在奶酪、酪蛋白活性肽等产品的应用提供科学依据。     

牛乳主要过敏原αS1-酪蛋白的纯化鉴定及其多克隆抗体的制备

目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得α_S1-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别α_S1-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对α_S1-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质（等电点和含量）、免疫学技术和质谱技术对纯化的α_S1-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的α_S1-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性。结果:在4种酪蛋白中,α_S1-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26%的α_S1-酪蛋白,得率为27.19%。免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应（<0.25%）外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高。结论:本研究制备了高纯度的α_S1-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为α_S1-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础。     

低温微滤技术制备富含β-酪蛋白和乳清蛋白的新型功能性乳蛋白配料

以市售的巴氏杀菌脱脂乳为原料,探究膜孔径、温度、洗滤液和洗滤次数等条件对β-酪蛋白和乳清蛋白分离效果和膜通量的影响,最终制备了富含β-酪蛋白与乳清蛋白的新型功能性乳蛋白配料。研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱对蛋白做定性和定量分析。研究表明,在4℃条件下,使用30 nm孔径的陶瓷膜,以水作为洗滤液,可使得β-酪蛋白的分离效果最佳;在最优条件下,脱脂乳经微滤浓缩3倍后,再在相同条件下补水洗滤4次,将膜过滤各阶段所得的透过液混合,可得到β-酪蛋白和乳清蛋白的产率分别为51.7%和99.7%,复合蛋白中β-酪蛋白和乳清蛋白所占比例分别为51.1%和40.0%,而αs-酪蛋白的含量得以大大降低,该功能性复合蛋白可作为一种新型的功能性蛋白配料用于配方乳粉等婴幼儿食品的研制。     

酪蛋白磷酸化工艺技术的研究

采用三聚磷酸钠对酪蛋白进行磷酸化改性，确定了正交实验的反应条件，通过实验得到最佳反应条件：酪蛋白的浓度约为1％，三聚磷酸纳的浓度为5％，反应pH值为9．0，反应温度为30℃，反应时间为3h。通过红外分光光度计对磷酸化前后的等质量蛋白（0，0015g）做出了红外吸收图谱，通过两图对比可以看出磷酸化给酪蛋白的结构带来的变化。     

茶多酚——蛋白质之间的络合及沉淀回收研究

从绿茶中提取了含有5种儿茶素单体的茶多酚，对菠萝蛋白酶、大豆分离蛋白、酪蛋白、细胞色素C、胰蛋白酶、淀粉酶以及木瓜蛋白酶等蛋白质进行络合、沉淀及回收。茶多酚和这些蛋白质表现出混活性。在特定的蛋白质浓度下，茶多酚与各种蛋白质络合时的起混浓度分别是：猪胰蛋白酶为0．5％；大豆分离蛋白、木瓜蛋白酶及α-淀粉酶为0．1％，菠萝蛋白酶为0．3％；细胞色素C为0．4％。用0．7％的茶多酚对菠萝蛋白酶的蛋白质最大回收率为60％，而对木瓜蛋白酶活性的最大回收率可达78％；0．5％的茶多酚对胰蛋白酶及酪蛋白的最大回收率分别为8％和7％左右。0．8％的茶多酚对大豆分离蛋白、细胞色素C的最大回收率约20％左右。实验结果不表明，茶多酚对来自米曲霉的α-淀粉酶无抑制作用，通过0．3％的茶多酚浓度，可以获得约71％的α－淀粉酶活性最高回收率。     

响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体检测方法的酶解条件

利用响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法的酶解条件。将酶解设备（X1）、酶解时间（X2）和酶加入量（X3）作为影响因子，以A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量（Y3）的质量浓度为评价指标。根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，针对检测方法中酶解反应这一关键步骤，通过单因素实验优选，响应曲面法研究酶解时间（X2）和酶加入量（X3）与A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量（Y3）之间的关系。确定最佳酶解条件为：酶解设备（X1）为水浴摇床，酶解时间（X2）为2.5 h，酶加入量（X3）为15μL。     

β-伴大豆球蛋白水解产物中糖肽的分离和鉴定

本研究对大豆蛋白水解产物中含糖的肽组分进行了分离和鉴定。从大豆蛋白中分离出相对纯度为75．5％、含糖量为3．23％的B．伴大豆球蛋白后，以β-伴大豆球蛋白为底物，用Alcalase进行酶解调制大豆肽。所得大豆肽SephadexG-25凝胶过滤，得到两个组分P1和P2，分子量较大P1含糖量为8．23％。用薄板层析对这一含糖的肽组分进行了鉴定，结果表明此含糖的肽为糖结合性肽。