化痰消瘤方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探讨化痰消瘤方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,分为化痰消瘤方低剂量组、中剂量组、高剂量组,环磷酰胺组,空白组。分别于含药血清中培养24 h、48 h、72 h后,进行观察和检测,独立重复实验3次。采用MTT法检测细胞增殖情况,显微镜下观察细胞形态学变化。结果:各药物干预组吸光度在同一时段内与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);化痰消瘤方各剂量组吸光度同一时段内与环磷酰胺组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。化痰消瘤方含药血清对A549细胞增殖的抑制率随药物浓度的增加不断提高。除化痰消瘤方低剂量组外,其余各组随着时间的延长,对A549细胞增殖的抑制率不断提高。显微镜下可见化痰消瘤方各剂量组肺腺癌A549细胞出现胞膜皱缩内陷的细胞凋亡征象。结论:化痰消瘤方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的浓度及时间依赖性,同时可诱导细胞凋亡。     

扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞体外增殖和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡相关蛋白的影响。方法:60只雄性SD大鼠,随机分为6个组,每组10只,分别为扶正消瘤颗粒低剂量组、扶正消瘤颗粒中剂量组、扶正消瘤颗粒高剂量组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、联合组、对照组。中药各剂量组给予不同剂量扶正消瘤颗粒灌胃;5-FU组给予5-FU腹腔灌注;联合组给予中剂量的扶正消瘤颗粒灌胃,同时给予5-FU腹腔灌注;对照组给予生理盐水灌胃。采用四甲基偶氮唑盐比色法检测肝癌HepG2细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测肝癌HepG2细胞凋亡;Western-Blot法观察各组肝癌HepG2细胞P53蛋白、Bcl-2蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:扶正消瘤颗粒含药血清可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性;其中联合组对肝癌HepG2细胞的抑制率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度扶正消瘤颗粒含药血清均可诱导肝癌HepG2细胞的凋亡,联合组凋亡率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,各扶正消瘤颗粒含药血清组均可下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达。结论:扶正消瘤颗粒含药血清可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用可能是通过抑制Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达实现的。     

扶正消瘤颗粒对人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察扶正消瘤颗粒对人表皮生长因子受体2(HER-2)阳性乳腺癌细胞SKBR-3增殖和凋亡的影响。方法 SKBR-3细胞以2×106/2 000μL的密度接种到6孔培养板中,共5组。24 h后分别加入1倍、2倍、3倍剂量的扶正消瘤颗粒含药血清,以赫赛汀为阳性对照,空白血清为空白对照。加药后72 h,分别用四甲基偶氮唑蓝显色(MTT)法及流式细胞仪检测SKBR-3细胞的增殖和凋亡。结果 2倍剂量的扶正消瘤颗粒和赫赛汀均可抑制SKBR-3细胞增殖;3种剂量的扶正消瘤颗粒均可促进SKBR-3细胞早期凋亡,2倍剂量组早期凋亡率及总凋亡率最高。结论扶正消瘤颗粒可明显促进乳腺癌SKBR-3细胞凋亡,2倍剂量的扶正消瘤颗粒能抑制乳腺癌SKBR-3细胞增殖。     

多发性骨髓瘤的治疗进展

本文通过分析多发性骨髓瘤的治疗进展,旨在为多发性骨髓瘤治疗提供新的靶点。研究发现磷脂酰肌醇3-激酶(phos-phatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸蛋白激酶Akt/及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin,mTOR)所组成的信号通路在多发性骨髓瘤中的发生发展中可以促进瘤细胞的增殖、抑制凋亡及促进血管新生。故通过多步骤抑制PI3K/Akt/mTOR信号转导通路联合抗肿瘤药物可以明显提高骨髓瘤细胞化疗效果。     

扶正解毒方对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨扶正解毒方对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的作用。方法:将10只大耳白兔随机分为扶正解毒方高剂量组、中剂量组、低剂量组,对照组,环磷酰胺(CTX)组5组,每组各2只。扶正解毒方高剂量组、中剂量组、低剂量组分别按16 g·kg-1、8 g·kg-1、4 g·kg-1剂量口服灌胃;对照组给予相同剂量生理盐水,每日1次,连灌1周;环磷酰胺(CTX)组第1天予20 mg·kg-1腹腔注射。末次用药后1 h,各组均在无菌条件下心脏采血,分离血清。采用血清药理学方法,对A549细胞株进行体外培养,然后分别加入扶正解毒方高剂量、中剂量、低剂量含药血清、对照组含药血清、CTX含药血清,通过光学显微镜直观法、细胞计数法、MTT法、流式细胞仪法等对A549细胞生长及凋亡指标进行测定。结果:A549细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变;细胞生长曲线提示,扶正解毒方对A549细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;MMT法提示,扶正解毒方对A549细胞生长的抑制率随浓度的增加而增加,呈效应-剂量依赖关系;流式细胞仪检测显示,细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加,药物作用72 h后,扶正解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组凋亡率分别为(6.30±1.01)%、(15.72±1.54)%、(23.40±1.34)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:扶正解毒方可抑制肺腺癌A549细胞生长、诱导细胞凋亡。     

PI3K/Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Western blot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72 h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强(P<0.05)。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组(P<0.05)。成骨诱导培养3和7 d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组(P<0.05)。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7 d也显著高于1μmol/L组(P<0.05)。Western blot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7 d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix 4种基因mRNA表达(均P<0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

COLPH3、PI3K/Akt/mTOR信号通路与胃癌发生、发展关系

胃癌的发生、发展过程较为复杂,在此过程中不但会涉及基因突变,还会涉及细胞中信传导通路改变。细胞中重要的一种信号传导通路为磷脂肌醇3-激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路,参与了胃癌侵袭与转移过程,可对多种刺激作用诱发的机体胃癌细胞凋亡进行有效抑制,对血管的形成与细胞的周期进展产生促进作用。高尔基磷酸化蛋白-3(Golgi phosphoprotein-3,GOLPH3)基因及其表达产物在胃癌的发生、发展过程中起着重要作用,可促进肿瘤细胞的生长与增殖。本文主要对COLPH3、PI3K/Akt/mTOR信号通路与胃癌发生、发展关系进行探究,旨在为临床治疗提供有效的参考价值。     

人参、黄芪和刺五加提取物对斑蝥增效的作用及机制

目的:观察人参、黄芪和刺五加提取物对斑蝥提取物抑制A549人肺腺癌细胞生长和促进肿瘤细胞凋亡作用的影响。方法:实验分为斑蝥提取物组、斑蝥提取物+人参组、斑蝥提取物+黄芪组、斑蝥提取物+刺五加组、斑蝥提取物+人参+黄芪+刺五加组和对照组(PBS缓冲液)。检测3种提取物分别以及联合应用对斑蝥提取物抑制A549人肺腺癌细胞的生长效应,A549细胞形态、细胞凋亡情况和Caspase-3凋亡相关蛋白表达的影响。结果:MTT比色法检测显示人参、黄芪和刺五加提取物能增强斑蝥提取物对A549细胞增殖的抑制作用,3种提取物联合使用对斑蝥提取物的增效作用更明显(P <0. 05)。镜下显示:斑蝥提取物能引起A549细胞悬浮、生长迟缓和活性降低;人参、黄芪和刺五加提取物干预后,细胞悬浮更加明显,死亡细胞数目也显著增多(P <0. 05)。流式检测显示:人参、黄芪和刺五加提取物能增强斑蝥提取物引起的A549细胞凋亡,3者联合使用对斑蝥提取物的增效作用更明显(P <0. 05)。Western blot法检测显示:人参、黄芪和刺五加提取物能一定程度上调斑蝥提取物所致A549细胞中Caspase-3蛋白的表达,3者联合使用后对斑蝥提取物的增效作用更明显(P <0. 05)。结论:人参、黄芪和刺五加提取物对斑蝥提取物具有一定的增效作用,3者联合使用增效作用更加明显,可能与调节A549细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达相关。     

补肾益肺消癥方对TGF-β_1诱导的A549细胞凋亡及Caspase12信号通路关键蛋白表达的影响

目的:观察补肾益肺消癥方对TGF-β_1诱导A549细胞凋亡的影响及其对半胱天冬氨酸蛋白12 (cysteme aspartate specific protease 12,Caspase12)信号通路中关键蛋白表达的影响。方法:通过CCK-8筛选两种浓度的中药冻干粉干预TGF-β_1诱导的A549细胞,以TGF-β_1抑制剂为阳性对照,流式细胞仪检测细胞凋亡,western-blot检测Caspase12信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:模型组细胞凋亡率较正常组显著增高(P<0.01),对照组及中药组细胞凋亡率较模型组显著降低(P<0.01);模型组细胞中Caspase12通路相关蛋白表达较正常组显著增高(P<0.05或P<0.01);对照组及中药组Caspase12通路相关蛋白表达较模型组均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾益肺消癥方可通过缓解Ⅱ型肺泡上皮细胞中持续的内质网应激及其诱导的Caspase12凋亡信号通路中关键蛋白的表达,减少Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡,延缓肺纤维化的病理进程。     

PTEN/NF-κB/Caspase信号通路对K562/ADM细胞阿霉素耐药逆转机制的研究

目的:探讨PTEN/Akt/NF-κB信号通路对阿霉素耐药慢性粒细胞白血病细胞系K562/ADM细胞耐药逆转的分子作用机制。方法:将携带有野生型PTEN基因及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)或空载体(Ad-GFP)腺病毒转染K562/ADM细胞,在转染3d内联合应用不同浓度阿霉素(ADM),观察PTEN基因对阿霉素的协同抑制作用,根据IC50计算药物逆转倍数。通过MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测转染效率、细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、NF-κB、I-κB、P53基因水平变化,Western blot检测PTEN、Akt、p-Akt、P65蛋白质水平变化。结果:Ad-PTEN-GFP转染与阿霉素联合作用后,K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性增加,细胞增殖明显受抑,凋亡率明显高于Ad-GFP与阿霉素联合作用组,耐药逆转倍数为3.8倍。与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP转染K562/ADM细胞3d后PTEN蛋白表达明显增加,p-Akt与P65蛋白表达明显下调,NF-κB mRNA表达水平下调,I-κB mRNA无明显改变,P53 mRNA表达轻度升高、Caspase-3/7活性增强。PTEN mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平负相关(r=-0.968,P<0.05),NF-κB蛋白活性与Caspase-3/7活性负相关(r=-0.986,P<0.05)。结论:野生型PTEN可能通过抑制PI3K/NF-κB/Caspase信号传导通路,逆转K562/ADM细胞的多药耐药。