加味香砂六君子汤抑制胃癌细胞增殖、侵袭及其机制的研究

目的:探讨加味香砂六君子汤含药血清对胃癌细胞SGC7901增殖、侵袭的影响及其机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为空白组,加味香砂六君子汤低剂量组、中剂量组、高剂量组[(1.55、3.1、6.2 g·(kg·d)~(-1)]及5-FU组(0.5 g·L~(-1)),每组5只。对照组灌服等体积生理盐水,按常规方法动物等体积灌胃,每天2次,连续5 d。末次灌胃后1 h固定动物,按无菌操作进行动物颈动脉采血,分离血清,56℃,经0.22μm滤膜抽滤除菌,制备低剂量组、中剂量组、高剂量组含药血清干预人胃癌SGC7901细胞。CCK8法观察不同浓度含药血清对细胞增殖影响;Transwell细胞侵袭实验检测含药血清作用SGC7901后细胞侵袭能力;梯度PCR检测Smo、Ptch1、Gli1的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达水平。结果:不同浓度含药血清对SGC7901增殖有明显抑制作用,随着浓度的增加,抑制率更加明显,且各实验组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,各浓度含药血清作用后SGC7901细胞穿膜细胞数降低(P<0.05);与对照组比较,不同浓度的含药血清可明显降低Smo、Ptch1、Gli1的mRNA表达(P<0.05);各实验组Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达也明显减少(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤含药血清对胃癌细胞增殖有抑制作用,抑制细胞侵袭,其机制可能与抑制Hh信号通路活化有关。     

郁金含药血清对HSC-T6细胞增殖抑制作用的影响

目的:观察郁金含药血清对肝星状细胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)细胞增殖抑制的研究。方法:25只SD大鼠随机分5组:郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组(16.2 g·kg-1、8.1 g·kg-1、4.0 g·kg-1),秋水仙碱组(5g·kg-1)以及空白组(给予等体积生理盐水),连续灌胃给药4 d后,于第4天一次性给药1 h后,乙醚麻醉腹主动脉取血制备含药血清;将HSC-T6细胞分为6组,郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白组、秋水仙碱组、阴性对照组(加入等体积的PBS代替大鼠血清),分别取用体积分数5%、10%、20%的含药血清,同时作用于各组HSC-T6细胞24 h、48 h、72 h后,采用四氮噻唑蓝法在酶标仪(490 nm波长)上检测各组OD值,分别计算其增殖率和抑制率。结果:与阴性对照组比较,除作用24 h、体积分数5%组外,大鼠血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖速度,其增殖率与大鼠血清含量呈正相关。与空白组比较,除作用24 h、体积分数5%含药血清各剂量组、低剂量20%组以及秋水仙碱20%组没有明显抑制作用外,其余各郁金剂量组均有增殖抑制作用,其中体积分数10%组的抑制效果明显高于体积分数20%组(P<0.05)。作用48 h后,各干预含药血清的3个浓度组均有明显抑制作用,其中郁金体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P<0.05);作用72 h后,除秋水仙碱组外,各郁金剂量组均有明显抑制作用,其中含药血清体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P<0.01)。结论:大鼠郁金含药血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖;郁金含药血清在体外可以有效抑制HSC-T6细胞的增殖,但抑制率与含药血清体积分数、作用时间呈非线性关系,抑制率最为显著的是含药血清体积分数10%,作用时间48 h。     

基于微流控芯片的CAFs影响胃癌细胞耐药及GRP-78表达相关性

目的:利用微流控芯片平台探索肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)影响人胃癌SGC7901细胞对化疗药物的耐药及其与GRP78表达的相关性,从而为临床工作提供以CAFs和GRP78为靶点来改善肿瘤耐药的新思路。方法:本实验自主设计了一个可用于药敏检测及蛋白半定量的三维联合共培养微流控芯片体系,通过灌注细胞悬液-凝胶混合物于三维培养池内来实现胃癌细胞系的三维培养。应用凋亡染色方法检测SGC7901细胞单独培养组(对照组)、SGC7901细胞+NFs共培养组、SGC7901细胞+CAFs共培养组中SGC7901细胞对不同浓度的化疗药物顺铂的药物敏感情况。应用免疫荧光法检测对照组和实验组SGC7901细胞GRP78表达。结果:SGC7901细胞+CAFs共培养组与单培养组相比,SGC7901细胞对顺铂的敏感性较SGC7901细胞单独培养时低(P<0.05),SGC7901细胞+CAFs共培养组SGC7901细胞中GRP78蛋白表达较对照组升高(P<0.05)。结论:CAFs可以诱导人胃癌SGC7901细胞对顺铂耐药;CAFs可能通过上调人胃癌SGC7901细胞中GRP78的表达而导致耐药。     

苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性实验研究

目的研究苦参碱（Matrine）对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药的逆转效应及其机制。方法以长春新碱（VCR）诱导的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,MTT法研究苦参碱对体外培养的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR细胞增殖的影响及逆转效应、用间接免疫荧光法经流式细胞仪检测MRP的表达并分析其机制。结果 MTT法显示苦参碱在0.5、1.0、2.0 mg.mL-1浓度下处理SGC7901/VCR细胞72 h后,其生长抑制率依次为10%、15%、32%,且可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药,呈剂量依赖性,逆转倍数分别为9.4、13.4、24.5倍。0.5 mg.mL-1苦参碱与SGC7901/VCR细胞共同培养24 h后,SGC7901/VCR细胞的MRP表达从（36.00±4.32）%降低至（25.00±3.85）%（P〈0.01）。结论苦参碱可以体外逆转人胃癌细胞多药耐药细胞SGC7901/VCR的耐药性,其逆转机制与降低MRP的表达有关。     

PUMA 对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：研究外源性 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响。方法制备 PUMA 基因并插入 pcDNA 3．1（－）质粒,观察其转染胃癌SGC-7901细胞后 PUMA 蛋白的表达并用 MTT 法检测细胞的增殖力[实验设3组,分别为无转染空白胃癌细胞对照（SGC-7901）组,空载质粒转染胃癌细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组及重组 PUMA 质粒实验（SGC-7901-pcD-NA3．1-PUMA）组]。结果PUMA 经限制性核酸内切酶切及测序分析,与预期结果吻合。转染质粒后,SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 PUMA 表达比较差异无统计学意义（P ＞0．05,相对表达量分别为0．24±0．01和0．23±0．01）,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较 PUMA 表达明显增高（P ＜0．05,相对表达量为0．39±0．01）。SGC-7901、SGC-7901-pcDNA3．1和 SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组的 A 值分别为0．43±0．04、0．46±0．04和0．32±0．03,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较明显下降（均 P ＜0．01）,SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3．1组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论外源性人类 PUMA 基因对胃癌细胞增殖有抑制作用。     

同型半胱氨酸对乳鼠心肌细胞自噬水平及mTOR信号通路的影响

高同型半胱氨酸血症(HHcy)是心血管疾病的一个独立的危险因素,但其对心肌的损伤机制尚不清楚。细胞自噬是近几年研究比较热门的细胞自身保护机制,有研究发现同型半胱氨酸(Hcy)可抑制神经细胞的自噬水平,但其对心肌细胞自噬水平的作用尚不清楚。本研究利用体外细胞实验初步探讨Hcy对心肌细胞自噬水平及自噬调节信号通路mTOR通路的影响。通过原代乳鼠心肌细胞体外培养,给予Hcy共孵育刺激,利用western blot检测心肌细胞自噬相关蛋白LC3表达水平的改变以及mTOR信号通路蛋白磷酸化水平的改变;给予LC3双标签腺病毒Ad-GFP-RFP-LC3感染细胞24 h后,进行Hcy刺激,利用激光共聚焦显微镜观察自噬流的改变;对心肌细胞进行Annexin V/PI双标记染色,利用流式细胞仪计数检测细胞凋亡情况。结果发现,给予Hcy刺激后,乳鼠心肌细胞凋亡率升高,自噬水平降低,自噬调节信号通路mTOR及其下游p70 S6K磷酸化水平升高。这些结果提示Hcy可降低心肌细胞自噬水平,mTOR信号通路可能参与其中。     

六成汤含药血清抗MRC-5衰老的分子机制研究

目的:探讨六成汤抗MRC-5细胞衰老的分子机制。方法:制备六成汤的含药血清作用于MRC-5细胞,用80 g.L-1的D-半乳糖制备衰老模型,用同体积生理盐水做对照。用MTT法做预实验,筛查最佳实验条件:空白血清对照组,模型组,10%含药血清、8%含药血清、6%含药血清、4%含药血清、2%含药血清组(含药血清用空白血清稀释),分别作用24 h、48 h、72 h。正式实验根据预实验结果进行分组造模后收集细胞,用流式细胞计数法检测细胞周期及细胞凋亡情况;用Western-blot方法检测衰老相关bax、bcl-2、caspase-3蛋白的表达情况。结果:预实验中六成汤含药血清作用48 h、浓度为4%时效果最好。根据预实验结果,正式实验分为对照组,模型组,高(8%含药血清)、中(4%含药血清)、低(2%含药血清)剂量组,含药血清作用48 h。流式细胞计数法显示与模型组相比,各组G1期细胞减少,S期细胞增多,凋亡率降低;Western-blot法显示促凋亡蛋白caspase3、bax表达减少,抑凋亡蛋白bcl-2表达增加,中剂量组变化最明显。结论:六成汤含药血清可能通过减少衰老细胞的G1期阻滞,调节细胞周期及凋亡相关蛋白表达,减少细胞凋亡来发挥抗衰老作用。     

PUMA／ASPP1双抑癌基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：探讨 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）／p53促凋亡蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体（lipofectamine）2000TM 将 PUMA／ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照（SGC-7901）组,空载质粒转染细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-ASPP1）组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA）组、重组 PUMA／ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA／ASPP1）组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数（光吸收度即 A 值）及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 A 值比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组（均 P ＜0．01）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA／ASPP13组中,SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞组 A 值最低（P ＜0．01）。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3．1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA／ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 S 期减少为甚（均 P ＜0．01）;SGC-7901-pcDNA3．1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。     

miR-381-3p靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1（specificity protein 1，SP1）抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法 RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1 mRNA的表达，利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic 质粒、miR-control质粒、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞，基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因，双荧光素酶报告检测靶向关系，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹分析检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B淋巴细胞瘤2（B-celllymphoma，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein， Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine aspartic acid protease 3，Caspase-3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p-mTOR、p70s6激酶(The p70s6 kinase，p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果 miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达（P < 0.01），而SP1高表达（P < 0.01）；miR-381-3p与SP1 3’UTR区存在结合位点，且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达；过表达miR-381-3p后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01）、Ki67和PCNA蛋白表达明显下调（P < 0.01），细胞凋亡率明显降升高（P < 0.01）、Bax/Bcl-2和Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调（P < 0.01），mTOR和p70s6k磷酸化明显减少（P < 0.01）；而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01），细胞凋亡率明显增加（P < 0.01），增殖标记蛋白Ki67表达明显下调（P < 0.01），凋亡标记蛋白Cleaved caspase-3表达明显上调（P < 0.01），而SP1蛋白表达无明显变化。结论 miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。     

补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响,探讨补中益气汤治疗肿瘤的机制。方法:以补中益气汤给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。MTT法检测含药血清对肺癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定肺癌细胞细胞凋亡。结果:补中益气汤不同浓度含药血清组与空白对照组比较均可明显抑制肺癌细胞体外增殖,差异有统计学意义(P<0.05);补中益气汤不同浓度含药血清组Lewis肺癌细胞凋亡率与空白对照组比较,明显升高,且随着含药血清浓度的增加,细胞凋亡率明显上升,具有浓度依赖性。结论:补中益气汤含药血清对肺癌细胞体外增殖有明显的抑制作用,且可促进肿瘤细胞凋亡。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础。不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系。无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化。文章综述了几种有效能评价体系的测定技术。     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。