干扰miR-21表达抑制胶质瘤U251细胞增殖迁移与侵袭

目的探讨干扰miR-21表达对胶质瘤细胞U251增殖、迁移和侵袭的影响。方法使用脂质体将miR-21抑制物(人工合成干扰miR-21表达的核苷酸片段,miR-21处理组)以及对照组转染于U251细胞,利用qRT-PCR验证miR-21处理组转染的细胞中miR-21表达水平;通过MTT法、细胞划痕、transwell等实验观察miR-21处理组和对照组对U251细胞增殖迁移和侵袭的影响。结果 miR-21处理组中miR-21的表达量明显下调。即转染miR-21抑制剂能有效降低U251细胞中miR-21的表达。miR-21处理组的U251细胞与对照细胞相比,增殖速度明显下降,差异具有显著性。细胞划痕实验显示干扰miR-21抑制U251细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果显示,miR-21处理组的U251细胞的侵袭能力较对照组细胞明显下降。结论 miR-21能促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,它可能在胶质瘤的发生和进展中发挥重要作用。     

miR-140与膝关节骨性关节炎严重程度的相关性

目的:探析miR-140与膝关节骨性关节炎严重程度的相关性。方法:选择本科收治的膝关节骨性关节炎患者60例为骨性关节炎组(OA组),按Lawrence X线诊断标准,Ⅰ~Ⅳ级患者各15例。同时选取同期非骨性关节炎患者30例为对照组(主要为外伤患者)。应用实时荧光定量(PCR)检测上述两组患者膝关节液中miR-140的含量。比较两组及不同等级患者的miR-140表达水平。结果:OA组miR-140表达水平显著低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.01);miR-140表达水平随OA严重程度增加而降低,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-140表达水平与膝关节骨性关节炎的严重程度呈负相关。     

血管内皮祖细胞增殖与迁移的研究进展

血管内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞,亦称为成血管细胞。随着近年来血管性疾病的增多,血管内皮祖细胞在动脉硬化性狭窄及闭塞性病变方面的作用越来越受到人们重视。但内皮祖细胞的增殖能力成为制约其运用的一大障碍。笔者通过大量阅读文献,就血管内皮祖细胞的增殖与迁移方面作一综述。     

肿瘤抑制基因 PTEN对人气道平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的：观察肿瘤抑制基因 PTEN 对人气道平滑肌细胞（HASMCs）迁移和增殖的影响机制。方法用重组PTEN 腺病毒转染体外培养的 HASMCs（Ad-PTEN 组）,并与携带绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒空载体（Ad-GFP组）和空白对照（MOCK）组对比,采用 MTS 测定细胞增殖、Transwell 法观察细胞迁移、共聚焦显微镜观测细胞骨架的变化、免疫印迹法检测 PTEN、p-Akt、Akt、p-FAK、FAK 蛋白的表达。结果Ad-PTEN 组的吸光度（A）值和每单位面积迁移的细胞数显著低于 Ad-GFP 及 MOCK 组（均 P ＜0．05）,Ad-GFP 和 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,提示过表达 PTEN 基因能抑制 HASMCs 的增殖和迁移的作用。Ad-PTEN 组细胞轮廓变细,伪足及应力纤维明显变少,而 Ad-GFP、MOCK 组细胞有少量短而细的应力纤维,很少丝状伪足形成。与 Ad-GFP 及 MOCK 组比较,Ad-PTEN 组 p-Akt 表达水平和 FAK 蛋白的磷酸化水平显著下调（均 P ＜0．05）,Ad-GFP及 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,说明过表达 PTEN 能下调 Akt 蛋白和 FAK 蛋白的磷酸化水平。结论过表达 PTEN 可能通过下调 p-Akt 及 p-FAK 的表达,抑制 HASMCs 的增殖和迁移,参与哮喘气道重塑的调控。     

展示KDR胞外区VEGF结合域的T4噬菌体对肺癌细胞增殖侵袭的抑制作用

目的:构建展示KDR的T4噬菌体并在细胞水平上检测其抑制肿瘤细胞增殖侵袭的作用及机制。方法:利用SOE-PCR的方法将KDR膜外区D2和D3与T4噬菌体小衣壳蛋白SOC基因融合并克隆到pET28b表达载体中,经IPTG诱导表达并纯化后,利用体外展示技术将重组KDR-SOC蛋白展示在T4噬菌体表面,得到T4-KDR噬菌体。MTT法检测T4-KDR噬菌体对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,并采用Transwell法检测其对VEGF促侵袭作用的影响。RT-PCR法检测T4-KDR对MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影响,并通过Western blot方法检测其对VEGF诱导ERK1/2磷酸化及其下游CyclinD1,p27,Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果:KDR-SOC在大肠杆菌中稳定表达,展示KDR的T4-KDR噬菌体具有结合VEGF-165的能力,并显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭活性,降低MMP-2和MMP-9基因mRNA水平。Western blot结果表明T4-KDR噬菌体抑制VEGF诱导ERK1/2的磷酸化,降低CyclinD1及Bcl-2表达的同时,提高p27和Bax的表达。结论:展示KDR的T4噬菌体具有抑制肺癌细胞增殖和侵袭作用,其对MEK/ERK信号通路及其下游调控因子的影响是其作用的重要分子机制。     

穿心莲内酯对胃癌AGS细胞增殖侵袭的影响

目的观察穿心莲内酯(AD)对胃癌细胞增殖侵袭以及Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法体外培养胃癌细胞系AGS,分别用1.0、3.0、5.0μmol/L穿心莲内酯作用24~72 h,无机磷法检测AGS细胞Na+-K+-ATP酶活性改变情况;MTT和ELISA分析AGS细胞的增殖与断裂DNA含量;同时采用ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)的水平;荧光共振能量转移法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性;小室侵袭实验检测细胞侵袭。结果 1.0~5.0μmol/L穿心莲内酯能显著降低Na+-K+-ATP酶活性,并能在此浓度下抑制AGS细胞生长增殖以及增加断裂DNA水平。同时,穿心莲内酯也能减少VEGF和TGF-β1的水平(P<0.05),降低MMP-9酶的活性,并能有效减少癌细胞的侵袭(P<0.05)。结论穿心莲内酯是一种有效的抗胃癌药物,它可能具有阻碍胃癌细胞侵袭的能力。     

山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖、迁移的影响。方法:利用细胞培养技术对人乳腺癌T-47D细胞进行培养;利用MTT法比较不同浓度山慈菇水煎剂组和对照组对T-47D细胞生长增殖情况的影响;利用细胞划痕实验,检测不同浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞迁移的影响。结果:不同浓度的山慈菇水煎剂(50 g·L~(-1)、100 g·L~(-1)、200 g·L~(-1),400 g·L~(-1)、600 g·L~(-1)、800 g·L~(-1))对T-47D细胞的生长抑制率分别为-0.60%、-17.10%、-0.60%、65.08%、81.15%、82.80%,400~800 g·L~(-1)质量浓度山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D细胞的增殖有明显抑制作用;划痕实验结果显示200 g·L~(-1)、300g·L~(-1)山慈菇水煎剂作用24h和48h后,与对照组比较,乳腺癌T-47D细胞的划痕距离较大,划痕未见明显愈合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞生长增殖具有抑制作用,低浓度(<200 g·L~(-1))的山慈菇水煎剂对T-47D细胞的生长增殖无影响,即无细胞毒性;高浓度(>200 g·L~(-1))的山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D的增殖有明显的抑制作用;一定浓度的山慈菇水煎剂可以抑制T-47D细胞的迁移运动。     

重组人BMP-2对人肝癌SSMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察重组人骨形成蛋白2（rhBMP-2）对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法以人肝癌SMMC-7721细胞株为研究对象,取对数期生长的SMMC-7721细胞随机分为4组：rhBMP-2200、400、600ug·L。组和对照组。rhBMP-2200、400、600ug·L。组分别加入rhBMP-2200、400、600ug·L-1,对照组加入2mLRPMI1640培养基。分别于12、24、48h后,用细胞划痕法检测细胞体外迁移能力,Transwell小室测定法检测细胞体外侵袭能力。结果rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞迁移率与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,且rhBMP-2200、400、600ug·L-1组各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞穿膜数与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,rhBMP-2200、400、600ug·L-1组各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24hSMMC-7721细胞迁移率、细胞穿膜数与48h比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,浓度与时间无交互作用。结论BMP-2可增加入肝癌SMMC-7721细胞的侵袭和迁移能力,且呈时间-浓度依赖性;阻滞BMP-2的表达可能成为抑制肝癌转移的一个潜在靶点。     

从语言迁移看母语对二语迁移的影响

随着经济全球化,英语在国际交往中越来越重要,但学生英语中仍存在大量中式英语错误,主要原因在于母语迁移对英语学习的影响。母语对于二语习得的影响一直是人们关注的热点,并且大量的事实也证明了母语对于二语习得的影响是广泛而深远的。母语对二语习得的影响主要是通过语言迁移来实现的,而语言迁移又包括正迁移和负迁移,即正面影响和负面影响。本文即从语言迁移的角度来分析母语对二语习得的影响。     

miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响

目的探讨miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭能力,以及对化疗药物敏感性的影响。方法采用流式细胞边缘群分选技术从人肺癌细胞系A549中分离出肺癌干细胞。应用脂质体分别介导成熟miR-21的阻遏物(inhibitors)和模拟物(mimics)来抑制和增强肺癌干细胞miR-21的表达;实时荧光定量PCR检测肺癌干细胞中miR-21表达水平的变化;噻唑蓝(MTT)法检测转染干预前后肺癌干细胞的增殖情况和对化疗药物的敏感性;Transwell小室检测肺癌干细胞迁移能力。结果抑制组肺癌干细胞miR-21表达水平明显低于非转染组和阴性对照组,而增强组肺癌干细胞miR-21表达水平则显著高于非转染组和阴性对照组(P<0.05);抑制组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组明显降低,而增强组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组显著升高(P<0.05);Transwell实验显示抑制组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(29.55±5.48)个,明显少于非转染组和阴性对照组,而增强组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(74.47±8.63)个,明显多于非转染组和阴性对照组(P<0.05);顺铂(DDP)和吉西他滨(GEM)对抑制组转染后48 h肺癌干细胞的IC50值明显低于非转染组和阴性对照组(P<0.05);DDP和GEM对增强组转染后48 h肺癌干细胞的IC50值则明显高于非转染组和阴性对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达可以抑制肺癌干细胞的增殖和侵袭能力,增强其对化疗药物的敏感性。     

miR-26a通过调节MTDH基因表达抑制CAOV3细胞系生长

目的检测miR-26a在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-26a调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法运用qRT-PCR检测52例卵巢癌及相应癌旁组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a mimics转染卵巢癌细胞CAOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对CAOV3细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在52例卵巢癌组织中表达下调;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制人CAOV3细胞的生长(P<0.05)。结论 miR-26a通过调节MTDH基因的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

RNA干扰Livin基因对甲状腺乳头状癌的增殖及侵袭抑制作用及其分子机制

目的:探讨Livin对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、凋亡及侵袭的影响以及可能的调控分子机制。方法:构建靶向Livin基因的慢病毒sh RNA载体,转染甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1,实验分为干扰组、阴性对照组和空白组。应用RT-PCR和Western印迹检测转染Livin-sh RNA后细胞Livin m RNA和蛋白表达水平的变化。应用MTT、流式细胞仪、Western印迹与Transwell侵袭实验检测Livin对甲状腺乳头状癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。并接种于裸鼠模型中,进一步确定Livin在体内对甲状腺乳头状癌细胞的影响。结果:慢病毒Livin-sh RNA载体成功抑制TPC-1细胞中Livin m RNA和蛋白的表达;转染Livin-sh RNA后TPC-1细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.01),转染Livin-sh RNA组、阴性对照组和空白组的凋亡率分别为(15.72±0.21)%,(4.54±0.13)%和(4.87±0.22)%,三组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。干扰组穿膜细胞数明显少于阴性对照组和空白组(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,干扰组细胞AKT、p-AKT及PDK1蛋白表达量均下调(P<0.05),而PTEN蛋白明显上调(P<0.05)。甲状腺乳头状癌裸鼠模型结果表明干扰组肿瘤的生长速度、肿瘤质量[(1.11±0.08)g]明显小于空白组[(1.90±0.15)g]和阴性对照组[(2.10±0.12)g]。结论:沉默Livin基因能抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭及体内生长,促使甲状腺乳头状癌细胞凋亡的发生,可能是通过抑制PI3K-AKT信号转导通路来发挥作用。     

PUMA 对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：研究外源性 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响。方法制备 PUMA 基因并插入 pcDNA 3．1（－）质粒,观察其转染胃癌SGC-7901细胞后 PUMA 蛋白的表达并用 MTT 法检测细胞的增殖力[实验设3组,分别为无转染空白胃癌细胞对照（SGC-7901）组,空载质粒转染胃癌细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组及重组 PUMA 质粒实验（SGC-7901-pcD-NA3．1-PUMA）组]。结果PUMA 经限制性核酸内切酶切及测序分析,与预期结果吻合。转染质粒后,SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 PUMA 表达比较差异无统计学意义（P ＞0．05,相对表达量分别为0．24±0．01和0．23±0．01）,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较 PUMA 表达明显增高（P ＜0．05,相对表达量为0．39±0．01）。SGC-7901、SGC-7901-pcDNA3．1和 SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组的 A 值分别为0．43±0．04、0．46±0．04和0．32±0．03,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较明显下降（均 P ＜0．01）,SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3．1组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论外源性人类 PUMA 基因对胃癌细胞增殖有抑制作用。     

PUMA／ASPP1双抑癌基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：探讨 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）／p53促凋亡蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体（lipofectamine）2000TM 将 PUMA／ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照（SGC-7901）组,空载质粒转染细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-ASPP1）组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA）组、重组 PUMA／ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA／ASPP1）组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数（光吸收度即 A 值）及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 A 值比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组（均 P ＜0．01）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA／ASPP13组中,SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞组 A 值最低（P ＜0．01）。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3．1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA／ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 S 期减少为甚（均 P ＜0．01）;SGC-7901-pcDNA3．1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。     

白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇抑制人上皮性卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡的作用及机制。方法:将人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞随机分为5组,即正常对照组、白藜芦醇高剂量组(40 mg·L~(-1))、白藜芦醇中剂量组(20 mg·L~(-1))、白藜芦醇低剂量组(10 mg·L~(-1))和顺铂组(40 mg·L~(-1))。干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,MTT比色法检测各组细胞增值抑制率。通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、流式细胞术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,Western blot法检测细胞caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,白藜芦醇高、中剂量组细胞出现变圆、脱壁、细胞间接触松散等状态,细胞抑制作用明显、增殖抑制率显著升高(P<0.01);白藜芦醇各剂量组细胞周期被阻滞于G2/M期,白藜芦醇高、中剂量组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),同时可明显下调Bcl-2 mRNA而上调Bax mRNA表达,显著提高Bax/Bcl-2值(P<0.05,P<0.01),上调caspase-3蛋白表达(P<0.01)。结论:白藜芦醇能够通过抑制增殖并促进凋亡对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与白藜芦醇调节凋亡相关基因蛋白表达有关。