槲皮素对转化生长因子-β_1诱导的肾小球足细胞转分化抑制作用的实验研究

目的研究槲皮素(Qu)不同给药时间对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的肾小球足细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法取经过鉴定的体外原代培养的足细胞,随机分为对照组、模型组、Qu先干预组、Qu同时干预组和Qu后干预组,共5组。对照组常规培养;模型组采用5 ng/m L TGF-β_1诱导48 h;Qu先干预组采用50μmol/L Qu干预24 h后,再用5 ng/m L TGF-β_1继续诱导24 h;Qu同时干预组采用50μmol/LQu和5 ng/m L TGF-β_1同时干预48 h;Qu后干预组先用5 ng/m L TGF-β_1干预24 h,再用50μmol/L Qu干预24 h。将上述5组细胞分别采用Western blot、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞EMT标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达量,并进行组间比较。结果 1)蛋白表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin,WT-1的蛋白表达量明显降低,Vimentin,α-SMA的蛋白表达量明显升高(P<0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin的蛋白表达量以Qu后干预组最高,WT-1的蛋白表达量以Qu同时干预组最高,Vimentin的蛋白表达量以Qu先干预组最低,α-SMA的蛋白表达量以Qu先干预组最低(P<0.01)。2)mRNA表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin mRNA和WT-1 mRNA的表达量明显降低,Vimentin mRNA和α-SMA mRNA的表达量明显升高(P<0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin mRNA的表达量以Qu同时干预组最高(P<0.05),WT-1 mRNA的表达量以Qu先干预组最高(P<0.01),Vimentin mRNA和α-SMA mRNA表达量均以Qu先干预组最低(P<0.01)。结论 Qu能够抑制T GF-β1诱导的足细胞EMT,且Qu先干预组能够更好地抑制TGF-β_1诱导的足细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β信号转导通路中的相关信号分子、维持足细胞生理结构的完整性从而保护肾小球滤过屏障有关。     

白藜芦醇对慢性肾衰竭大鼠肾脏组织BMP-7、TGF-β_1、Smads信号通路表达的影响

目的:观察白藜芦醇对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾脏组织BMP-7、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)、Smads信号通路表达的影响,分析其延缓CRF进展及抗肾间质纤维化的机制。方法:采用腺嘌呤制作CRF大鼠模型,随机分为模型组、氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组,另取8只正常大鼠作为空白对照组。观察大鼠治疗后血清肌酐、尿素氮水平;采用RT-PCR法检测肾脏组织内TGF-β_1mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测BMP-7、TGF-β_1、Smad6的蛋白表达,采用Western blot检测BMP-7、Smad6蛋白的表达,比较大鼠肾脏组织BMP-7、GF-β_1、Smads信号通路表达。结果:氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组肌酐、尿素氮均明显低于模型组(P<0.05);氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组TGF-β_1mRNA表达水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇低剂量组TGF-β_1mRNA表达水平低于氯沙坦组(P<0.05);与模型组比较,氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组BMP-7、Smad6蛋白表达均有提高,差异有统计学意义(P<0.05);与氯沙坦组比较,白藜芦醇低剂量组BMP-7、Smad6蛋白表达提高更为明显(P<0.05);白藜芦醇低剂量组和高剂量组BMP-7、Smad6蛋白比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇通过增强BMP-7和Smad6蛋白的表达,减弱TGF-β_1的表达,对TGF-β_1信号向核内转导的通路进行抑制,起到减轻肾间质纤维化、保护肾脏功能的目的。     

姜黄素对高氧诱导肺泡II型上皮细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨姜黄素对高氧诱导肺泡II型上皮细胞(AEC2)损伤的保护作用,以及β-catenin/p300相互作用与姜黄素保护AEC2的关系。方法 采用分离培养的AEC2建立高氧诱导的细胞损伤模型。培养AEC2细胞随机分为对照组、高氧组、姜黄素组(分为高、中、低剂量3个亚组)、IQ-1(β-catenin/p300相互作用抑制剂)组、p300 si RNA组、siRNA阴性对照组。药物处理24 h后,CCK-8法和细胞计数板检测AEC2细胞增殖活力和细胞总数,定量PCR检测AEC2、肺泡I型上皮细胞(AEC1)的标记基因SP-C和AQP5 mRNA表达量,流式细胞仪检测AQP5、SP-C阳性细胞百分比,Western blot检测β-catenin、p300蛋白表达量。结果 与对照组比较,高氧组AEC2细胞增殖活力、细胞计数、SP-Cm RNA表达以及AEC2百分比均明显减少(P<0.01),而AEC1标记基因AQP5m RNA表达、AEC1百分比、AEC2向AEC1转分化的中间型细胞百分比则明显增大(P<0.01),β-catenin、p300蛋白表达量明显增加(P<0.01)。相反,姜黄素组、IQ-1组和p300 si RNA组AEC2细胞增殖活力、细胞计数、SP-C mRNA表达以及AEC2百分比均显著增加(P<0.01),而AQP5 mRNA表达、AEC1百分比、转分化中间型细胞百分比均减少(P<0.01),β-catenin、p300蛋白表达量明显减小(P<0.01)。结论 姜黄素对高氧诱导培养肺泡II型上皮细胞(AEC2)损伤具有保护作用,其机制与抑制β-catenin/p300相互作用有关。     

rhEPO通过调节PI3K/AKT信号通路改善大鼠脑出血后神经元损伤

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)是否可以通过调节PI3K/AKT信号通路来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。方法 SD大鼠构建脑出血(ICH)模型,并给予rhEPO药物治疗,采用TUNEL法和试剂盒检测神经细胞凋亡及凋亡蛋白Caspase 9表达;采用Real-Time PCR法和Western blot法检测PI3K、AKT的基因和蛋白磷酸化水平的表达。结果与ICH非治疗组相比,rhEPO治疗组中神经元凋亡细胞数和Caspase 9活性表达明显降低(P<0.05);rhEPO治疗组PI3K和AKT的蛋白磷酸化水平表达和mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素rhEPO具有神经保护作用,可以通过调节PI3K/AKT信号来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。     

归经组方对肾纤维化大鼠肾组织中Wnt信号表达的影响

目的:观察归肾经药物组方对肾纤维化大鼠疗效及肾组织Wnt信号表达的影响。方法:用5/6肾切除方法建立大鼠肾纤维化模型。经验方肾衰Ⅰ号为肾衰Ⅰ号组,以治则相同不归肾经药物组方为不归经组,以治则相同且归肾经的组方为归经组,同时设模型组,假手术组。连续治疗2月后,采血检测肾功能及血色素、取肾组织Masson染色、Western blot法检测肾组织Wnt2、GSK-3β、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、β-actin蛋白表达,免疫组化法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾组织表达。结果:成功造模并治疗2个月后,与假手术组比较,模型组体质量、血浆总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(Albumin,Alb)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)含量显著降低(P<0.01),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(creatinine,Cr)含量显著增高(P<0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及TGF-β1蛋白表达显著增高(P=0.000),GSK-3β活性显著降低(P=0.000),胶原含量显著增高(Masson染色)(P<0.05);与模型组比较,各治疗组体质量显著增高(P<0.01),BUN、Cr显著降低(P<0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、TGF-β1表达及胶原含量显著降低(P<0.05)。3个治疗组间相比较,归经组Hb、Tp含量及GSK-3β表达较肾衰Ⅰ号组及不归经组显著升高P<0.01),P-GSK-3β表达显著降低(P<0.01);不归经组α-SMA、β-catenin表达明显高于其他两组(P<0.05)。3个治疗组间体质量、ALB、BUN、Cr含量及Wnt2表达之间没有明显差异,归经组与肾衰Ⅰ号之间α-SMA、β-catenin表达亦没有明显差异。结论:三组方均能通过Wnt信号通路减轻模型动物肾纤维化程度,且经验方与归肾经处方优于不归肾经方。     

ILK在白蛋白诱导人HK-2细胞转分化中的表达和意义

目的 探讨整合素连接激酶（ILK）在白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化（TMET）过程中的表达及其意义.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞随机分为4组：1）空白对照组.仅加入DMEM/F12培养基培养细胞.2）白蛋白诱导组.加入含人纯化白蛋白的培养液,白蛋白终浓度为5cg·L-1（以下白蛋白终浓度为此浓度）.3）转化生长因子-β1（TGF-β1）中和抗体对照组.加入含TGF-β1中和抗体的培养液,TGF-β1中和抗体终浓度为5 μg·L-1（以下TGF-β1中和抗体终浓度为此浓度）.4）TGF-β1拮抗组.在加入人纯化白蛋白 15 min 前加入TGF-β1中和抗体.观察4组细胞形态的变化.采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测TGF-β1、ILK、纤维连接蛋白（FN）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）omRNA表达水平.结果空白对照组0、12、24和48 h时TGF-β1、ILK、E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达水平与TGF-β1中和抗体对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.白蛋白诱导组、TGF-β1拮抗组12、24和48 h时TGF-β1、ILK、E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达水平均明显高于同组0 h时、空白对照组和TGF-β1中和抗体对照组（均P＜0.05）;TGF-β1拮抗组12、24和48 h时TGF-β1、ILK和FN mRNA表达水平均显著低于白蛋白诱导组（均P＜0.01）,24、48 h时E-cadherin、α-SMA mRNA表达水平均显著低于白蛋白诱导组（均P＜0.01）.相关性分析结果显示,ILK mRNA表达与TGF-β1、α-SMA和FN mRNA表达均呈正相关（r=0.944、0.974和0.989,均P＜0.01）.结论白蛋白可以诱导HK-2细胞发生转分化,ILK在其中发挥促进作用.     

槲皮素对人卵巢癌细胞-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨槲皮素对人卵巢癌细胞-3(ovarian carcinoma cell,OVCAR-3)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将对数生长期的OVCAR-3细胞随机分为对照组和槲皮素组。对照组细胞给予培养基常规培养,而槲皮素组细胞加入槲皮素(160μmol·L~(-1))。各组细胞培养48 h后,利用噻唑蓝检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖;流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,RT-PCR检测细胞受体型酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导与转录激活因3(STAT3),B细胞淋巴因子2(Bcl-2),人Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使mRNA表达水平。免疫蛋白印记法检测各组OVCAR-3细胞中STAT3,磷酸化受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2),磷酸化信号传导与转录激活因3(p-STAT3),Bax,Bcl-2蛋白的变化,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果:MTT检测结果显示槲皮素组与对照组相比,人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖率明显下降(P<0.05)。流式细胞仪检测显示槲皮素组OVCAR-3细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。RT-PCR检测显示槲皮素组与对照组JAK2和STAT3信使mRNA表达水平无明显差异,而槲皮素组Bax信使mRNA水平比对照组明显增高,槲皮素组Bcl-2信使mRNA水平比显著低于对照组。Western blotting检测显示,槲皮素组的JAK2和STAT3蛋白表达与对照组比较,无明显差异(P>0.05),而槲皮素组的p-STAT3,p-JAK2和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05),槲皮素组的Bax表达显著高于对照组(P<0.05)。Caspase3活性试剂盒检测结果显示,槲皮素组Caspase3活性表达水平显著高于对照组。结论:槲皮素能明显抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,促进人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活JAK2/STAT3信号传导通路。     

瓜蒌薤白汤对肺纤维化早期阶段肺组织中TGF-β、Smad3、Smad7表达的影响

目的:探讨瓜蒌薤白汤防治肺纤维化的作用机理。方法:72只SD大鼠随机分为4组,即博莱霉素组、瓜蒌薤白汤组、泼尼松组、正常组,每组18只。用博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型后,用药组每天灌胃瓜蒌薤白汤,分别于第7天、第14天后处死各组大鼠,观察、比较各组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度和肺组织中转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)、Smad3、Smad7的表达。结果:光学显微镜下,正常组大鼠肺组织正常;博莱霉素组大鼠第7天肺泡间隔增厚,肺泡腔内有炎性细胞浸润,第14天呈1级肺泡炎改变和2级、3级肺组织纤维化;瓜蒌薤白汤组大鼠肺组织炎性改变和纤维化程度较博莱霉素组减轻,炎性细胞浸润减少,部分呈1级纤维化改变。免疫组织化学结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平升高,Smad7表达下降(P<0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β、Smad3表达下降(P<0.05),而Smad7表达增高(P<0.05)。Real time-PCR结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平明显升高(P<0.05),Smad7表达下降(P<0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β和Smad3表达下降(P<0.05),Smad7表达增高(P<0.05)。结论:瓜蒌薤白汤能明显减轻博莱霉素所致的大鼠肺泡炎,有效调控TGFβ-Smad信号通路介导的致纤维化作用,进而起到抗纤维化的作用。     

基因沉默多配体蛋白聚糖2抑制肺癌A549上皮间质转化的机制

目的 研究基因沉默多配体蛋白聚糖（syndecan-2, SDC2）抑制转化生长因子β1（transforming growth factorβ1, TGF-β1）介导的非小细胞肺癌A549细胞发生上皮间质转化（epithelial interstitial transformation, EMT）的作用机制。方法 设计靶向SDC2的小干扰RNA（small interfere RNA, siRNA），采用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT，并予以SDC2-siRNA预处理。划痕实验检测细胞迁移，明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP）含量；免疫印迹法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、Snail蛋白的表达。结果 与对照组相比较，TGF-β1诱导组细胞迁移能力更强，MMP活性更高，E-钙黏蛋白表达下调，而波形蛋白、Snail蛋白表达上调（P<0.05）。与TGF-β1诱导相比较，SDC2-siRNA组能够抑制细胞迁移、MMP活性、波形蛋白和snail蛋白的表达，同时上调E-钙黏蛋白的表达（P<0.05）。结论 基因沉默SDC2能够抑制TGF-β1介导的EMT。     

灵芪胶囊对直结肠癌lovo细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:观察灵芪胶囊对直结肠癌lovo细胞凋亡相关Caspase3基因表达的影响。方法:灵芪胶囊含药血清根据浓度不同分为灵芪胶囊高剂量组、灵芪胶囊中剂量组、灵芪胶囊低剂量组、阳性对照组及空白对照组,将对数生长期的lovo细胞培养至细胞贴壁后,分别放入相应的含药血清,48 h后收集细胞,应用蛋白质印迹法检测各组Caspase3的含量。结果:空白对照组Caspase3蛋白表达量较高,阳性对照组和灵芪胶囊高剂量组Caspase3蛋白表达量小于空白对照组,其结果具有明显统计学差异(P<0.01)。灵芪胶囊中剂量组、灵芪胶囊低剂量组Caspase3表达量与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外条件下,灵芪胶囊对lovo细胞具有一定的抑制作用,能够使细胞凋亡发生。灵芪胶囊导致细胞发生凋亡的作用机制可能与抑制Caspase3基因的表达情况有关。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

住宅的多样性——日本集合住宅的借鉴

以西安目前住宅市场发展的现状及其存在的弊端为例 ,说明我国目前住宅需求的多样化和设计手法的单一化之间的矛盾 ,论述了与我国有着相似文化背景的日本在解决不同住宅需求时采用形式多样、功能各异的集合住宅的理念 .试图以此借鉴 ,使我国建筑设计界了解日本集合住宅的发展演变过程 ,吸取他们的经验 ,为我们在住宅多样化研究和设计时提供一种不同的思路和方法 .     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。