DMN诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布

目的:探讨二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布及其意义。方法:选取40只Wistar雄性大鼠连续4周腹腔注射10 g/L DMN制备肝纤维化模型。采用随机数字表法分为模型组(n=20)与正常组(n=20),两组均应用DMN进行肝纤维化造模。采用Reiman法测定大鼠第4周和第7周ALT、AST水平,免疫组化法测定两组大鼠库普弗细胞与肝星状细胞标志物ED1与α-SMA分布情况,收集并分析两组肝/体质量比、肝组织病理变化、胶原纤维面密度。结果:模型组第4周和第7周ALT、AST、面密度水平均高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组第4周和第7周总蛋白(TP)、肝/体质量比水平均低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组第4周与第7周肝/体质量组内比较,差异均无统计学意义(P=0.11);模型组第4周和第7周光镜下可见ED1、α-SMA阳性细胞数量较多,主要分布于增生的纤维组织及纤维间隔弥漫部位。结论:DMN可导致大鼠肝功能障碍及弥漫肝硬化。大鼠肝纤维化模型的库普弗细胞可激活、活化肝星状细胞。     

疏肝健脾活血方对肝星状细胞增殖的影响

目的:采用细胞培养的方法,体外观察疏肝健脾活血方药物血清对转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)诱导的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)增殖作用的影响。方法:将40只大鼠随机分成正常大鼠血清组,疏肝健脾活血方低剂量组,疏肝健脾活血方中剂量组,疏肝健脾活血方高剂量组。以疏肝健脾活血方给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。采用TGFβ1诱导HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,以不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清作用于体外培养的HSC-T6,分别作用24 h、48 h后,采用CCK-8法检测不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清对HSC-T6增殖的影响。结果:疏肝健脾活血方药物血清作用于TGFβ1诱导的HSC-T6,细胞增殖受到明显抑制。各组作用48 h后,空白对照组OD值为(0.617±0.061),疏肝健脾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组OD值分别为(0.446±0.091)、0.417±0.103)、(0.376±0.065),疏肝健脾活血方各剂量组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常大鼠含药血清组OD值为(0.506±0.015),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:疏肝健脾活血方药物血清对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化作用增殖有抑制作用。     

间充质干细胞与肝星状细胞相互作用及其与抗肝纤维化

肝硬化是由于病毒感染、酒精、代谢性疾病等原因导致肝脏慢性损伤的结局。肝纤维化是慢性肝炎发展到肝硬化必然经过的中间阶段。肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）的活化、细胞外基质（ECM）合成和降解失衡导致ECM在细胞间质过量沉积是肝纤维化发生的基本机制。抑制HSCs活化、增殖和减少HSCs胶原合成,阻断相关信号通路转导、诱导HSCs凋亡成为防治和逆转肝纤维化的重要手段[1-3]。     

三七总皂苷对酒精性肝硬变大鼠肝星状细胞蛋白组学的影响

目的:探讨三七总皂对实验性酒精性肝硬变大鼠肝纤维化治疗作用的分子机制。方法:选取健康成年雄性Wistar大鼠36只,使用体积分数50%酒精16 m L·(kg·d)~(-1)灌胃造模,9周后随机分成模型组、安珐特组、三七总皂苷组,每组12只。安珐特组给予西药安珐特21.6 mg·(kg·d)~(-1)进行灌胃,三七总皂苷组给予三七总皂苷100 mg·(kg·d)~(-1)进行灌胃,模型组继续使用体积分数50%酒精灌胃。同时设置空白组。12周后处死大鼠,剪下肝右叶,提取肝星状细胞总蛋白,测定各组蛋白含量,继而进行等电聚焦双向电泳,比较组间的差异蛋白点。结果:通过组间两两比较发现,组间的蛋白表达均存在着差异,正常组与模型组比较,共有23个差异点;正常组与安珐特组比较,共有33个差异点;正常组与三七总皂苷组比较,共有30个差异点;模型组与安珐特组比较,共有30个差异点;模型组与三七总皂苷组比较,共有31个差异点;安珐特组与三七总皂苷组比较共有30个差异点。结论:三七总皂苷对实验性酒精性肝硬变大鼠具有保护作用,其机制可能与三七总皂苷引起肝星状细胞蛋白质表达差异有关。     

郁金含药血清对HSC-T6细胞增殖抑制作用的影响

目的:观察郁金含药血清对肝星状细胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)细胞增殖抑制的研究。方法:25只SD大鼠随机分5组:郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组(16.2 g·kg-1、8.1 g·kg-1、4.0 g·kg-1),秋水仙碱组(5g·kg-1)以及空白组(给予等体积生理盐水),连续灌胃给药4 d后,于第4天一次性给药1 h后,乙醚麻醉腹主动脉取血制备含药血清;将HSC-T6细胞分为6组,郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白组、秋水仙碱组、阴性对照组(加入等体积的PBS代替大鼠血清),分别取用体积分数5%、10%、20%的含药血清,同时作用于各组HSC-T6细胞24 h、48 h、72 h后,采用四氮噻唑蓝法在酶标仪(490 nm波长)上检测各组OD值,分别计算其增殖率和抑制率。结果:与阴性对照组比较,除作用24 h、体积分数5%组外,大鼠血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖速度,其增殖率与大鼠血清含量呈正相关。与空白组比较,除作用24 h、体积分数5%含药血清各剂量组、低剂量20%组以及秋水仙碱20%组没有明显抑制作用外,其余各郁金剂量组均有增殖抑制作用,其中体积分数10%组的抑制效果明显高于体积分数20%组(P<0.05)。作用48 h后,各干预含药血清的3个浓度组均有明显抑制作用,其中郁金体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P<0.05);作用72 h后,除秋水仙碱组外,各郁金剂量组均有明显抑制作用,其中含药血清体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P<0.01)。结论:大鼠郁金含药血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖;郁金含药血清在体外可以有效抑制HSC-T6细胞的增殖,但抑制率与含药血清体积分数、作用时间呈非线性关系,抑制率最为显著的是含药血清体积分数10%,作用时间48 h。     

丹参对大鼠肝组织Bcl-2表达的影响及意义

目的探讨丹参对大鼠肝组织Bcl-2基因表达的影响和对肝纤维化的作用及其机制。方法利用CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型。将30只SD大鼠按随机数字表法分成纤维化模型组（A组,n=15）和丹参干预组（B组,n=15）。用RT-PCR法检测各组大鼠肝脏Bcl-2的表达,常规HE和网状纤维染色检测肝组织标本。结果大鼠肝纤维化模型成功建立。丹参干预组纤维化程度、肝细胞脂肪变性及肝组织炎症较纤维化模型组显著减轻。丹参干预组和纤维化模型组Bcl-2基因表达量分别为（0.84±0.02）%（、1.03±0.03）%。丹参干预组Bcl-2基因的表达显著低于纤维化模型组（P〈0.01）。结论丹参能够阻断CCl4诱导的肝纤维化和减少肝脂肪变性。其机制不仅直接通过抗炎作用,也可能通过调节Bcl-2基因表达从而阻断肝纤维化。     

星状神经节阻滞预处理对急性缺氧大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨星状神经节阻滞（SGB）预处理对急性缺氧大鼠海马神经元凋亡的影响及其作用机制。方法取健康清洁级雄性SD大鼠48只按随机数字表法分为3组：正常对照组（C组）、急性缺氧组（AH组）和星状神经节阻滞预处理＋急性缺氧组（SGB组）,每组16只。AH组和SGB组大鼠制备急性缺氧模型。SGB组于模型制备前解剖暴露右侧颈交感神经干并用布比卡因行右侧SGB,以出现霍纳综合征为SGB成功标志;AH组解剖暴露右侧颈交感神经干后注入等容量的生理盐水;C组不给予任何操作。大鼠经广口瓶取出后6h时处死取海马组织,每组随机取8只大鼠检测海马Bax和Bcl-2蛋白表达,并计算Bcl-2/Bax比值;另外8只大鼠检测海马神经元凋亡情况。结果与C组比较,AH组和SGB组海马组织Bcl-2和Bax表达上调,Bax/Bcl-2比值升高,神经元凋亡增多（P〈0.05）;与AH组比较,SGB组海马组织Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bax/Bcl-2比值降低,神经元凋亡减少（P〈0.05）。结论星状神经节阻滞预处理可减轻急性缺氧诱发的大鼠脑损伤,其机制可能与其抑制海马神经元凋亡有关。     

强肝软坚丸对肝纤维化大鼠肝组织中MMP、TIMP表达的影响

目的:观察强肝软坚丸对肝纤维化的干预和治疗作用,探讨其作用机理。方法:120只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法将其分为正常对照组、模型组、秋水仙碱治疗组、秋水仙碱干预组、强肝软坚丸治疗组、强肝软坚丸干预组6组。除正常对照组外,各组均采用未灭活猪血清腹腔注射造模,每只每次0.5 m L,每周两次,正常对照组给予同剂量生理盐水腹腔注射。各干预组造模同时每日1次灌胃给药:秋水仙碱溶液0.1 g·kg-1(秋水仙碱质量浓度为0.01 g·m L~(-1))、强肝软坚丸溶液2 g·kg-1(药物质量浓度为0.2 g·m L~(-1)),正常组、模型组和各治疗组每天同剂量灭菌水灌胃。于造模第5周末各组均随机抽取5%大鼠断头处死,肝组织病理提示造模成功,第6周初开始分别给予各治疗组药物灌胃,方法和剂量同各干预组。于造模10周结束后禁食12 h,各组均随机取10只大鼠断头处死,采集肝组织标本,通过常规HE染色和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理学变化并进行Masson染色肝纤维化半定量分析;通过免疫组化染色,用图像分析法检测各组肝组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-1、MMP-2和MMP抑制因子(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2的表达。结果:与模型组比较,秋水仙碱组、强肝软坚丸组MMP-1表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);提示强肝软坚丸可提高肝纤维化大鼠肝脏组织MMP-1的表达。与模型组比较,秋水仙碱干预组、强肝软坚丸治疗组和强肝软坚丸干预组MMP-2表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,秋水仙碱组、强肝软坚丸组TIMP-1表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05);提示强肝软坚丸可降低肝纤维化大鼠肝脏组织TIMP-1的表达。与正常对照组比较,其余各组TIMP-2表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,秋水仙碱组、强肝软坚丸组TIMP-2表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:强肝软坚丸不仅可改善免疫损伤性肝纤维化大鼠一般情况和肝纤维化程度,也可使免疫损伤性肝纤维化大鼠肝组织中MMP-1、MMP-2的表达升高,TIMP-1、TIMP-2的表达降低。     

复方中药DF对高血压大鼠血压的影响及机制

目的初步探讨复方中药DF对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用。方法采用水提和醇提法对复方中药DF进行有效成分的提取,用大鼠无创尾动脉法观察口服复方中药DF后对SHR的降压作用,并用相应试剂盒测定血浆甘油三酯、总胆固醇、血管紧张素Ⅱ、内皮素的水平。结果给药3周后水提各剂量组与相应的醇提各剂量组比较有更强的抗高血压的作用(P<0.05)。与不给药对照组比较,水提组能明显降低甘油三酯、总胆固醇、血管紧张素Ⅱ和内皮素水平(P<0.05)。结论复方中药DF水提部分对SHR有明显降压作用,其作用机制可能与降低体内总胆固醇、甘油三酯及舒张血管平滑肌有关。     

IL-10-HGF融合基因对肝星状细胞LX-2增殖的抑制作用

目的探讨人白介素-10(IL-10)与人肝细胞生长因子(HGF)融合基因对肝星状细胞LX-2增殖的抑制作用。方法采用PCR方法,分别构建pcDNA3.1-flag-IL-10、pcDNA3.1-flag-HGF与pcDNA3.1-flag-IL-10-HGF真核表达载体,瞬时转染肝星状细胞LX-2;利用RT-PCR和Western blot检测LX-2细胞中IL-10、HGF的表达;选用MTT法检测转染24、48和72 h后LX-2细胞的增殖情况。结果成功构建了IL-10-HGF融合基因真核表达载体pcDNA3.1-flag-IL-10-HGF。与pcDNA3.1-flag-IL-10和pcDNA3.1-flag-HGF组比较,pcDNA3.1-flag-IL-10-HGF融合组48 h和72 h LX-2细胞数减少(n=3,P<0.05)。结论 IL-10-HGF融合基因可有效抑制肝星状细胞LX-2的增殖。     

大数据时代下计算机网络信息安全现状及对策研究

随着时代的发展以及现代化进程的不断推进,在当前大数据的时代发展背景下,计算机网络的信息安全成为当前时代发展的首要问题。文章在此基础上分析了计算机网络在大数据背景下的发展弊端,并提出了解决方案。     

红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察红景天苷对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,ANG-Ⅱ)诱导的大鼠血管成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:采用细胞贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF,分为对照组,终浓度0.1μmol·L-1ANG-Ⅱ组,浓度为10μmol·L-1红景天苷组,浓度为20μmol·L-1红景天苷组,ANG-Ⅱ联用浓度为40μmol·L-1红景天苷组,浓度为80μmol·L-1红景天苷组,均作用24 h。MTT法检测细胞增殖活性,ELISA法测定细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:1与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著刺激VAF增殖(P<0.01);40μmol·L-1和80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能够显著抑制VAF增殖(P<0.05)。2与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著升高VAF培养上清液OD值(P<0.01);浓度为80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能显著降低VAF培养上清液中OD值(P<0.05)。结论:红景天苷能够通过抑制VAF增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达,发挥抗血管重塑作用。     

Apelin-13促进骨髓间充质干细胞增殖

目的探讨apelin-13是否促进骨髓间充质干细胞增殖。方法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,用不同浓度apelin-13(0.1μmol/L、1.0μmol/L和10.0μmol/L)处理细胞24 h后,分别用流式细胞术和噻唑蓝比色法(MTT),观察apelin-13对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果倒置显微镜下观察到apelin-13促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,流式细胞术检测结果表明,apelin-13刺激后处于S期和G2-M期的细胞数目显著增加,G0-G1期的细胞数目显著减少。进一步MTT结果表明,apelin-13处理后大鼠骨髓间充质干细胞增殖显著增加,并呈浓度依赖性。结论 apelin-13能促进骨髓间充质干细胞增殖。     

新生大鼠松果体细胞体外分离培养及增殖情况观察

目的:分离培养并鉴定新生大鼠松果体细胞,观察其体外增殖情况。方法:选择30只新生SD大鼠,处死后分离松果体组织,采用多聚赖氨酸对培养板予预包被处理胰酶消化、经差速贴壁分离等方法,对新生大鼠松果体细胞进行体外分离培养并传代。观察50 d内体外培养的松果体细胞的形态变化,培养7 d时采用免疫荧光法,观察原代松果体细胞5-羟色胺(5-HT)及微管相关蛋白-2(MAP-2),实时定量PCR法检测N-乙酰基转移酶(AANAT)及生长抑素(SS)mRNA。分别取传代第1、3、5代对数生长期细胞测定细胞增殖情况。结果:新生大鼠松果体细胞呈圆球形或多角形,培养21 d时松果体细胞体积明显增大,胞质内可见深色细小囊泡状颗粒。培养7、14、21、28 d时,随培养时间延长,松果体细胞AANAT mRNA的相对表达量逐渐降低(P<0.05),松果体细胞SS mRNA的相对表达量先升高后降低(P<0.05)。细胞传代后第1、3代细胞生长曲线近似"S"形,且第3代细胞增殖最为旺盛;随传代次数增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,细胞逐渐衰老、死亡。结论:采用胰酶消化、差速贴壁分离等方法并结合含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,可获得纯度较高且有增殖潜力的大鼠松果体细胞,细胞在体外增殖活跃,且具有一定的生物学功能。     

酸性氧化电位水对人角质形成细胞生长增殖的影响

目的 探讨酸性氧化电位水（electrolyzed oxidizing water,EOW）对角质形成细胞生长、增殖的影响.方法 分别以0%、10%、20%、40%、60%和80%的EOW作用于角质形成细胞,用MTT比色法测定其1、2、3、4、5、6 d 时的吸光度值.结果 表皮细胞在24 h内开始贴壁,细胞逐渐由圆形伸展成椭圆形,体积变大,3 d时开始形成小集落,7~10 d细胞汇合连接成片.不同体积分数的EOW组在相同时间点与空白对照组吸光度值比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 EOW对体外培养的角质形成细胞生长、增殖无明显抑制作用.     

中药复方联合运动疗法对CHF大鼠MMP-2及胶原蛋白的影响

目的:探索中药复方联合运动疗法治疗慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)的疗效,并分析其作用靶点。方法:使用冠状动脉结扎法制造大鼠CHF模型,成功后按体质量依次排序,利用数字随机法分为中药组、西药组、模型组、中药加运动组、运动组;按组别给药42 d。利用超声进行其心功能分析,采用实时荧光定量PCR法对大鼠心肌基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase,MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-2)进行检查。结果:实时荧光定量PCR法检测中药加运动组MMP-2为(1.212±0.146),西药组为(1.605±0.264),两组比较,差异有统计学意义(P≤0.001)。西药组TIMP-2为(1.519±0.269),中药组为(1.327±0.246),两组比较,差异有统计学意义(P=0.009);中药加运动组为(1.839±0.324),优于西药组,差异有统计学意义(P≤0.001);中药组Ⅰ型胶原为(1.013±0.226),西药组为(0.872±0.182),两组比较,差异有统计学意义(P=0.031);中药加运动组为(1.136±0.251),优于西药组,差异有统计学意义(P≤0.001)。结论:中药联合运动疗法治疗慢性心力衰竭大鼠效果显著,可改善改善CHF大鼠心肌重构。