基因沉默多配体蛋白聚糖2抑制肺癌A549上皮间质转化的机制

目的 研究基因沉默多配体蛋白聚糖（syndecan-2, SDC2）抑制转化生长因子β1（transforming growth factorβ1, TGF-β1）介导的非小细胞肺癌A549细胞发生上皮间质转化（epithelial interstitial transformation, EMT）的作用机制。方法 设计靶向SDC2的小干扰RNA（small interfere RNA, siRNA），采用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT，并予以SDC2-siRNA预处理。划痕实验检测细胞迁移，明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP）含量；免疫印迹法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、Snail蛋白的表达。结果 与对照组相比较，TGF-β1诱导组细胞迁移能力更强，MMP活性更高，E-钙黏蛋白表达下调，而波形蛋白、Snail蛋白表达上调（P<0.05）。与TGF-β1诱导相比较，SDC2-siRNA组能够抑制细胞迁移、MMP活性、波形蛋白和snail蛋白的表达，同时上调E-钙黏蛋白的表达（P<0.05）。结论 基因沉默SDC2能够抑制TGF-β1介导的EMT。     

黄连温胆汤对慢性肾衰模型大鼠肾脏组织中TGF-β1及VEGF表达的影响

目的:分析清热燥湿方剂黄连温胆汤对慢性肾功能衰竭模型大鼠的治疗作用及相关作用机制。方法:大鼠灌胃腺嘌呤建立慢性肾衰竭模型,将大鼠平均分为正常组,模型组,地塞米松组,黄连温胆汤低剂量组、中剂量组、高剂量组。比较各组大鼠血清及尿液中生化指标及肾脏组织HE染色,通过qPCR及免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏组织中转化生长因子beta 1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。结果:与正常组比较,模型组及黄连温胆汤各给药组大鼠体质量显著降低(P<0.05);与模型组比较,黄连温胆汤各给药组大鼠血清中肌酐、尿素氮水平及尿蛋白水平均有所降低(P<0.05)。HE染色表明:黄连温胆汤可缓解慢性肾功能大鼠肾脏组织中肾小球硬化及炎细胞浸润。黄连温胆汤可明显下调慢性肾功能衰竭模型大鼠肾脏组织中TGF-β1及VEGF基因及蛋白表达(P<0.05)。结论:黄连温胆汤可缓解大鼠慢性肾衰竭,其作用机制可能与降低肾脏组织中TGF-β1及VEGF水平有关。     

槲皮素对转化生长因子-β_1诱导的肾小球足细胞转分化抑制作用的实验研究

目的研究槲皮素(Qu)不同给药时间对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的肾小球足细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法取经过鉴定的体外原代培养的足细胞,随机分为对照组、模型组、Qu先干预组、Qu同时干预组和Qu后干预组,共5组。对照组常规培养;模型组采用5 ng/m L TGF-β_1诱导48 h;Qu先干预组采用50μmol/L Qu干预24 h后,再用5 ng/m L TGF-β_1继续诱导24 h;Qu同时干预组采用50μmol/LQu和5 ng/m L TGF-β_1同时干预48 h;Qu后干预组先用5 ng/m L TGF-β_1干预24 h,再用50μmol/L Qu干预24 h。将上述5组细胞分别采用Western blot、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞EMT标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达量,并进行组间比较。结果 1)蛋白表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin,WT-1的蛋白表达量明显降低,Vimentin,α-SMA的蛋白表达量明显升高(P<0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin的蛋白表达量以Qu后干预组最高,WT-1的蛋白表达量以Qu同时干预组最高,Vimentin的蛋白表达量以Qu先干预组最低,α-SMA的蛋白表达量以Qu先干预组最低(P<0.01)。2)mRNA表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin mRNA和WT-1 mRNA的表达量明显降低,Vimentin mRNA和α-SMA mRNA的表达量明显升高(P<0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin mRNA的表达量以Qu同时干预组最高(P<0.05),WT-1 mRNA的表达量以Qu先干预组最高(P<0.01),Vimentin mRNA和α-SMA mRNA表达量均以Qu先干预组最低(P<0.01)。结论 Qu能够抑制T GF-β1诱导的足细胞EMT,且Qu先干预组能够更好地抑制TGF-β_1诱导的足细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β信号转导通路中的相关信号分子、维持足细胞生理结构的完整性从而保护肾小球滤过屏障有关。     

白藜芦醇对慢性肾衰竭大鼠肾脏组织BMP-7、TGF-β_1、Smads信号通路表达的影响

目的:观察白藜芦醇对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾脏组织BMP-7、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)、Smads信号通路表达的影响,分析其延缓CRF进展及抗肾间质纤维化的机制。方法:采用腺嘌呤制作CRF大鼠模型,随机分为模型组、氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组,另取8只正常大鼠作为空白对照组。观察大鼠治疗后血清肌酐、尿素氮水平;采用RT-PCR法检测肾脏组织内TGF-β_1mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测BMP-7、TGF-β_1、Smad6的蛋白表达,采用Western blot检测BMP-7、Smad6蛋白的表达,比较大鼠肾脏组织BMP-7、GF-β_1、Smads信号通路表达。结果:氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组肌酐、尿素氮均明显低于模型组(P<0.05);氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组TGF-β_1mRNA表达水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇低剂量组TGF-β_1mRNA表达水平低于氯沙坦组(P<0.05);与模型组比较,氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组BMP-7、Smad6蛋白表达均有提高,差异有统计学意义(P<0.05);与氯沙坦组比较,白藜芦醇低剂量组BMP-7、Smad6蛋白表达提高更为明显(P<0.05);白藜芦醇低剂量组和高剂量组BMP-7、Smad6蛋白比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇通过增强BMP-7和Smad6蛋白的表达,减弱TGF-β_1的表达,对TGF-β_1信号向核内转导的通路进行抑制,起到减轻肾间质纤维化、保护肾脏功能的目的。     

肾炎康复片对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的:观察肾炎康复片对转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响。方法:体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1加肾炎康复片低剂量组(100 mg·L-1)、中剂量组(200 mg·L-1)、高剂量组(500 mg·L-1)。分别利用甲基噻唑基四唑法(metyl thiazolyl tetronzolium,MTT)观察肾炎康复片对TGF-β1诱导细胞活力的影响;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清I型胶原(Col I)、纤维连接蛋白(FN)的含量。结果:TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏系膜细胞活力,TGF-β1刺激组Col I、FN表达量较正常对照组明显升高(P<0.05);TGF-β1加肾炎康复片各剂量组的Col I、FN均低于TGF-β1刺激组(P<0.05)。结论:肾炎康复片能抑制TGF-β1诱导的细胞活力及肾小球细胞外基质(ECM)的合成。提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是肾炎康复片治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

ILK在白蛋白诱导人HK-2细胞转分化中的表达和意义

目的 探讨整合素连接激酶（ILK）在白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化（TMET）过程中的表达及其意义.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞随机分为4组：1）空白对照组.仅加入DMEM/F12培养基培养细胞.2）白蛋白诱导组.加入含人纯化白蛋白的培养液,白蛋白终浓度为5cg·L-1（以下白蛋白终浓度为此浓度）.3）转化生长因子-β1（TGF-β1）中和抗体对照组.加入含TGF-β1中和抗体的培养液,TGF-β1中和抗体终浓度为5 μg·L-1（以下TGF-β1中和抗体终浓度为此浓度）.4）TGF-β1拮抗组.在加入人纯化白蛋白 15 min 前加入TGF-β1中和抗体.观察4组细胞形态的变化.采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测TGF-β1、ILK、纤维连接蛋白（FN）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）omRNA表达水平.结果空白对照组0、12、24和48 h时TGF-β1、ILK、E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达水平与TGF-β1中和抗体对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.白蛋白诱导组、TGF-β1拮抗组12、24和48 h时TGF-β1、ILK、E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达水平均明显高于同组0 h时、空白对照组和TGF-β1中和抗体对照组（均P＜0.05）;TGF-β1拮抗组12、24和48 h时TGF-β1、ILK和FN mRNA表达水平均显著低于白蛋白诱导组（均P＜0.01）,24、48 h时E-cadherin、α-SMA mRNA表达水平均显著低于白蛋白诱导组（均P＜0.01）.相关性分析结果显示,ILK mRNA表达与TGF-β1、α-SMA和FN mRNA表达均呈正相关（r=0.944、0.974和0.989,均P＜0.01）.结论白蛋白可以诱导HK-2细胞发生转分化,ILK在其中发挥促进作用.     

SAHA对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞胶原蛋白表达的影响

目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)所诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)胶原表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞系HELF,并分为空白对照组、SAHA组、TGF-β组以及SAHA+TGF-β组。其中空白对照组加入等体积PBS;SAHA组加入5μmol/L SAHA;TGF-β组加入终浓度为5 ng/mL TGF-β1孵育24 h;SAHA+TGF-β组在TGF-β组基础上分别加入0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA,共同孵育24 h。处理结束后,获取培养上清,比色法测量羟脯氨酸(HYP)的含量,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HELF细胞中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA表达水平。结果对照组脯氨酸表达极低,TGF-β1处理后,羟脯氨酸含量达12.684±1.485μg/mL。当分别用0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA处理后,HYP含量随着SAHA浓度的增加而减少(P<0.05);SAHA孵育24 h后,能够明显抑制TGF-β1刺激后的细胞表达Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA,并且具有明显的剂量依赖性(P<0.05)。结论 SAHA能减少TGF-β1诱导的HELF羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白表达,这可能是其抗纤维化的重要机制。     

慢性消化性溃疡与胃癌患者血清TGF-β1和胃泌素水平的表达及意义

目的探讨慢性消化性溃疡与胃癌患者血清转化生长因子(TGF-β1)和胃泌素(GAS)的表达水平及意义。方法对80例慢性消化性溃疡患者、80例胃癌及50例同期健康体检者(对照组)均采用酶联免疫吸附法检测血清TGF-β1水平,采用放射性免疫法测定血清GAS含量。结果对照组、慢性消化性溃疡组与胃癌组血清TGF-β1水平分别为(8.55±5.44)、(18.21±9.81)和(26.91±10.80)μg·L-1,血清GAS水平分别为(42.36±12.44)、(54.68±13.81)与(75.29±13.48)ng·L-1。慢性消化性溃疡组与胃癌组血清TGF-β1及GAS水平明显高于对照组(均P<0.01),且胃癌组两者水平较慢性消化性溃疡组升高更为显著(P<0.01)。男性患者TGF-β1和GAS水平较女性患者明显升高,年龄>50岁的患者TGF-β1和GAS水平较≤50岁的患者明显升高(均P<0.05);血清TGF-β1和GAS水平随癌细胞浸润深度、淋巴结转移的发生而增高(P<0.05)。不同TNM分期患者血清TGF-β1和GAS水平比较差异有统计学意义(均P<0.01),分期越高血清TGF-β1和GAS水平越高。TNMⅠ—Ⅲ期患者血清TGF-β1与GAS水平呈正相关(P<0.05),TNMⅣ期时TGF-β1与GAS无明显相关性(P=0.05)。结论血清TGF-β1与GAS的高表达与胃癌发生发展相关。     

阿利吉仑对大鼠肾纤维化TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨阿利吉仑对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为3组,Sham组、UUO组及aliskiren组,除Sham组外,UUO组及aliskiren组均行左侧输尿管结扎术。aliskiren组术前1 d开始灌胃给药,阿利吉伦50 mg/(kg·d),每日1次,连续2周。术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,免疫组化和Western印迹检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平。结果阿利吉仑可明显减轻大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生及肾小管扩张和萎缩。免疫组化和Western印迹结果均显示:与Sham组相比,UUO组TGF-β1、Smad2表达明显上升,而Smad7表达明显下降(均P<0.05);与UUO组相比,aliskiren组TGF-β1、Smad2表达明显下降,Smad7表达明显上升(均P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路与肾间质纤维化有关,阿利吉仑可抑制肾间质纤维化,其机制可能与下调TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达有关。     

疏肝健脾活血方对肝星状细胞增殖的影响

目的:采用细胞培养的方法,体外观察疏肝健脾活血方药物血清对转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)诱导的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)增殖作用的影响。方法:将40只大鼠随机分成正常大鼠血清组,疏肝健脾活血方低剂量组,疏肝健脾活血方中剂量组,疏肝健脾活血方高剂量组。以疏肝健脾活血方给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。采用TGFβ1诱导HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,以不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清作用于体外培养的HSC-T6,分别作用24 h、48 h后,采用CCK-8法检测不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清对HSC-T6增殖的影响。结果:疏肝健脾活血方药物血清作用于TGFβ1诱导的HSC-T6,细胞增殖受到明显抑制。各组作用48 h后,空白对照组OD值为(0.617±0.061),疏肝健脾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组OD值分别为(0.446±0.091)、0.417±0.103)、(0.376±0.065),疏肝健脾活血方各剂量组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常大鼠含药血清组OD值为(0.506±0.015),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:疏肝健脾活血方药物血清对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化作用增殖有抑制作用。