HPLC-UV和HPLC-ELSD法测定蜜炙酸枣仁中酸枣仁皂苷A含量的比较

[目的]建立蜜炙酸枣仁中酸枣仁皂苷A的含量测定方法。[方法]采用反相高效液相色谱法,以Wonda Cract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水为流动相,ELSD漂移管温度为80℃,气体流量为1.5 ml/min。紫外检测波长为204 nm;流速为1 ml/min,柱温为30℃。[结果]HPLC-ELSD法测定酸枣仁皂苷A的线性范围为0.05~0.2 mg/ml,r=0.9952,平均回收率为102.97%,RSD=0.79%(n=6)。HPLC-UV法测定酸枣仁皂苷A的线性范围为0.005~0.2 mg/ml,r=0.9990,平均回收率为98.64%,RSD=2.05%(n=6)。[结论]两种检测方法测定酸枣仁皂苷A的含量结果相近,但HPLC-ELSD法的稳定性更好,HPLC-UV法由于吸收度低,峰面积相对较小,存在一定误差。     

酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连接蛋白及血清生化指标的影响

目的:观察酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连结蛋白及血清生化指标的影响。方法:12只雄性大鼠随机平均分为对照组和酸枣仁组。酸枣仁组给予酸枣仁浸膏,3 mg·(kg·d)-1,连续灌胃3 d;对照组给予等量的生理盐水。腹主动脉取血,分离血清;采用MDCK-MDR1细胞模型,培养3 d至融合,体积分数10%含药血清孵育12 h后进行F-actin染色,在倒置荧光显微镜下观察酸枣仁含药血清对MDCK-MDR1细胞紧密连接蛋白的影响;并采用Mindray BS-220全自动生化分析仪对含药血清总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和肌酐等生化指标进行分析。结果:F-actin染色结果显示:对照组细胞紧密连接蛋白F-actin形态完整,形成肌动蛋白丝呈环形分布于细胞周围,提示细胞紧密连接完好,酸枣仁含药血清处理后,F-actin荧光无明显变化,细胞周边肌动蛋白丝带无明显异常。血清生化分析结果显示:酸枣仁组与对照组比较,总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素等指标差异统计学意义(P>0.05);酸枣仁组天门冬氨酸氨基转移酶含量(162.2±3.04)U·L~(-1),高于正常对照组(146.0±4.9)U·L~(-1)(P<0.05);酸枣仁组碱性磷酸酶和肌酐含量较对照组显著下降(P<0.001)。结论:酸枣仁含药血清对于细胞紧密联接蛋白无显著影响,但可显著提高天门冬氨酸氨基转移酶,提示酸枣仁可能通过影响体内天门冬氨酸氨基转移酶的活性而发挥抗焦虑作用。     

北五味子醇提取物和水提取物的镇静催眠作用比较

目的:分析北五味子醇提取物和水提取物对小鼠的镇静催眠作用。方法:制备五味子水提取物、醇提取物,并利用高效液相色谱分别测定不同工艺提取物中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量,观察不同提取物对戊巴比妥钠阈下剂量致小鼠入睡只数和阈上剂量致小鼠睡眠时间的影响。结果:北五味子醇提取物中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量分别为151.29 mg·g~(-1)、41.61 mg·g~(-1)、142.20 mg·g~(-1);水提取物中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量分别为57.27 mg·g~(-1)、11.09 mg·g~(-1)、39.29 mg·g~(-1)。五味子水提取物、醇提取物均可以增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数,延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间,镇静催眠作用呈良好的量效关系。其中醇提高剂量组可明显增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数(P<0.05),水提高剂量组和醇提中剂量组、高剂量组均可以明显延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间(P<0.05)。结论:五味子醇提取物和水提取物均有镇静催眠作用,且醇提取物的效果优于水提取物。五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量与镇静催眠作用有正相关性,是北五味子具备镇静催眠作用的重要物质基础。     

藿香正气水调节小鼠肠道菌群失调的作用研究

目的:通过小鼠菌群失调模型研究藿香正气水调节肠道菌群失调的作用。方法:按7.2 mg·g~(-1)剂量灌胃给予小鼠盐酸林可霉素,每天2次,连续5 d,建立小鼠肠道菌群失调模型。将造模成功的小鼠随机分为藿香正气水组、乳酶生组、模型对照组,另选取健康小鼠作为空白对照组。藿香正气水组小鼠分别灌胃3.0 mL·kg~(-1)、1.5 mL·kg~(-1)、0.75 mL·kg~(-1)的藿香正气水溶液,乳酶生组小鼠灌胃0.132 mg·g~(-1),2次/d,连续给药7 d。模型组、空白对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。于末次给药12 h后取小鼠的新鲜粪便,检测肠道菌群(肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌)的变化。结果:藿香正气水高、中、低剂量组小鼠肠道的有益菌——双歧杆菌和乳杆菌数量明显上升;中、高剂量组与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:藿香正气水能扶植肠道正常菌群的生长,促进有益菌(双歧杆菌和乳杆菌)的增殖,具有调节肠道菌群失调的作用。     

三七总皂苷对酒精性肝硬变大鼠肝星状细胞蛋白组学的影响

目的:探讨三七总皂对实验性酒精性肝硬变大鼠肝纤维化治疗作用的分子机制。方法:选取健康成年雄性Wistar大鼠36只,使用体积分数50%酒精16 m L·(kg·d)~(-1)灌胃造模,9周后随机分成模型组、安珐特组、三七总皂苷组,每组12只。安珐特组给予西药安珐特21.6 mg·(kg·d)~(-1)进行灌胃,三七总皂苷组给予三七总皂苷100 mg·(kg·d)~(-1)进行灌胃,模型组继续使用体积分数50%酒精灌胃。同时设置空白组。12周后处死大鼠,剪下肝右叶,提取肝星状细胞总蛋白,测定各组蛋白含量,继而进行等电聚焦双向电泳,比较组间的差异蛋白点。结果:通过组间两两比较发现,组间的蛋白表达均存在着差异,正常组与模型组比较,共有23个差异点;正常组与安珐特组比较,共有33个差异点;正常组与三七总皂苷组比较,共有30个差异点;模型组与安珐特组比较,共有30个差异点;模型组与三七总皂苷组比较,共有31个差异点;安珐特组与三七总皂苷组比较共有30个差异点。结论:三七总皂苷对实验性酒精性肝硬变大鼠具有保护作用,其机制可能与三七总皂苷引起肝星状细胞蛋白质表达差异有关。     

龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍模型大鼠行为学及海马GR、5-HT受体表达的影响

目的:观察龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠行为学,海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptors,GR)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受体1A亚型(5-HT1A)、2A亚型(5-HT2A)表达的影响。方法:采用单一延长刺激方法制作大鼠PTSD模型,通过旷场实验、拒俘反应实验以及Morris水迷宫实验观察大鼠的情感行为和学习记忆能力的改变。采用RT-PCR法检测海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达。结果:PTSD大鼠表现出多种情感行为障碍,学习能力显著降低(P<0.01)。海马GR表达增强(P<0.01),5-HT1A受体表达下降(P<0.05),5-HT2A受体表达则升高(P<0.05)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))能显著改善PTSD大鼠的情感行为障碍,提高学习记忆能力(P<0.05或P<0.01)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))可以明显降低PTSD大鼠海马GR的表达水平,升高5-HT1A受体表达水平和降低5-HT2A受体表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶对PTSD具有良好的干预治疗作用,其作用机理与改善情感行为和认知功能以及调节海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达有关。     

原花青素预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用

目的:探讨原花青素(proanthocyanidins,PC)对大鼠缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)心肌能量代谢的影响及其抗氧化能力。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机均分为4组:空白对照组、IRI模型组、PC 80 mg·kg~(-1)、PC160 mg·kg~(-1)组。首先用不同剂量的PC对大鼠进行预处理,然后利用Langendorff灌流技术制备心肌IRI模型,并观察PC作用后,IRI心肌高能磷酸化合物(high energy phosphates,HEP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的变化。结果:PC 160 mg·kg~(-1)组和PC 80 mg·kg~(-1)组左心室心肌组织的三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)及总腺嘌呤核苷酸(total adenine nucleotides,TAN)分别为(0.16±0.06)mg·g~(-1),(0.51±0.15)mg·g~(-1),(0.80±0.26)mg·g~(-1),(1.47±0.44)mg·g~(-1)和(0.14±0.07)mg·g~(-1),(0.34±0.11)mg·g~(-1),(0.74±0.31)mg·g~(-1),(1.22±0.44)mg·g~(-1),均高于IRI模型组(P<0.01);PC 160 mg·kg~(-1)组左心室肌组织的ADP高于PC 80 mg·kg~(-1)组(P<0.01)。与IRI模型组比较,PC 2个剂量组左心室肌组织的SOD活性分别为(154.3±23.7)n U·mg~(-1),(134.1±18.8)n U·mg~(-1),活性升高(P<0.01,P<0.05);MDA含量分别为(3.4±0.6)μmol·g~(-1),(2.6±0.6)μmol·g~(-1),含量减少(P<0.01);PC 2个剂量组左心室肌组织的SOD活性、MDA含量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PC具有改善IRI心肌能量代谢和抗氧化的作用,能起到保护心肌IRI的作用。     

三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后活性的影响

目的:检测三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后的影响,探索三七总皂苷对内皮细胞的保护作用。方法:把体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代培养,共分为6组,即正常组,模型组,三七总皂苷4个浓度组,用10μg·L~(-1)的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)造成细胞损伤模型,三七总皂苷组分别加入不同浓度的三七总皂苷2.5 mg·L~(-1)、5 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、20 mg·L~(-1),用CCK-8方法检测各组细胞活性。结果:CCK-8检测结果显示,人脐静脉内皮细胞在TNF-α诱导损伤后,用4个浓度的三七总皂苷干预,随着时间的延长,细胞存活率逐渐降低,组间差异具有统计学意义,其中6 h的细胞存活率最高,24 h的细胞活性最差,差异无统计学意义;和模型组相比,三七总皂苷4个浓度组细胞活性明显较高(P<0.01或P<0.05),其中5 mg·L~(-1)三七总皂苷组细胞活性最高,与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:三七总皂苷能提高人脐静脉内皮细胞损伤后的活性。     

生脉分散片中人参皂苷Rgl、Re总量和五味子醇甲的纯化工艺研究

目的:确定生脉分散片中主要有效成分人参皂苷Rgl、Re总量和五味子醇甲的纯化工艺。方法:以生脉分散片中人参皂苷Rgl、Re总量和五味子醇甲含量为指标,比较不同型号大孔吸附树脂和不同工艺条件对生脉分散片有效成分的分离纯化能力。结果:采用D-101大孔吸附树脂对人参皂苷Rg1、Re总量和五味子醇甲的吸附容量分别为4.918 5 mg·g~(-1)和11.177 6 mg·g~(-1);解吸率分别为56.05%,33.87%,为综合最佳吸附树脂。优选最佳纯化工艺为:上药液质量浓度0.16 kg·L~(-1),上样体积为9 BV,上样速率2 BV·h~(-1);6 BV水平衡,体积分数70%乙醇6 BV洗脱,速率均为4 BV·h~(-1)。结论:本工艺条件操作简单,人参皂苷Rgl、Re总量和五味子醇甲纯度均提高20倍以上,回收率分别达到59.18%,67.78%,适用于生脉分散片的纯化工艺。     

黄芪酸枣仁汤治疗甲状腺功能亢进症

目的:观察黄芪酸枣仁汤治疗甲状腺功能亢进症的临床评疗效对甲状腺体积的影响。方法:90例甲状腺功能亢进症患者作随机分为观察组(n=45)和对照组(n=45)。对照组根据病情程度,每日口服30～60 mg甲巯咪唑;观察组在对照组治疗基础上给予黄芪酸枣仁汤治疗。两组患者均连续治疗8周。比较两组患者治疗前后血清甲状腺素、甲状腺体积、中医证候积分,并比较两组治疗后临床疗效和治疗过程中的不良反应。结果:治疗后,两组患者血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)均显著降低,促甲状腺激素(thyrotropic hormone,TSH)显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组血清FT3、FT4均低于对照组,TSH高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者甲状腺体积均显著小于治疗前(P<0.05);观察组甲状腺体积明显小于对照组[(7.83±1.15) mm~2vs(14.75±2.16) mm~2],差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,两组患者治疗后各中医证候积分均显著降低(P<0.05),观察组心悸、汗多、恶热、善食易饥等积分均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组有效率明显高于对照组[95.56%(43/45)vs 71.11%(32/45)],差异有统计学意义(P<0.05)。观察组恶心呕吐、白细胞减少、肝酶升高总发生率明显低于对照组[4.44%(2/45)vs 20.00%(9/45)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪酸枣仁汤治疗甲状腺功能亢进症疗效显著,可降低FT3、FT4水平,升高TSH水平,缩小甲状腺体积,降低中医证候积分,减少不良反应。