强肝抗纤汤防治大鼠肝纤维化的实验研究

目的研究强肝抗纤汤对大鼠肝纤维化的防治作用,为强肝抗纤汤的临床应用提供实验依据。方法将62只SPF级大鼠随机分为空白组,模型组,秋水仙碱组,中药低、高剂量组5组。采用复合因素法复制肝纤维化模型,造模前1 d,各组分别灌胃生理盐水或相应药物。造模及灌胃给药共进行6周,6周后对各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量进行检测,并进行大鼠肝脏病理形态学观察。结果与空白组比较,模型组大鼠ALT,AST含量显著升高,差异有高度统计意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠ALT,AST含量显著降低,差异有统计意义(P<0.05或P<0.01);与秋水仙碱组比较,强肝抗纤汤高、低剂量组ALT,AST含量降低更为显著,差异有高度统计意义(P<0.01)。结论强肝抗纤汤可有效预防实验大鼠肝纤维化形成,降低肝纤维化大鼠肝组织损伤程度,有效降低肝纤维化模型大鼠血清ALT,AST含量。     

柴胡-白芍醇提液抗抑郁和保肝作用实验研究

目的研究柴胡、白芍及其配伍乙醇提取液对小鼠的抗抑郁作用和对四氯化碳(CCl4)所致小鼠肝损伤的保护作用。方法将60只雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、柴胡组、白芍组和柴胡-白芍组,每组10只。各组小鼠灌胃给药21 d后通过悬尾、强迫游泳等行为学实验研究各药的抗抑郁作用。另取6组雄性小鼠,分组同上,采用CCl4制作小鼠急性肝损伤模型,取上层血清检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)指标,并取肝脏组织做细胞形态学观察,以研究各药的保肝作用。结果各给药组均能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间,拮抗利血平所致的运动能力下降、肛温变化、眼睑下垂,差异有统计意义(P<0.05或P<0.01),以柴胡-白芍组最佳;各给药组均能显著降低肝损伤小鼠血清AST,ALT含量,差异有高度统计意义(P<0.01),且可明显改善病理组织状况。结论柴胡、白芍乙醇提取液对小鼠具有明显的抗抑郁作用和保肝作用,且以柴胡-白芍配伍疗效最佳。     

靶向沉默RACK1基因对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究沉默RACK1基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:使用人肺腺癌细胞株A549建立裸鼠皮下移植瘤模型。待肿瘤直径为0.3~0.5 cm时将荷瘤裸鼠随机分成3组,每组6只,分别于瘤内注射生理盐水(空白组)、空载质粒-脂质体复合物(空载组)及shRNARACK1质粒-脂质体复合物(实验组)。观察三组裸鼠的皮下移植瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线,并用Western blot检测各组肿瘤组织中RACK1蛋白的表达。结果:移植瘤形成后第28天,与空白组和空载组比较,实验组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低(P<0.05)。转染干扰载体RACK1-shRNA对裸鼠肺腺癌移植瘤的的抑瘤率为39%。Western blot结果显示,实验组移植瘤组织中RACK1蛋白的表达明显低于空白组和空载组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默RACK1基因对肺腺癌裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用。     

接骨丸对SD大鼠肝肾毒性的实验研究

目的:观察接骨丸对SD大鼠肝脏和肾脏的毒性,完善接骨丸质量标准,确保该制剂使用安全。方法:选择40只健康SD大鼠,雌雄各半,按照数字随机表法分为空白对照组、接骨丸低剂量组、接骨丸高剂量组及接骨丸生马钱子组,每组10只。实验开始前取每只大鼠的血液测定肝肾功能相关的生化指标,包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(T-BIL)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及三酰甘油(TG)。对每组SD大鼠按照实验设定的给药剂量连续12周灌胃,每日1次,每周测定大鼠体质量,并根据体质量实时调整给药量。给药期间每日观察两次大鼠的活动及行为,记录变化情况。12周灌胃结束后,取每只大鼠的血样测量实验前测量的生化指标并比较。停药2周后再次进行上述指标检测并比较,处死小鼠取小鼠肝脏、肾脏测量肝、肾脏器系数,取肝组织和肾组织制片观察大鼠的病理改变。结果:40只小鼠在实验期间的活动及行为表现均无明显异常;实验前4组小鼠的血生化指标无明显差异;灌胃12周后、停药2周后,空白组、低剂量组小鼠的血生化指标和实验前比较无明显变化,灌胃12周后,高剂量组和生马钱子组小鼠的ALT、AST、ALP、TBIL、GLU、BUN、Cr及TG均较实验前有明显上升,前后比较差异具有统计学意义(P<0.05),生马钱子组小鼠上述指标的上升幅度明显高于高剂量组,差异具有统计学意义(P<0.05)。停药2周后,高剂量组和生马钱子组小鼠的上述生化指标均得到明显下降,但与实验前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。停药2周后空白组、低剂量组小鼠的肝、肾脏器系数处于正常范围,而高剂量组和生马钱子组小鼠的肝肾脏器系数明显超出正常范围,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:按照质量标准生产的接骨丸在正常剂量范围内使用,安全可靠,但若超出常规剂量使用,具有一定的肝肾毒性,同时,若不按照规定工艺对马钱子进行炮制直接添加在接骨丸中,同时超量使用,其肝肾毒性更强,应引起生产单位、使用单位的高度重视。     

蛞蝓有效提取物抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长

目的观察蛞蝓有效提取物(EL-3)对宫颈癌He La细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法制备宫颈癌He La细胞裸鼠移植瘤模型,检查EL-3对瘤体积、瘤重及VEGF蛋白表达的影响,评估EL-3在体内治疗宫颈癌的有效性。结果 EL-3(10、30和100 mg/kg)实验组的瘤体积显著低于生理盐水组(P<0.05),同时,其移植瘤的瘤重抑制率分别为42.0%、67.0%和83.0%,提示EL-3在体内抗宫颈癌作用较强,且呈剂量依赖性;采用免疫组化检测证实EL-3下调宫颈癌裸鼠移植瘤细胞VEGF蛋白表达。结论 EL-3具有抑制宫颈癌He La细胞裸鼠移植瘤生长的作用,其机理可能与抑制肿瘤血管生成有关。     

仿刺参肠多糖提取物对小鼠实体瘤的抑制作用

采用碱解、酶解和醇沉淀法提取仿刺参Apostichopus japonicus肠组织中的粗多糖(简称肠多糖),通过构建小鼠H22肝癌实体瘤模型,采用腹腔给药途径,研究了不同剂量的肠多糖[200、100、50mg/(kg.d)]对小鼠实体瘤的抑制作用,并测定了小鼠的脾脏指数、胸腺指数以及血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)的含量。结果表明:肠多糖对患H22肝癌小鼠的实体瘤具有显著的抑制作用,肠多糖高剂量组小鼠的瘤质量与肿瘤对照组差异极显著(P<0.01),肠多糖中、低剂量组的瘤质量与肿瘤对照组差异显著(P<0.05),肠多糖高、中、低剂量的抑瘤率分别为90.1%、85.2%和71.7%;各肠多糖组小鼠的脾脏指数与肿瘤对照组均无显著差异(P>0.05),但随着肠多糖剂量的上升,小鼠的脾脏指数也上升;各肠多糖组小鼠的胸腺指数均高于肿瘤对照组,除肠多糖低剂量组外其余各组均与肿瘤对照组差异显著(P<0.05);肠多糖高剂量组小鼠血清中的IL-2含量极显著高于3个对照组(P<0.01),而肠多糖中、低剂量组血清中的IL-2含量与肿瘤对照组、给药健康对照组均无显著差异(P>0.05);肠多糖高、中、低剂量组小鼠血清中的TNF-α含量与3个对照组均无显著差异(P>0.05)。     

失笑散对实验性心肌缺血大鼠血液流变学的影响

目的:观察失笑散颗粒对心肌缺血大鼠血液流变学的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机平均分成空白对照组,模型组,失笑散颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组,阳性药物对照组。空白对照组和模型对照组给予等量生理盐水,其余各组分别给予相应药物,均采用灌胃方式,连续7 d,从第3日起,除正常对照组外,其余各组均于给药后1 h皮下注射异丙肾上腺素5 mg·(kg·d)~(-1),连续5 d,时间间隔为24 h;正常对照组给予等量生理盐水皮下注射,记录给药前及第5次注射异丙肾上腺素后心电图。末次注射后2 h,处死动物,取血制备血清,用全自动生化检测仪测定心肌酶;处死后立即取出心脏,制备心肌匀浆,试剂盒法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)。结果:模型组与空白对照组相比,实验大鼠心肌缺血阳性率明显升高,全血黏度、血浆黏度、红细胞压积均升高,血沉降低,天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、肌钙蛋白T(troponin T,Tn T)、MDA均升高(P<0.05),SOD降低(P<0.05);失笑散颗粒高剂量组与模型组相比,心肌缺血阳性率明显降低,全血黏度、血浆黏度、红细胞压积均降低,血沉升高,AST、LDH、CPK、BNP、Tn T、MDA均降低(P<0.05),SOD升高(P<0.05);阳性药物对照组与模型组相比,心肌缺血阳性率降低,全血黏度、血浆黏度、红细胞压积均升高(P<0.05),LDH、CPK均降低(P<0.05)。结论:失笑散颗粒能够缓解实验性大鼠心肌缺血症状,且高剂量的失笑散颗粒对心肌缺血的疗效更显著,为失笑散颗粒型的临床应用提供了制剂学基础和药效学依据。     

一贯煎对肝癌EGFR信号通路及其下游侵袭转移相关蛋白表达的影响

目的:观察一贯煎对肝癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路及其下游侵袭转移相关蛋白细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:雄性KM小鼠50只,随机均分为模型组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组。腋下注射H22细胞建立小鼠荷瘤模型,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组造模前两周开始用药,剂量分别为46 g·(kg·d)~(-1)、23 g·(kg·d)~(-1)、11.5 g·(kg·d)~(-1),CTX组造模后开始给药,剂量为0.05 g·(kg·d)~(-1),模型组造模后灌胃等体积生理盐水,造模后继续给药2周。处死各组小鼠取瘤称质量,蛋白电泳法检测EGFR、p-ERK、PCNA及ICAM-1蛋白的表达。结果:与模型组比较,一贯煎各剂量组及CTX组均能显著降低瘤体质量,差异有统计学意义(P<0.01);一贯煎各剂量组与CTX组比较,瘤体质量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,一贯煎高剂量组可显著降低EGFR及PCNA蛋白表达,一贯煎高剂量组及一贯煎中剂量组可显著降低p-ERK及ICAM-1蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一贯煎可能通过调控EGFR信号通路及其下游侵袭转移相关蛋白p-ERK、PCNA、ICAM-1蛋白表达,发挥抑制荷H22小鼠肝癌细胞侵袭转移的作用。     

黄芩总黄酮苷元对小鼠肝脏的保护作用

目的探讨黄芩总黄酮苷元(SBTF)对肝脏的保护作用。方法将70只小鼠随机均分为7组(空白组、模型组、阴性对照组、联苯双酯阳性对照组及高、中、低剂量黄芩总苷元给药组),每组10只,灌胃给药15天。高、中、低剂量给药组分别给黄芩总苷元400、200、100 mg/kg;阳性组给予联苯双酯200 mg/kg;阴性组给予2.0%泊洛沙姆水溶液;模型组和空白组均给予生理盐水。第15天给药6 h后除空白组外均腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。12 h后称重,取血,分离肝脏,拍照、制匀浆测定丙二醛(MDA)指标;全血离心后取血清测定肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果阳性组与高剂量给药组中小鼠肝脏外表光滑红润,无血块和斑点,但光泽差于空白组;中、低剂量给药组红润程度依次下降,并可见瘀斑渐次明显;阴性组和模型组外观苍白,可见成块淤血、瘀斑。模型组、阴性组AST、ALT、MDA指标与空白组相比明显升高;给药组AST、ALT、MDA指标按低、中、高剂量下降,与模型组相比差异有显著性。结论黄芩总黄酮苷元对肝脏有保护作用。     

白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇抑制人上皮性卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡的作用及机制。方法:将人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞随机分为5组,即正常对照组、白藜芦醇高剂量组(40 mg·L~(-1))、白藜芦醇中剂量组(20 mg·L~(-1))、白藜芦醇低剂量组(10 mg·L~(-1))和顺铂组(40 mg·L~(-1))。干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,MTT比色法检测各组细胞增值抑制率。通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、流式细胞术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,Western blot法检测细胞caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,白藜芦醇高、中剂量组细胞出现变圆、脱壁、细胞间接触松散等状态,细胞抑制作用明显、增殖抑制率显著升高(P<0.01);白藜芦醇各剂量组细胞周期被阻滞于G2/M期,白藜芦醇高、中剂量组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),同时可明显下调Bcl-2 mRNA而上调Bax mRNA表达,显著提高Bax/Bcl-2值(P<0.05,P<0.01),上调caspase-3蛋白表达(P<0.01)。结论:白藜芦醇能够通过抑制增殖并促进凋亡对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与白藜芦醇调节凋亡相关基因蛋白表达有关。