保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌融合子,采用单亲灭活及正交分析方法,研究了保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合条件。结果表明：保加利亚乳杆菌原生质体制备的最适条件是以磷酸盐缓冲液和甘露醇制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,1.0 mg/mL的溶菌酶36 ℃处理30 min,原生质体的形成率为（89.02±2.31）%,再生率为（4.62±0.22）%。嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体制备的最适条件是以Tris-HCl和蔗糖制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,0.1 mg/mL的溶菌酶42 ℃处理30 min,原生质体的形成率为（99.15±0.23）%,再生率为（5.79±0.17）%。单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体融合的最适条件为聚乙二醇6000（质量浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L CaCl2、0.02 mol/L MgCl2）40 ℃促融2 min,融合率可达（1.85±0.12）×10－6。所得融合子各项性能优良,适合于酸奶生产。     

壳聚糖-果胶钙微球的制备及其体外溶胀释放性的研究

通过将离子移变交联和聚电解质络合相结合,制备载有牛血清白蛋白的壳聚糖-果胶钙微球。以微球形态、包封率、载药量、体外溶胀度以及释放率为指标,依次考察果胶溶液的浓度、氯化钙溶液的浓度和壳聚糖溶液浓度等因素对微球质量的影响。结果表明,最佳制备工艺为:7%（w/v）的果胶溶液,3%（w/v）氯化钙溶液,pH5.5的氯化钙-壳聚糖交联溶液,0.50%（w/v）的壳聚糖溶液,5%（w/v）的BSA浓度。最终,壳聚糖-果胶钙微球的包封率高达89.68%,载量高达32.13%,释放时间显著延长,缓释效果得到明显改善。因此,壳聚糖-果胶钙微球能够有效包埋BSA并有望成为功能成分经口服肠道释放的载体。      

葡萄糖氧化酶脂质体的制备与表征

以大豆卵磷脂和胆固醇作为壁材,采用薄膜蒸发-冻融法制备葡萄糖氧化酶脂质体。以包封率作为指标,通过单因素和正交试验设计优化确定最佳制备工艺,并考察脂质体的形貌、粒径分布和稳定性指标。结果表明：最佳工艺参数为：大豆卵磷脂与胆固醇质量比4∶1、芯材质量5 mg（500 U）、水化时间15 min、冻融循环10 次,此条件下包封率可达到（87.7±2.1）%;粒径分布均匀,分散性较好,平均粒径为（164.75±2.55） μm;4 ℃和室温（23.0±0.5）℃贮存条件下脂质体包封率无变化,酶活性稳定。     

高乳化活性的BSA-葡聚糖接枝物制备工艺的优化

牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)可通过糖基化反应与葡聚糖(dextran)形成复合物,可作为油溶性营养素的乳化包埋载体。以乳化活性为指标,通过单因素试验以及响应面试验,优化湿法美拉德反应制备BSA-dextran复合物的最佳工艺条件。研究结果表明:复合物最佳工艺条件为BSA浓度2.78mg/mL、dextran∶BSA(摩尔比)=6.89∶1、pH8.50、反应时间2.3h、反应温度95.0℃;所得BSA-dextran乳化活性为(31.743±0.45)m2/g;该复合物对叶黄素包埋的包封率为95.86%,明显高于BSA对叶黄素包埋的包封率(77.82%)。     

黑果枸杞花色苷纳米颗粒的制备及其对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉融合细胞氧化损伤的保护作用

为了提高黑果枸杞花色苷的稳定性和活性,利用壳聚糖（chitosan,CS）与酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptide,CPP）复合凝胶体系制备CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得最佳制备条件为：pH?4、室温条件下搅拌,2?mg/mL黑果枸杞花色苷溶液等体积添加到质量分数0.5%?CPP溶液中,然后添加等体积0.20～0.30?mg/mL?CS溶液至上述花色苷-CPP溶液中,由离子凝胶机制自发形成CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒。所得CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径为215.3?nm,表面电势为36?mV,包封率为65.0%～72.2%;体外释放实验结果表明,在pH?7.0时该CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒的释放率为24.3%～64.2%。体外细胞实验结果表明,黑果枸杞花色苷质量浓度为100～200?μg/L的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒能够显著提高氧化低密度脂蛋白诱导的氧化损伤人脐静脉融合EAhy926细胞的存活率（P＜0.05）。因此,CS-CPP复合凝胶体系能够包封黑果枸杞花色苷,其制备的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒具有较好的体外抗氧化能力。     

超高压辅助提取灵芝三萜的工艺优化及抗氧化活性评价

以东北赤灵芝为实验原料,灵芝三萜得率为评价指标,优化超高压及有机溶剂浸提工艺,并对不同提取方法获得的灵芝三萜体外抗氧化活性进行研究。结果表明,超高压辅助提取灵芝三萜的最佳工艺为:压力为350 MPa、料液比1:20 g/mL、保压时间7 min、乙醇浓度90%,三萜得率为1.154%;有机溶剂浸提法的最佳工艺为:料液比1:25 g/mL、乙醇浓度90%、提取温度75 ℃、提取时间3 h,三萜得率为0.925%。抗氧化性研究结果表明:超高压提取液在浓度为3 mg/mL时,对DPPH和羟自由清除率分别为59.64%±2.44%,62.31%±1.57%,IC₅₀分别为1.8和2.0 mg/mL,而有机溶剂浸提液浓度在3 mg/mL时,仅为41.87%±2.72%、43.36%±2.36%,且灵芝三萜浓度与抗氧化活性呈现良好的相关性。本研究为灵芝三萜的提取及应用奠定了理论基础。     

牛血清白蛋白辅助交联对苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体影响的研究

通过牛血清白蛋白（BSA）辅助交联,制备了牛血清白蛋白苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体（BSA-PAL-CLEAs）。优化了BSA-PAL-CLEAs的制备条件,并比较研究了游离酶、苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体（PAL-CLEAs）和BSA-PAL-CLEAs的稳定性差异。研究发现,BSA-PAL-CLEAs的最佳制备条件:BSA浓度为5mg/mL,硫酸铵饱和度80%,戊二醛（10%v/v）10μL,交联时间2h,所得BSA-PAL-CLEAs的酶活回收率（25%）是不加BSA时（13%）的1.92倍。稳定性研究表明,BSA-PAL-CLEAs的温度稳定性、储藏稳定性比PAL-CLEAs都有所提高;但是,游离酶、PAL-CLEAs、BSA-PAL-CLEAs的pH稳定性相差不大;BSA-PAL-CLEAs在有机溶剂中的稳定性比PAL-CLEAs有所下降。      

自组装法制备丁香酚纳米胶囊及其性能表征

通过静电结合形成可溶性明胶-壳聚糖复合物,以此为载体经自组装制备丁香酚纳米胶囊。单因素试验和正交试验考察壳聚糖质量浓度、明胶质量浓度、交联时间、转速、丁香酚质量浓度对其粒径及包封率的影响,对最优工艺条件下制备的丁香酚纳米胶囊进行性能表征分析。结果表明,制备丁香酚纳米胶囊的最优工艺为壳聚糖质量浓度2?mg/mL、明胶质量浓度2?mg/mL、丁香酚质量浓度5?mg/mL、转速800?r/min、交联时间30?min,该条件下丁香酚纳米胶囊平均粒径为229.09?nm,包封率为50.69%;透射电镜图表明胶囊呈规则圆形,分布均匀;差示扫描量热分析和红外光谱表明丁香酚与明胶以氢键和疏水作用力相互作用;体外释放实验证明丁香酚纳米胶囊具有一定的缓释特性,该制备工艺简便、绿色、温和,可扩大丁香酚使用范围,提高其生物利用度,酚类的纳米包封体系在食品防腐剂方面具有潜在应用前景。     

山梨酸纳米防腐颗粒的制备、表征及其缓释性能

为扩大山梨酸在肉品保鲜上的应用范围,克服其水溶性差的缺陷,采用离子凝胶法制备山梨酸壳聚糖纳米防腐颗粒。以颗粒粒径与包封率为参考指标,通过单因素及正交试验考察壳聚糖质量浓度、三聚磷酸钠质量浓度、交联时间、山梨酸质量浓度、搅拌时间等因素对颗粒粒径与包封率的影响,确定最优制备工艺。通过傅里叶变换红外光谱,透射电镜对颗粒进一步表征,并考察其体外释放性能。结果表明,制备山梨酸壳聚糖纳米粒的最佳工艺为壳聚糖质量浓度1 mg/mL、三聚磷酸钠质量浓度0.5 mg/mL、交联时间30 min、山梨酸质量浓度 1 mg/mL,该条件下山梨酸颗粒平均粒径为337.2 nm,包封率为74.3%;红外光谱表明壳聚糖与山梨酸静电吸附,山梨酸被包封;透射电镜图表明所制颗粒大小均匀,呈规则球形;缓释实验表明：24 h山梨酸的释放量为50%,纳米防腐颗粒具有一定的缓释特性。     

灵芝菌丝体总三萜超声辅助提取工艺优化

以灵芝菌丝体为原料,在单因素试验基础上,通过正交试验和Box-Behnken响应面设计法优化超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜工艺。结果表明,超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜正交试验最佳工艺为:超声功率90 W、超声时间50 min、pH 8、料液比1∶40(g/mL),在此条件下灵芝菌丝体三萜平均提取率为0.76%;超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜响应面试验最佳工艺为:超声功率90 W、超声时间42 min、pH 8、料液比1∶30(g/mL),在此条件下,灵芝菌丝体总三萜平均提取率为1.09%,与最大预测值1.13%相差0.04%。这两种方法得到的提取工艺参数可靠,可为灵芝三萜工业化生产提供技术参考。     

灵芝孢子粉破壁工艺优化及其抗肿瘤作用

以灵芝孢子粉为原料,采用高压均质法破壁灵芝孢子,研究灵芝孢子粉破壁优化工艺及破壁孢子粉抗肿瘤作用。选取水为破壁溶剂,以均质压力、均质次数、料液比为试验因素,以灵芝孢子破壁率为试验指标,通过单因素试验及正交试验对灵芝孢子破壁工艺进行优化。通过建立S180荷瘤小鼠模型,对破壁灵芝孢子粉的抗肿瘤作用进行研究。结果表明,最佳破壁工艺条件为均质压力150 MPa、均质次数3、料液比1∶100（g/mL）,破壁率为94.35%。抗肿瘤实验表明,破壁灵芝孢子对小鼠S180肉瘤的抑制率为43.37%～57.59%,且肝体比和肺体比变化稳定,并可显著提高小鼠的胸腺指数和脾指数。因此,破壁灵芝孢子粉具有良好的抗肿瘤作用。     

响应面法优化载儿茶素叶酸偶联壳聚糖纳米粒的制备工艺

采用响应面法对载儿茶素叶酸偶联壳聚糖纳米粒的制备工艺进行优化。利用叶酸活性酯与壳聚糖酰化反应制备叶酸偶联壳聚糖。通过单因素和响应面试验,以儿茶素包封率为考察指标,采用分子自组装原理制备载儿茶素叶酸偶联壳聚糖纳米粒并进行工艺优化。结果表明,最佳制备工艺条件为：儿茶素与叶酸偶联壳聚糖质量比9∶20、叶酸偶联壳聚糖与三聚磷酸钠质量比3.93∶1、反应溶液pH 5.15、搅拌时间32.35 min。在此条件下,儿茶素包封率为23.45%,与理论值23.90%接近。透射电镜图表明所制纳米粒大小均匀,接近于规则球形,粒径分布在200～500 nm范围内。利用响应面法优化载儿茶素叶酸偶联壳聚糖纳米粒的制备工艺是可行的。     

GA的提取分离工艺优化及其体内抗氧化活性作用

目的：探讨利用漆酶破壁结合超声波辅助法提取灵芝孢子粉中灵芝酸（ganoderma acid,GA）组分以及GA对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的体内抗氧化活性的影响。方法：利用正交试验将工艺条件优化;D-半乳糖连续皮下注射进行亚急性衰老小鼠造模,建模同时,以抗坏血酸为阳性对照组,GA设立高、中、低剂量组对衰老模型小鼠进行灌胃,另设立空白对照组和模型对照组,灌胃0.5%的羧甲基纤维素钠溶液（sodium carboxymethylcellulose,CMC-Na）,每周测一次体质量,6 周后分别测所有小鼠血清、肝脏、脑组织的总超氧化物歧化酶（totalsuperoxide dismutase,T-SOD）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,血清和脑组织的谷胱甘肽过氧化物歧化酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）活力、血清和肝脏的总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）值。结果：得到最优工艺条件为料液比1∶60、加酶量0.04 g/mL、超声3 次、每次超声时间3 h,在此工艺条件下得到GA的提取率为1.69%;GA可明显提高小鼠体内T-SOD、GSH-PX活力和T-AOC值,降低MDA含量。结论：得到GA的最佳提取工艺稳定可行;GA能显著提高衰老模型小鼠的体内抗氧化能力。     

花青素缓释材料—氨基壳聚糖的制备及缓释性能研究

以壳聚糖为材料,采用反相悬浮交联法制备复合材料,利用Schiff base反应对壳聚糖的氨基进行了保护。利用乙二胺对得到的复合材料进行修饰,获得氨基化的壳聚糖材料,并对其进行结构表征。通过聚乙烯硫酸钾标定氨基,考察环氧丙烷用量对材料的表面游离氨基的影响。分别探讨了致孔剂、预交连剂与交联剂的含量对花青素包封率的影响以及在模拟生理环境中评价材料的缓释情况。结果表明:随着环氧丙烷的含量增加,材料出现游离的氨基减少的情况;随着致孔剂,预交连剂和交联剂的含量增加,花青素的包封率也逐渐增高,但当三者超过一定的含量时,包封率反而出现下降趋势。通过模拟人体生理环境下的花青素的缓释研究,载药颗粒在pH 1.72,温度37℃条件下,4 h内释放量达到了(81.63±1.92)%,在10 h内释放完毕,而在pH 8.25,温度37℃时4 h内释放量达到了(71.68±2.55)%,10 h内基本释放完毕。释放曲线符合正态分布模型,表明该化学修饰的壳聚糖可以作为负载材料用于花青素的缓释用途。     

拉曼光谱法检测灵芝孢子油氧化酸败

采用拉曼光谱法直接监测灵芝孢子油中氧化酸败过程中不饱和双键特征峰的变化规律,研究了特征峰的强度与孢子油氧化酸败程度的关系。结果表明,特征峰强度随孢子油酸值、过氧化值的增加而下降,特征峰的面积与孢子油酸值之间存在着良好的线性关系,并进一步测定了灵芝孢子油氧化酸败的动力学参数。建立了用拉曼光谱快速检测灵芝孢子油氧化酸败度的新方法。对该方法的有效性进行评估,并用该方法筛选出有效的灵芝孢子油抗氧化剂。     

短瓣金莲花不同提取部位的抗氧化活性

目的：研究短瓣金莲花的抗氧化活性部位。方法：将短瓣金莲花药材依次用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、60%乙醇、30%乙醇和去离子水提取,采用紫外-可见分光光度法对不同溶剂提取部位的黄色素、总黄酮和总酚含量进行分析,并测试各提取部位对羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除作用以对其抗氧化活性进行研究。结果：短瓣金莲花石油醚提取部位的黄色素含量最高,为（11.37±0.07 ）mg/g;而60%乙醇提取部位总黄酮和总酚含量最高,分别为（213.21±1.12）mg/g和（121.75±0.58） mg/g,95%乙醇提取部位次之,分别为（200.47±0.65）mg/g和（105.19±0.61）mg/g。石油醚提取部位清除•OH能力最强,半抑制浓度（50% inhibiting concentration,IC50）为92.77 mg/L;95%乙醇提取部位清除DPPH自由基能力最强,IC50为10.14 mg/L,60%乙醇提取部位次之,IC50为10.70 mg/L。结论：短瓣金莲花清除•OH能力与黄色素含量呈正相关性,而清除DPPH自由基能力与黄酮和多酚含量呈正相关性;短瓣金莲花的石油醚和95%乙醇提取部位是最佳的抗氧化活性部位,有待进一步深入研究。     

影响木薯蚕蛹食用安全性的成分分析

采用原子荧光法和滴定法分析影响木薯蚕蛹食用安全性的成分。结果表明：木薯蚕蛹中总砷含量（1.99±0.84）mg/kg、铅含量（0.14±0.03）mg/kg、镉含量（0.54±0.14）μg/kg、汞含量未检出。木薯蚕蛹中氰化物的含量为（0.33±0.07）mg/kg干样,经过水煮、蒸、油炸、微波处理后,其氰化物的清除率分别达到100%、78.83%、26.78%和39.37%。木薯蚕蛹挥发性盐基氮（TVB-N）值达到（71.62±5.32）mg/100 g。说明木薯蚕蛹铅、镉、汞和氰化物的含量远低于相关规定的限值。     

中国野生刺葡萄（Vitis davidii Foex）及其单品种葡萄酒中花旗松素含量分析

利用高效液相色谱-串联质谱联用技术对原产中国的野生刺葡萄果实的果皮、果肉、种子及单品种葡萄酒中的花旗松素含量（以鲜质量计算）进行测定与分析。结果表明：刺葡萄果实果皮中花旗松素含量最高,其含量在刺葡萄黑、白果实中分别为（2.44±0.18）、（2.03±0.14） mg/kg,在种子中分别为（1.66±0.13）、（1.38±0.12） mg/kg,果肉中含量最低,分别为（0.36±0.02）、（0.25±0.02） mg/kg。刺葡萄黑、白果实中各个部位花旗松素含量均无明显差异,但对照品种黑色果实果皮中的花旗松素含量显著高于白色果实,这说明花旗松素含量的高低与葡萄果皮颜色并无直接关系。在单品种酒中,白葡萄酒由于酿造工艺不同,果皮和种子中的花旗松素无法进入酒中,花旗松素含量仅为红葡萄酒的20%;葡萄酒中的花旗松素含量略低于果实是因为提取果实中花旗松素的溶剂是甲醇,而葡萄酒中只是水和乙醇的自然浸渍。     

邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯在青春期小鼠体内的代谢动力学研究

研究邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（di-（2-ethylhexyl）phthalate,DEHP）在青春期小鼠体内的代谢动力学,以300 mg/kg DEHP灌胃青春期小鼠,血清样品经固相萃取（solid phase extraction,SPE）提取和净化,气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）法测定不同时间点的血药质量浓度,以3p97软件拟合其动力学参数。DEHP在青春期小鼠体内的主要药物代谢动力学参数：药峰质量浓度ρmax为（0.476±0.028） μg/mL,达峰时间Tpeak为（2.539±0.424） h,药-时曲线下面积AUC（0-t）为（32.209±11.220） h•μg/mL,分布半衰期t1/2α为（1.886±0.480） h,消除半衰期t1/2β为（36.473±8.324） h。本方法简便快捷,其灵敏度和准确度均可满足青春期小鼠体内DEHP代谢动力学研究。DEHP在青春期小鼠体内药物代谢动力学过程符合一级吸收二室开放模型,其分布较快,代谢较慢。