杜氏盐藻β-胡萝卜素提取皂化工艺参数优化

以甲醇-丙酮(20∶80,V/V)为流动相,建立杜氏盐藻β-胡萝卜素HPLC-DAD检测方法。采用外标法定量,对杜氏盐藻β-胡萝卜素的提取皂化工艺参数进行优化。研究结果表明,所选6种溶剂中,95%乙醇的提取效果最好。对选取的杜氏盐藻粉皂化,使胡萝卜素的得率从0.350%提高到0.425%,提高了21.43%。优化提取的最佳工艺参数是:提取温度25℃、时间0.7 h、液固比200 m L/g。此条件下杜氏盐藻β-胡萝卜素得率为0.395%。皂化的最佳工艺参数是:皂化温度25℃、皂化时间2 h、KOH甲醇溶液质量浓度0.1 g/m L。采用此提取皂化工艺,杜氏盐藻β-胡萝卜素的最终得率为0.428%。     

培养条件对杜氏藻β-胡萝卜素含量的影响

为了优化杜氏藻的培养条件,对采自山西运城盐湖的杜氏藻（Dunaliella sp.）采用单因素和正交实验方法,研究了温度、盐度和氮、磷、铁元素对其细胞增殖和β-胡萝卜素积累的影响。结果显示杜氏藻的β-胡萝卜素含量与吸光度OD453nm之间存在良好的线性关系,利用吸光值表征杜氏藻β-胡萝卜素含量步骤简单,数据准确,适于高效快速对样品进行测定。杜氏藻在20²5℃,1.0².0mol/L Na Cl时,较有利于β-胡萝卜素积累。杜氏藻生长至对数期后,高浓度的氮源、磷源都不利于β-胡萝卜素的积累,而铁源在实验期间,对杜氏藻β-胡萝卜素的积累无影响。进一步优化,培养基中有利于β-胡萝卜素积累的Na NO3、KH2PO4和Fe C6H5O7的浓度最优组合为0.6200、0.0256、0.0010g/L。本实验得到了较适合杜氏藻积累β-胡萝卜素的培养基,为今后当地开发利用高产β-胡萝卜素藻株奠定了理论基础。      

超声波强化提取杜氏盐藻中β-胡萝卜素工艺的研究

对超声波强化提取杜氏盐藻中β-胡萝卜素的工艺进行了研究,以β-胡萝卜素的得率为评价指标,在单因素试验基础上,通过四因素三水平正交试验设计确定了提取温度、提取时间、超声波强化时间和液料比4个因素共同影响下,从杜氏盐藻中提取β-胡萝卜素的最优工艺条件,即液料比6∶1 (mL∶g),超声波强化时间70 s,提取温度20℃,提取时间为9 min.在上述提取条件下,β-胡萝卜素的得率可达到4.418％.     

工业生产β-胡萝卜素杜氏藻的分离及种属鉴定

杜氏藻（Dunaliella）是生产天然β-胡萝卜素的良好资源,受到世界各国的广泛关注。为了研究和改造其类胡萝卜素代谢途径,利用离心和抗生素筛选相结合的方法对7株生产β－胡萝卜素用的工业藻种进行了分离和纯化。rDNA凝胶电泳图显示,分离的7株藻种中,6株能扩增出0．9kb～1．7kb不等的单一条带,表明已分离到单一藻种。在此基础上测定了各藻种转录问隔区1（ITS1）序列,并建立了系统进化树。结果显示,其中3株属于D．viridis类,另3株为D．salina。同时对杜氏藻的生长、工业藻种的分离、D．viridis对生产β－胡萝卜素工业藻的污染及D．salina与D．bardawil分类等问题进行了讨论。     

工业产生β-胡萝卜素杜氏藻的分离及种属鉴定

杜氏藻(Dunaliella)是生产天然β-胡萝卜素的良好资源,受到世界各国的广泛关注.为了研究和改造其类胡萝卜素代谢途径,利用离心和抗生素筛选相结合的方法对7株生产β-胡萝卜素用的工业藻种进行了分离和纯化.rDNA凝胶电泳图显示,分离的7株藻种中,6株能扩增出0.9 kb～1.7 kb不等的单一条带,表明已分离到单一藻种.在此基础上测定了各藻种转录间隔区1(ITSI)序列,并建立了系统进化树.结果显示,其中3株属于D.viridis类,另3株为D.salina.同时对杜氏藻的生长、工业藻种的分离、D.viridis对生产β-胡萝卜素工业藻的污染及D.salina与D.bardawil分类等问题进行了讨论.     

碳源对盐生杜氏藻(Dunaliella salina)生长及其β-胡萝卜素积累的影响

研究了NaHCO(30,3,6,9,12,15mmol/L)对盐生杜氏藻生长和β-胡萝卜素积累的影响,结果表明,12mmol/L的NaHCO3对杜氏藻(D.salina),生长最合适,细胞最高密度为84.6×104cell/mL,对照组仅为36.7×104cell/mL;在实验范围内,β-胡萝卜素含量随NaHCO3浓度的升高而增加,15mmol/L组有最高的β-胡萝卜素含量104.6mg/g,对照组仅为60.8mg/g;叶绿素a最大含量135mg/g也出现在15mmol/L组,对照组为97mg/g;接种6d内藻液pH值急剧上升,后几天在波动中下降;接种前五天NaHCO3消耗很快,5d～10d消耗较慢,建立了NaHCO3吸收的动力学方程;较高的NaHCO3有利于细胞蛋白质的合成。     

盐生杜氏藻软胶囊中β,β-胡萝卜素几何异构体组成的测定

采用C30-HPLC-PDA-ELSD系统,参照已公布的全反式异构体的吸光系数(Al1%cm=2500),根据β,β-胡萝卜素顺式异相体电子吸收光谱峰面积与ELSD质量峰面积之比,估算出9-和13-顺式异构体的吸光系数分别为2018和1990.根据其色谱峰面积,可以准确测量出盐生杜氏藻软胶囊中β,β-胡萝卜素几何异构体的组成.     

培养基初始pH值和照射光波长对杜氏藻中类胡萝卜素含量的影响

研究杜氏藻在实验室培养过程中初始pH值和照射光波长对其体内类胡萝卜素（β-胡萝卜素和叶黄素）积累的影响。在实验中,配制不同初始pH值的培养基,用其培养105 d,测定培养液中藻细胞数和β-胡萝卜素及叶黄素的含量。用pH 7的培养基,在白光（全波）、红光（630 nm）和蓝光（430 nm）照射下培养藻40 d,测定培养液中藻细胞数和β-胡萝卜素、叶黄素的含量。结果表明：1）杜氏藻本身具有调节环境pH值向中性发生变化的能力。培养105 d后,不同初始pH值范围的培养液（pH 10～13、pH 1～3和pH 4～9）中藻养殖密度依次增加。初始pH 4时,培养液中藻细胞数量可达1 851 个/mL,达到最大值;初始pH值范围为7～9时,培养液中β-胡萝卜素（0.489～0.561 mg/mL）和叶黄素（0.610～0.700 mg/mL）积累量较高;初始pH值范围为11～13时,单个细胞内β-胡萝卜素（0.603～0.730 ng）和叶黄素（0.897～0.979 ng）积累量较高。2）杜氏藻养殖密度在全波光、红光（630 nm）和蓝光（430 nm）条件下均可增加。红光和蓝光均可诱导单个细胞中β-胡萝卜素和叶黄素积累量增加,蓝光效果最佳,单个细胞中叶黄素含量达到0.524 ng,β-胡萝卜素含量达到0.589 ng。     

β-胡萝卜素的研究进展

β-胡萝卜素是一种重要的天然色素和抗氧化剂,它在食品工业、医药保健、化妆品和动物饲料等行业都有广泛的应用.文章对B-胡萝卜素的功能、生产、提取与检测方法等国内外最新研究进展进行了论述.     

HPLC法快速测定强化奶粉中β-胡萝卜素

建立了一种基于液相的快速测定强化奶粉中β-胡萝卜素方法。样品用无水乙醇-水溶解,添加KOH溶液皂化,皂化完成后水洗,用正己烷与乙酸乙酯混合液萃取,使用流动相溶解后直接用于色谱测定。液相分离柱选取C18柱,通过对色谱分离条件进行优化。结果表明,最佳色谱分离条件确定为以甲醇-二氯甲烷比例为70∶30(V/V)为流动相;流速设置为1.0mL/min;采用PDA检测器,检测波长设为450nm。结果表明,此方法的三水平样品回收率(n=5)为98.50%~100.68%;重复实验结果,显示八次重复性实验的相对标准偏差(RSD)为0.42%;检测限(S/N=3)为5ng。     

Fe对两株盐生杜氏藻(Dunaliella salina)生长和β-胡萝卜素积累的影响

研究了柠檬酸铁对两株盐生杜氏藻Dunaliella salina OUN04和D.salina OUN09生长和色素积累的影响,结果表明,D.salina OUN04生长最适的Fe浓度为0.05mmol/L,细胞密度达111.5×104cell/mL,0.25mmol/LFe组最低(70×104cell/mL);最大β-胡萝卜素含量(83.2mg/g)出现在0.25mmol/LFe浓度组中;Fe浓度为0.25mmol/L时有最大的叶绿素a含量(98.4mg/g);建立了杜氏藻对Fe吸收的动力学方程。D.salina OUN09生长最适的Fe浓度为0.05mmol/L(密度131×104cell/mL),最大β-胡萝卜素含量为130.2mg/g(0.05mmol/LFe组),对照组仅为70.4mg/g。     

转基因大肠杆菌中β-胡萝卜素HPLC测定方法分析

采用高效液相色谱法(HPLC)测定转基因大肠杆菌中β-胡萝卜素的含量。转基因大肠杆菌通过液体发酵后冷冻干燥,以丙酮/环己烷(1/1)组成的溶剂提取β-胡萝卜素,HPLC的流动相为乙腈与四氢呋喃梯度洗脱系统时,样品中的β-胡萝卜素得到很好的分离。当β-胡萝卜素的进样量在0.7～2.1μg范围时,其进样量与峰面积之间有良好的线性关系(R2=0.9997)。验证结果表明,该方法测定结果准确,能用来测定转基因大肠杆菌中β-胡萝卜素的含量。     

室内养殖盐藻生产β-胡萝卜素的探讨

文章介绍了在室外养殖盐藻生产β-胡萝卡素.由于很大程度上受到季节的限制,从而进行了室内养殖盐藻生产β-胡萝卜素的探索.并提出因叶绿素的降解而不能再合成或合成缓慢,对β-胡萝卜素的积累是否有因果关系的问题.     

高效液相色谱法测定15种蔬菜中的β-胡萝卜素

应用高效液相色谱法测定国内常用的15种蔬菜中β-胡萝卜素含量。蔬菜中的β-胡萝卜素经超声提取,用Kromasil C18(4.6mm×300mm,5μm)色谱柱,甲醇-四氢呋喃(THF)-2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)(9:1:0.01,V/V)为流动相,紫外检测器检测,检测波长为4 4 8 n m。结果表明,β-胡萝卜素出峰时间短(21 m in),检出限低(0.075μg/mL),在1～50μg/mL质量浓度范围内线性关系良好(R2=0.9997),平均加标回收率达97.84%(n=5)。该方法可避免β-胡萝卜素在预处理过程中被氧化,重复性好、操作简便、结果可靠,可用于多种新鲜蔬菜中β-胡萝卜素含量的测定。     

反相高效液相色谱法测定果蔬中的β-胡萝卜素

从检测波长、流动相、柱温等方面优化了反相高效液相色谱测定果蔬中的β-胡萝卜素的色谱条件,并对方法的应用性进行了评价。用单因子实验方法优化得到的反相高效液相色谱分析果蔬中β-胡萝卜素的条件为:采用1:1 （V/V）丙酮-石油醚混合液直接提取,提取液减压蒸干后,用丙酮溶解,经NOVA-PAK（150mm×3.9mm,4μ, Waters）C18色谱柱,以乙腈-甲醇（20:80）为流动相进行洗脱,用2487紫外检测器在450nm下进行检测。在此条件下,β-胡萝卜素标准曲线的回归方程为Y=45739X- 19784,相关系数大于0.999,线性范围为0-50mg/L,最小检出限为0.10mg/L,加标样品回收率为91.7%-99.7%,变异系数CV（%）为4.4%-5.0%。该方法能简便、快速、准确地测定果蔬样品中的β-胡萝卜素。      

酶解水提法从胡萝卜中提取水溶性β-胡萝卜素

研究了酶法水解从胡萝卜中提取水溶性β-胡萝卜素的关键工艺参数。单因素实验结果表明,较优提取工艺条件为:取鲜胡萝卜50g,直接打浆后加入100mL 0.2g/100mL的吐温-80溶液,再加入1.5g纤维素酶和0.4g果胶酶,经超声波破碎40min后,调pH6.0,于40℃搅拌2h后加入2g硅藻土抽滤。响应面分析优化得到的较优提取条件为:果胶酶0.49g,酶解pH 6.08,超声波时间41.58min,优化后水溶性β-胡萝卜素提取率为12.23μg/g。     

反相高效液相色谱法测定果蔬中的β-胡萝卜素

从检测波长、流动相、柱温等方面优化了反相高效液相色谱测定果蔬中的β-胡萝卜素的色谱条件,并对方法的应用性进行了评价。用单因子实验方法优化得到的反相高效液相色谱分析果蔬中β-胡萝卜素的条件为:采用1:1 (V/V)丙酮-石油醚混合液直接提取,提取液减压蒸干后,用丙酮溶解,经NOVA-PAK(150mm×3.9mm,4μ, Waters)C18色谱柱,以乙腈-甲醇(20:80)为流动相进行洗脱,用2487紫外检测器在450nm下进行检测。在此条件下,β-胡萝卜素标准曲线的回归方程为Y=45739X- 19784,相关系数大于0.999,线性范围为0-50mg/L,最小检出限为0.10mg/L,加标样品回收率为91.7%-99.7%,变异系数CV(%)为4.4%-5.0%。该方法能简便、快速、准确地测定果蔬样品中的β-胡萝卜素。     

紫苏中叶黄素及β-胡萝卜素含量的测定

叶黄素是一种富集于眼睛视网膜黄斑区的黄色素,缺乏叶黄素会增加可致盲的老年性黄斑变性的患病风险;β-胡萝卜素作为维生素A的前体物质,被人体吸收后可转化维生素A营养眼睛。一年生草本植物紫苏是我国卫生部颁布的药食同源植物之一,为了确定紫苏中对视力有保护作用的叶黄素和β-胡萝卜素含量,在优化提取条件的前提下,采用高效液相方法分析了两个紫苏品种不同采收期叶黄素和β-胡萝卜素含量。结果表明添加了pH为7的15%醋酸三乙胺的乙醇为叶黄素的最佳提取溶剂,β-胡萝卜素的最佳提取溶剂为石油醚-丙酮(8∶2),叶黄素和β-胡萝卜素在紫苏叶中最高含量分别为740μg/g干重和543μg/g干重。     

反相高效液相色谱法测定秋葵干蔬中的β-胡萝卜素

建立了测定秋葵干蔬中β-胡萝卜素的高效液相色谱法。样品皂化后,采用反相高效液相色谱-紫外可见检测器进行测定,外标法定量。色谱柱为C18柱（250mm×4.6mm,i.d.5μm）,流动相为乙腈-甲醇-乙酸乙酯（88∶10∶2）,流速1mL/min,检测波长453nm。结果表明,β-胡萝卜素在0.1¹0.0mg/L浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.996;β-胡萝卜素的回收率为82.4%⁹4.0%,相对标准偏差（RSD）为2.28%⁵.43%;秋葵干蔬中β-胡萝卜素的检出限（LOD）为0.08mg/kg,定量下限（LOQ）为0.26mg/kg。本方法的准确度和精密度都很高,能够满足实际测定需要。      

高效液相色谱法测定保健食品中β-胡萝卜素

建立保健食品中β-胡萝卜素含量的测定方法。采用高效液相色谱法,色谱柱:岛津Inertsil C18(4.0 mm×75 mm,3μm),以甲醇∶乙腈=90∶10为流动相,流速1.0 m L/min。结果:β-胡萝卜素的浓度与峰面积线性关系良好(R2=0.999 81),平均回收率为99.4%,RSD=0.4%(n=9)。因此,高效液相色谱法可靠、灵敏、快速,可用于保健食品中β-胡萝卜素含量测定。