四川泡菜发酵原料-灯笼辣椒附生乳酸菌的抗生素耐药性评估与耐药基因分析

以四川泡菜蔬菜原料——新鲜灯笼辣椒为对象,分析其表面附生乳酸菌Enterococcus mundtii（5 株）、Enterococcus faecalis（2 株）、Enterococcus hirae（5 株）、Lactococcus lactis（7 株）、Leuconostocmesenteroides（2 株）、Leuconostoc holzapfelii（3 株）和Weissella cibaria（79 株）对青霉素（penicillin,PEN）、红霉素（erythromycin,ERY）、四环素（tetracycline,TET）、链霉素（streptomycin,STR）和氯霉素（chloramphenicol,CHL）的抗生素耐药性和耐药基因分布,为制定合理的食品安全防控措施提供科学依据。研究表明：所有分离菌株均无PEN和ERY耐药性,其他种属部分菌株对TET、STR和CHL表现出单一、二重或三重耐药性。除E. hirae、E. faecalis和L. holzapfelii部分菌株对STR表现出单一耐药性外,所有L. mesenteroide菌株只表现出了STR单一耐药性;STR和TET、STR和CHL二重耐药菌株在E. faecalis、E. hirae、L. lactis和W. cibaria分离菌株中都有发现,但是STR、TET、CHL三重耐药菌株仅在W. cibaria中发现。聚合酶链式反应检测发现：除基因norA、sepA、tet(A)、tet(O)和aac(6’)-aph(2’)未被检出外,其他耐药菌株都有相应1 个或多个耐药基因被检出。多重耐药外排泵基因efrA、tolC、norC、sugE和mdfA较核糖体蛋白质保护和酶修饰基因检出率高,分别达到了49%、41%、48%、41%和47%。虽然辣椒表面附生乳酸菌的抗生素耐药基因在四川泡菜发酵过程中的扩散行为需要进一步研究,但根据食品加工过程安全规范标准,也应关注其表面附生的乳酸菌抗生素耐药性存在的潜在食品安全问题。     

四川泡菜发酵原料-灯笼辣椒附生乳酸菌的抗生素耐药性评估与耐药基因分析（英文）

以四川泡菜蔬菜原料——新鲜灯笼辣椒为对象,分析其表面附生乳酸菌Enterococcus mundtii(5株)、Enterococcus faecalis(2株)、Enterococcus hirae(5株)、Lactococcus lactis(7株)、Leuconostoc mesenteroides(2株)、Leuconostoc holzapfelii(3株)和Weissella cibaria(79株)对青霉素(penicillin,PEN)、红霉素(erythromycin,ERY)、四环素(tetracycline,TET)、链霉素(streptomycin,STR)和氯霉素(chloramphenicol,CHL)的抗生素耐药性和耐药基因分布,为制定合理的食品安全防控措施提供科学依据。研究表明:所有分离菌株均无PEN和ERY耐药性,其他种属部分菌株对TET、STR和CHL表现出单一、二重或三重耐药性。除E.hirae、E.faecalis和L.holzapfelii部分菌株对STR表现出单一耐药性外,所有L.mesenteroide菌株只表现出了STR单一耐药性;STR和TET、STR和CHL二重耐药菌株在E.faecalis、E.hirae、L.lactis和W.cibaria分离菌株中都有发现,但是STR、TET、CHL三重耐药菌株仅在W.cibaria中发现。聚合酶链式反应检测发现:除基因nor A、sep A、tet(A)、tet(O)和aac(6’)-aph(2’)未被检出外,其他耐药菌株都有相应1个或多个耐药基因被检出。多重耐药外排泵基因efr A、tol C、nor C、sug E和mdf A较核糖体蛋白质保护和酶修饰基因检出率高,分别达到了49%、41%、48%、41%和47%。虽然辣椒表面附生乳酸菌的抗生素耐药基因在四川泡菜发酵过程中的扩散行为需要进一步研究,但根据食品加工过程安全规范标准,也应关注其表面附生的乳酸菌抗生素耐药性存在的潜在食品安全问题。     

发酵用鲜辣椒中乳酸菌抗生素耐药性与耐药基因

以四川泡菜发酵用的新鲜二荆条辣椒表面上附着的乳酸菌为研究对象,分析其对四环素(TET)、链霉素(STR)和红霉素(ERY)的耐药性与耐药基因。研究表明:用于发酵的鲜辣椒中,乳酸菌的含量约为2.18×104CFU/g,属于Weissella cibaria(61.93%)、Lactococcus lactis(16.06%)、Enterococcus mundtii(5.50%)、Enterococcus faecalis(3.67%)、Enterococcus hirae(3.67%)、Leuconostoc mesenteroides(6.88%)和Leuconostoc holzapfelii(2.29%)。所有218株分离株均无ERY耐药,但其中30株(13.76%)表现出TET和STR耐药,包括10株W.cibaria(4.59%)、2株Lac.lactis(0.92%)、1株E.mundtii(0.46%)、2株Leu.mesenteroide(0.92%)和1株Leu.holzapfelii(0.46%)STR耐药菌株,9株W.cibaria(4.12%)、2株Lac.lactis(0.92%)、1株E.faecalis(0.46%)和2株E.hirae(0.92%)TET和STR二重耐药菌株;除TET和STR二重耐药菌株W.cibaria CT024中未检出任何TET被检基因外,其它耐药株都有相应1个或多个被检基因被检出。其中,在5种STR被检耐药基因中,str B的检出率最高,达60.00%;aad6的检出率最低,为16.67%。11种TET被检耐药基因中,tet B和tet C的检出率最高,达到85.71%;tet Z的检出率最低,为7.14%。同时,同种内的不同菌株对STR或TET的耐药性高低与耐药基因的种类和数量多少无相关性。     

俄罗斯卡尔梅克共和国酸奶油中乳酸菌的多样性分析

俄罗斯卡尔梅克地区的传统发酵乳制品的制作具有悠久的历史,其中蕴含着丰富的乳酸菌资源。本研究对俄罗斯卡尔梅克共和国3个地区采集到的6份酸奶油进行了乳酸菌多样性分析。乳酸菌活菌计数结果显示6份酸奶油中乳酸菌数在7.30-8.62lg cfu/m L之间,采用MRS培养基从酸奶油中共分离到28株乳酸菌,经过采用16S r RNA基因序列分析将28株乳酸菌鉴定为4个属中的10个不同的种和亚种,包括:Lactobacillus brevis(1株)、Lb.paracasei(1株)、Lb.plantarum(5株)、Lactococcus lactis subsp.lactis(2株)、Lac.lactis subsp.cremoris(5株)、Leuconostoc citreum(1株)、Leu.lactis(3株)、Leu.mesenteroides(5株)、Leu.pseudomesenteroides(4株)和Streptococcus thermophilus(1株),其中Leuconostoc是酸奶油的优势菌属,占分离菌株总数的50%。     

四川泡豇豆原料表皮附生乳酸菌抗生素抗性及抗性基因污染分析

以鲜豇豆为研究对象,利用生理生化特征、16S r RNA、抗生素抗性和抗性基因检测分析其表皮附生乳酸菌对氯霉素(CHL)、四环素(TET)和氨苄青霉素(AMP)的抗性与抗性基因。结果表明:从鲜豇豆表皮共分离得到182株乳酸菌,分别属于Weissella confuse(50.0%)、Weissella cibaria(15.4%)、Enterococcus sulfurous(7.1%)和Lactococcus lactis subsp.lactis(27.5%)。32株(17.6%)乳酸菌对CHL和TET有抗性,其中,6株W.confuse(3.3%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL单一抗性,4株W.confuse(2.1%)和5株L.lactis subsp.Lactis(2.7%)对TET单一抗性,6株W.confuse(3.2%)、2株W.cibaria(1.1%)、1株E.sulfurous(0.5%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL和TET二重抗性;编码外排泵基因efr A、efr B、nor B、nor C、nor E和sug E中,efr B的检出率最高,达31.3%,efr B和sug E的检出率最低,为3.1%。TET被检抗性基因tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(H)和tet(L)中,tet(C)的检出率最高,达90.9%,tet(B)的检出率最低,为4.5%。     

蔬菜发酵菌种的筛选及发酵特性

为了选择适合蔬菜发酵的发酵菌种,本研究从四川泡菜老汤中分离的6 种乳酸菌Lactobacillus plantarum、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus brevi、Lactobacillus pentosus、Leuconostoc mesenteroides、Lactobacillus lactics筛选发酵菌种。6 种乳酸菌接入亚硝酸盐的MRS培养液中,6 种乳酸菌还原亚硝酸盐的大小顺序为Lactobacilluspentosus＞Lactobacillus plantarum＞Leuconostoc mesenteroides＞Lactobacillus fermentum＞Lactobacillus lactics＞Lactobacillus brevis。以pH值降低的速率为发酵速率,Lactobacillus plantarum、Lactobacillus pentosus、Leuconostocmesenteroides这3 种发酵剂的发酵速率较其他3 种快,并且通过乳酸菌的全细胞蛋白电泳实验得出此3 种乳酸菌在甘蓝发酵过程中能够成为优势菌。从乳酸菌还原亚硝酸盐的能力、发酵速率、发酵菌种的生存能力（是否能成为优势菌）的实验结果表明Lactobacillus plantarum、Lactobacillus pentosus、Leuconostoc mesenteroides这3 种乳酸菌作为蔬菜发酵的发酵剂。通过对3 种发酵菌种发酵特性的研究可知,Leuconostoc mesenteroides较另两种生长周期短,稳定期维持时间短,很快进入衰退期。Lactobacillus plantarum菌较Lactobacillus pentosus、Leuconostoc mesenteroides耐酸,Leuconostoc mesenteroides对酸敏感。Leuconostoc mesenteroides最适生长温度为30 ℃,Lactobacillus plantarum、Lactobacillus plantarum两种菌的最适生长温度是37 ℃。15 ℃条件下Leuconostoc mesenteroides的光密度（OD600 nm）值很低,说明Leuconostoc mesenteroides较Lactobacillus plantarum、Lactobacillus pentosus对低温敏感。     

四川泡豇豆原料表皮附生乳酸菌抗生素抗性及抗性基因污染分析

以鲜豇豆为研究对象,利用生理生化特征、16S r RNA、抗生素抗性和抗性基因检测分析其表皮附生乳酸菌对氯霉素(CHL)、四环素(TET)和氨苄青霉素(AMP)的抗性与抗性基因。结果表明:从鲜豇豆表皮共分离得到182株乳酸菌,分别属于Weissella confuse(50.0%)、Weissella cibaria(15.4%)、Enterococcus sulfurous(7.1%)和Lactococcus lactis subsp.lactis(27.5%)。32株(17.6%)乳酸菌对CHL和TET有抗性,其中,6株W.confuse(3.3%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL单一抗性,4株W.confuse(2.1%)和5株L.lactis subsp.Lactis(2.7%)对TET单一抗性,6株W.confuse(3.2%)、2株W.cibaria(1.1%)、1株E.sulfurous(0.5%)和4株L.lactis subsp.Lactis(2.1%)对CHL和TET二重抗性;编码外排泵基因efr A、efr B、nor B、nor C、nor E和sug E中,efr B的检出率最高,达31.3%,efr B和sug E的检出率最低,为3.1%。TET被检抗性基因tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(H)和tet(L)中,tet(C)的检出率最高,达90.9%,tet(B)的检出率最低,为4.5%。      

传统发酵牦牛酸乳中高产胞外多糖乳酸菌的筛选与鉴定

目的:以四川红原、西藏羊八井地区传统牦牛酸乳中分离出的57株乳酸菌作为实验菌种,筛选出高产胞外多糖乳酸菌。方法:通过菌落拉丝法、硫酸-苯酚法的测定。结果:实验菌株胞外多糖产量在19.95⁹1.08μg/m L之间,其中菌株代号为32-2、67-1、41-1和27的胞外多糖产量较高,分别为91.08、89.76、87.22、87.40μg/m L。通过16S r DNA序列同源性鉴定表明代号32-2菌株鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）、代号67-1菌株为肠膜明串株菌肠膜亚种（Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides）、代号41-1菌株为干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、代号27菌株为肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）。结论:为研究具有提高酸乳品质能力的发酵菌株提供依据。      

不同来源酒曲酿制米酒中乳酸菌的分离与鉴定

为了研究湖北孝感和四川成都地区米酒曲中乳酸菌的多样性,该研究利用孝感凤窝米酒曲和成都农家自制米酒曲制作米酒, 并采用改良MRS固体培养基和分子生物学技术对米酒中的乳酸菌进行分离、鉴定。结果表明,从孝感米酒中共分离出42株乳酸菌,隶属于7个种,分别为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）、融合魏斯氏乳酸菌（Weissella confusa）、植物乳杆菌（Lactobacillus plan- tarum）、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）、能动乳杆菌（Lactobacillus agilis）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）和乳酸乳球菌（Lac- tococcus lactis）;从成都米酒中共分离出35株乳酸菌,隶属于7个种,分别为P. pentosaceus、W. confusa、L. plantarum、E. faecium、食窦魏 斯氏乳酸菌（Weissella cibaria）、约汉逊氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）和短乳杆菌（Lactobacillus brevis）。两种米酒中分离出的相同菌种为P. pentosaceus、W. confusa、L. plantarum和E. faecium。其中,P. pentosaceus为两种米酒的优势菌株。     

西藏曲拉中优良乳酸菌的筛选与评价

西藏曲拉是西藏传统民族乳制品的典型代表,具有蛋白质含量高、贮藏时间长等优点,在我国众多传统乳制品中独具特色。研究利用MRS培养基对曲拉样品中的微生物进行了分离纯化,筛选得到42株乳酸菌,经16S rDNA鉴定,得到肠膜明串珠（L.mesenteroides）11株、假肠膜明串珠菌（L.pseudomesenteroides）5株、肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种（L.mesenteroides subsp.dextranicum）4株、粪肠球菌（E.faecalis）10株,植物乳杆菌（L.plantarum）4株、乳酸片球菌（P.acidilactici）4株、布氏乳杆菌（L.buchneri）2株、类肠膜魏斯氏菌（W.paramesenteroides）2株;经过发酵试验与耐受性试验、抑菌性试验,筛选出3株具有优良特性的乳酸菌,本研究筛选的乳酸菌可应用于乳制品的生产。     

Monitoring the lactic acid bacterial diversity during shochu fermentation by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis

The presence of lactic acid bacteria (LAB) during shochu fermentation was monitored by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and by bacteriological culturing. No LAB were detected from fermented mashes by PCR-DGGE using a universal bacterial PCR primer set. However, PCR-DGGE using a new primer specific for the 16S rDNA of Lactococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Enterococcus, and Vagococcus and two primers specific for the 16S rDNA of Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostoc, and Weissella revealed that Enterococcus faecium, Lactobacillus casei, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus nagelii, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Leuconostoc citreum, Leuconostoc mesenteroides, and Weissella cibaria inhabited in shochu mashes. It was also found that the LAB community composition during shochu fermentation changed after the main ingredient and water were added during the fermentation process. Therefore, we confirmed that PCR-DGGE using all three primers specific for groups of LAB together was well suited to the study of the LAB diversity in shochu mashes. The results of DGGE profiles were similar to the results of bacteriological culturing. In conclusion, LAB are present during shochu fermentation but not dominant.     

羊羔美酒大曲中乳酸菌多样性及分子鉴定

目的：分离和鉴定羊羔美酒大曲中的乳酸菌,探寻其菌群多样性,为酿酒工艺条件改进提供参考。方法：将酒曲进行梯度稀释、富集培养、平板画线等分离纯化,获取乳酸菌单菌落。采用菌落特征和个体形态特征结合的方法进行乳酸菌形态鉴定。乳酸菌的分子鉴定采用重复序列聚合酶链式反应（repetitive sequence-basedpolymerase chain reaction,Rep-PCR）技术和16S rDNA序列分析法。结果：从羊羔美酒大曲中共得到65 株乳酸菌,形态学分为9 类。用Rep-PCR技术在75%的相似性上将其区分为5 类,经基因序列分析,鉴定为分属于4 个属的乳酸菌,分别为：片球菌属（Pediococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）、乳杆菌属（Lactobacillus）、肠球菌属（Enterococcus）。结论：传统微生物分离技术与现代分子鉴定技术相结合,可快速准确鉴定出羊羔美酒大曲中乳酸菌的菌群组成和多样性。     

眉山泡菜中乳酸菌的分离鉴定

目的：分析眉山泡菜的基本数据和乳酸菌的菌种构成。方法：从眉山市采集泡菜12 份,测定pH值、总酸度、盐度、乳酸菌计数,用16S rRNA序列分析法鉴定菌种。结果：样品pH值的范围是3.37～3.89,总酸度的范围是0.65～0.92 g/100 g（以乳酸计）,盐度的范围是4.16%～5.28%（以NaCl计）,MRS和M17乳酸菌计数分别是1.71～6.33、1.33～5.78（lg（CFU/g））。总酸度对乳酸菌计数影响最大。共分离鉴定出16 株乳酸菌：Lactobacillus fermentum（2 株）、Lactobacillus plantarum（3 株）、Lactobacillus brevis（2 株）、Lactobacillusacidophilus（1 株）、Lactobacillus casei（1 株）、Lactobacillus pentosus（1 株）、Lactobacillus delbrueckii（1 株）、Lactococcus lactis（3 株）、Pediococcus pentosaceus（2 株）。结论：眉山泡菜中乳酸菌存在多样性,实验结果为工业发酵生产泡菜积累了菌株。     

Phenotypic and genotypic identification of lactic acid bacteria isolated from ethnic fermented bamboo tender shoots of North East India

Mesu, soidon, soibum and soijim are ethnic fermented bamboo tender shoot products prepared by the people in North East India. Microbiological analysis of mesu, soidon, soibum and soijim showed the population dominated by lactic acid bacteria (LAB) ranging up to 10(8) cfu g(-1). The phenotypic characterisation of predominant LAB isolated from the fermented bamboo shoot products was based on general morphology, physiological tests, API and Biolog systems. The genotypic characterisation of LAB was based on RAPD-PCR, rep PCR, species-specific PCR techniques, 16S rRNA gene sequencing and DNA-DNA hybridisation. Predominant functional LAB strains associated with the fermented bamboo shoot products were identified as Lactobacillus brevis, Lb. plantarum, Lb. curvatus, Pediococcus pentosaceus, Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides, Leuc. fallax, Leuc. lactis, Leuc. citreum and Enterococcus durans.     

假肠膜明串珠菌甘露醇脱氢酶基因的克隆及表达

利用聚合酶链式反应从假肠膜明串珠菌中扩增出甘露醇脱氢酶（mannitol dehydrogenase,MDA）基因的结构基因,克隆入表达载体pETDuet-1,构建了甘露醇脱氢酶表达质粒pETDuet-1-mdh,将其转化进入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达。假肠膜明串珠菌甘露醇脱氢酶结构基因长度为1 017 bp,重组甘露醇脱氢酶基因在大肠杆菌内成功表达,其蛋白质分子质量为36.0 kD;重组甘露醇脱氢酶活力为0.15 U/mg pro,高于假肠膜明串珠菌中甘露醇脱氢酶活力0.03 U/mg pro。     

煎饼发酵面糊中优势菌种的筛选与鉴定

对煎饼发酵面糊中的优势菌种进行富集培养和划线分离,通过菌落形态、颜色、大小等进行初筛,通过生理生化实验、耐受性实验等进行复筛,采用VITEC-2 Compact微生物鉴定仪对其进行初步鉴定。结果表明：从煎饼发酵面糊中分离筛选得到的9 株乳酸菌和11 株酵母菌中,乳酸菌R2、R8和酵母菌Y8发酵性能良好,经鉴定R2为肠膜明串珠菌、R8为戊糖片球菌、Y8为酿酒酵母,可以作为煎饼专用复合发酵剂用菌。     

小米发糕发酵剂中乳酸菌的筛选及其在小米发糕中的应用

以5种小米品种为研究对象,通过自然发酵法制备小米发糕发酵剂,测定菌落总数、感官评定发糕品质,获得品质差异较大的2种发酵剂,并对其中的乳酸菌进行分离、纯化,通过形态学、生理生化和测序进行鉴定。且研究了乳酸菌对小米发糕含水量、pH、TTA值、糖度和感官品质的影响。结果表明,乳酸菌的计数结果分别为6.48×10~7～8.57×10~9 cfu/g,1号(长农35)制备的小米发糕品质最好,6号(长谷4号)反之。2种发酵剂中鉴定出乳酸菌包括食窦魏斯氏菌(11株)、魏斯氏菌属(18株)和柠檬明串珠菌(4株),其中优势菌为魏斯氏菌属。乳酸菌LA6-40发酵制备的小米发糕含水量39.74%、pH 6.20、TTA值5.3、还原糖含量2.27 g/100 g,感官评分77.1分,色泽金黄、口感细腻、酸甜适中、咬劲适度、弹性良好,是较为适合小米发糕制备的乳酸菌菌株。     

Autoinducer-2-like activity in lactic acid bacteria isolated from minced beef packaged under modified atmospheres

Fifteen fingerprints (assigned to Leuconostoc spp., Leuconostoc mesenteroides, Weissella viridescens, Leuconostoc citreum, and Lactobacillus sakei) of 89 lactic acid bacteria (LAB) isolated from minced beef stored under modified atmospheres at various temperatures were screened for their ability to exhibit autoinducer-2 (AI-2)-like activity under certain growth conditions. Cellfree meat extracts (CFME) were collected at the same time as the LAB isolates and tested for the presence of AI-2-like molecules. All bioassays were conducted using the Vibrio harveyi BAA-1117 (sensor 1(-), sensor 2(+)) biosensor strain. The possible inhibitory effect of meat extracts on the activity of the biosensor strain was also evaluated. AI-2-like activity was observed for Leuconostoc spp. isolates, but none of the L. sakei strains produced detectable AI-2-like activity. The AI-2-like activity was evident mainly associated with the Leuconostoc sp. B 233 strain, which was the dominant isolate recovered from storage at 10 and 15°C and at the initial and middle stages of storage at chill temperatures (0 and 5°C). The tested CFME samples displayed low AI-2-like activity and inhibited AI-2 activity regardless of the indigenous bacterial populations. The LAB isolated during meat spoilage exhibited AI-2-like activity, whereas the LAB strains retrieved depended on storage time and temperature. The production of AI-2-like molecules may affect the dominance of different bacterial strains during storage. The results provide a basis for further research concerning the effect of storage temperature on the expression of genes encoding AI-2 activity and on the diversity of the ephemeral bacterial population.