浓香型白酒酒醅中总RNA提取方法评价

为探寻我国特有的复杂微生态环境——浓香型酒醅样品总RNA提取方法,本实验建立了一种改良的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)-苯酚法,并从提取成本及耗时、RNA质量浓度和纯度、电泳结果、反转录效果及高通量测序分析5 个方面,比较其与试剂盒法、Trizol法、十六烷基三甲基溴化铵(hex...     

不同方法提取酿酒酵母总RNA的比较

选择试剂盒法、总核糖核酸（RNA）提取试剂（Trizol）法、热酚法3种方法提取酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）总RNA,根据提取效果,选用酵母破壁酶辅助破壁并进行不同菌体量优化,通过对总RNA进行浓度和纯度的分析,比较不同方法对酿酒酵母总RNA提取的影响。结果表明,试剂盒法和Trizol法不适合提取酿酒酵母总RNA,但通过添加酵母破壁酶,可以提高提取效果。热酚法适合提取酿酒酵母总RNA,但添加酵母破壁酶反而会导致RNA降解。因此,使用热酚法提取酿酒酵母总RNA是较为有效且简便的方法。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量。方法用酚-氯仿法、改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量。结果改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带。结论改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法。     

燕窝DNA提取方法比较

为建立不同燕窝样品有效DNA提取方法,分别用试剂盒法、改良CTAB裂解法以及改良试剂盒法提取燕窝总DNA,进行浓度纯度检测,并以此为模版,进行PCR扩增及凝胶电泳。结果表明,改良试剂盒法扩增结果条带明亮,信号较强,较改良CTAB裂解液法与试剂盒法,更适于燕窝样品DNA提取,可用于PCR模版DNA制备,为进一步鉴定燕窝真伪提供参考。     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取；基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取；基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取，该法提取的鲜叶DNA完整性最佳，更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

绿豆总RNA的分离及环氧水解酶基因的克隆

目的研究分离绿豆总RNA的方法,并从中克隆环氧水解酶基因。方法采用UNIQ-10柱式法、Trizol法和改良Trizol法等3种方法分离绿豆种子、胚芽和豆芽总RNA,鉴定RNA的产率、纯度及完整性,根据环氧水解酶的保守序列扩增绿豆环氧水解酶基因。结果 UNIQ-10柱式法分离的RNA降解,Trizol法获得的RNA有杂质污染,改良Trizol法得到的RNA产率、纯度及完整性最好;RT-PCR后仅从绿豆胚芽中成功扩增到环氧水解酶基因保守序列。结论改良Trizol法简便易行,能有效地去除多糖、多酚等次生物质的干扰,最适于绿豆胚芽总RNA的分离。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的 研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量.方法 用酚-氯仿法、改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量.结果 改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带.结论 改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法.     

腐乳中菌群基因组DNA提取方法的对比研究

为更好研究腐乳中微生物菌群的多样性，采用改良十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和玻璃珠法对腐乳中的微生物进行非培养方式的基因组DNA提取，并将提取产物进行高通量测序分析。结果显示，在基因组DNA提取浓度方面，玻璃珠法和改良CTAB法均能得到一定量的基因组DNA，且均可得到扩增条带，但玻璃珠法拖尾严重。借助高通量测序方法检测，两种提取方法得到的样品基因组DNA在文库中的序列基本都能够被测出，在门和属水平上菌群结构相差不大。综上，改良CTAB法更适合大批量样品进行非培养方式的基因组DNA提取，该方法提取得到的基因组DNA浓度高且不影响后续实验。     

白粿干模拟转基因样品前处理与荧光PCR检测体系的优化

为提高米制品中转基因成分实时荧光聚合酶链式反应检测的灵敏度与检出率,应用模拟转基因白粿干样 品,对影响检测结果的主要因素,包括样品颗粒细度、DNA提取过程中样品在十六烷基三甲基溴化铵裂解缓冲液中 温育时间等因素进行优化。结果表明：提取的DNA量在样品颗粒细度与十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间的9 种 处理组合间都有极显著差异,其中最优条件为样品颗粒细度＞100 目、十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间＞8 h （过夜）。采用最优前处理组合,样品的主要转基因成分检出限从公认的转基因含量0.01%（m/m）降到0.001%（m/m）, 检测灵敏度提高10 倍,有效提高了米制品转基因成分检测结果的准确性。     

植物源食品DNA制备方法的比较研究

目的：探索可用作PCR方法检测和鉴定植物源转基因食品模板的DNA抽提方法。方法：分别用改良CTAB法、SDS法制备黄豆、玉米、土豆和番茄及其加工产品的DNA，PCR扩增叶绿体基因片段及黄豆、玉米的内参照基因lectin和zein10。结果：改良CTAB法所得DNA作为PCR扩增模板，叶绿体基因片段及lectin和zein10均呈阳性，SDS法所得DNA作为模板时，部分样品内参照基因lectin或zein10扩增阴性。结论：PCR方法检测转基因食品时，应用改良CTAB法制备DNA模板。     

DNA extraction method using a silica-base resin type kit for the detection of genetically modified papaya

Genetically modified (GM) papaya has not yet been approved for importation into, or cultivation in the European Union (EU) and Japan. A DNA extraction method using the Qiagen DNeasy Plant Mini Kit (PM method) and a method using a buffer containing cetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB method) have been adopted as the official Japanese methods for detecting GM foods. However, the amounts of DNA extracted from papaya by these methods are very low. Therefore, we investigated an extraction method to obtain a high yield of DNA from raw or freeze-dried fresh papaya using the Promega Wizard DNA Clean-Up Resin System (WCR). The incubation for the extraction was carried out at 58 degrees C without proteinase K for 15 min. The extract was applied to a mini-column, then the column was washed with 80% isopropyl alcohol, and genomic DNA adsorbed on the column was eluted with TE buffer. The WCR method gave a higher yield of genomic DNA, and was simpler and faster than the PM method or CTAB method. In addition, it could be used to extract genomic DNA from fresh papaya at various stages of ripeness. Based on these results, we propose that the present method using WCR is the most practical and useful way to extract genomic DNA for the purpose of detecting GM papaya.     

响应面试验优化复合酶法提取青蛇果多酚工艺及其抗氧化活性

以高酸度苹果、富含原花青素的青蛇果为原料,采用单因素试验和Box-Behnken试验设计优化了复合酶辅助提取青蛇果多酚的工艺参数。结果表明：最适多酚提取的复合酶为纤维素酶和果胶酶（质量比2∶1）、酶解温度62.5 ℃、提取时间82.9 min、pH 3.7,多酚得率最高可达5.07%。统计学分析显示,所选响应面模型合适,并能广泛用于青蛇果多酚的分析和预测。同时,酶法辅助提取青蛇果多酚的粗提物还具有较好的Fe3＋还原能力和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力,其对DPPH自由基的半数抑制浓度（IC50值）为22.72 μg/mL,可以作为一种良好的食品添加剂和抗氧化剂深度开发利用。     

肉制品中志贺氏菌DNA的快速提取方法

肉制品中致病菌DNA的提取对PCR检测具有重要意义。以污染志贺氏菌的猪肉为材料,比较了沸水浴法、裂解液煮沸法、CTAB/SDS法、改良的碱性异硫氰酸胍法4种提取方法对志贺氏菌DNA的提取效果,并以提取的DNA为模板进行PCR检测。结果表明:改良的碱性异硫氰酸胍法提取志贺氏菌DNA的效果较好,猪肉中志贺氏菌的PCR最低检出限为5×100CFU/g,整个检测时间<8h。经改良的碱性异硫氰酸胍法操作简便、经济省时,可用于肉类的PCR检测。     

富含岩藻糖苹果皮果胶的提取与理化性质

以超声辅助柠檬酸提取法从苹果皮中提取苹果果胶,并对所提取苹果皮果胶进行理化性质测定和分析。在最佳提取条件下（pH 2.5柠檬酸,450 W超声30 min）,苹果皮果胶得率为14.6%。理化性质分析表明：所得苹果皮果胶的酯化度为69.9%、糖醛酸含量为58.5%、总糖含量为92.8%,分子质量大于400 kD。气相色谱法分析表明：该方法提取的苹果皮果胶由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸及半乳糖醛酸8 种单糖组成,单糖组成的物质的量比为9.5∶19.2∶4.6∶0.1∶4.6∶3.6∶2.3∶56.3,岩藻糖含量高达19.2%。而超声法、盐酸法提取的苹果皮果胶中未检测到岩藻糖。进一步研究表明：富含岩藻糖的苹果皮果胶的提取与柠檬酸作萃取剂有一定关系。