黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

本研究以黄粉虫为试材,采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽,并对其进行分离纯化,比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性、热稳定性及分子量。结果表明:大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到5个组分,抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强。采用制备型HPLC对无水乙醇洗脱组分进一步纯化,得到两个组分(H-1,H-2),其中组分H-2对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性,且其最小抑菌浓度(MIC)为0.512 mg/m L。热稳定性试验表明,H-2具有较好的热稳定性,121℃加热20 min仍能保持较高活性。液质联用(LC-MS)结果表明,H-2的分子量为756.82u。本研究为黄粉虫抗菌肽的高效分离和纯化提供了科学依据,为黄粉虫抗菌肽在食品防腐中的应用提供了基础数据。     

抗菌肽BuforinⅡ衍生物的生物活性研究

研究了抗菌肽BF2-A/B的抗菌活性及其他的生物活性。两个肽均具有很强的广谱抗菌活性,BF2-B对细菌的抑菌活性比BF2-A强,它们没有体外溶血活性。BF2-A几乎没有细胞毒性,而BF2-B在100μg/mL时,能抑制大约20%的肿瘤细胞生长。两个肽均能结合脂多糖,中和内毒素,BF2-B与脂多糖的亲和结合力比BF2-A强。BF2-A/B经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抗菌活力都略有下降,而经蛋白酶K处理一段时间后,就完全丧失了抗菌活性。     

大头金蝇幼虫抗菌肽提取纯化及抑菌活性研究

目的:从大头金蝇幼虫中分离纯化天然抗菌肽,并检测抗菌肽的抑菌活性。方法:提取大头金蝇幼虫抗菌肽,粗提物经凝胶过滤色谱、阳离子交换树脂、反相色谱纯化,纯化产物检测其抑菌活性并利用GFC-HPLC测定其分子量。结果:最终纯化出一个活性组分,该组分对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为20.40μg/m L,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2.04 mg/m L,对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.17 mg/m L;该活性组分分子量大小为2570 u。结论:该抗菌肽组分对铜绿假单胞菌有较强抑菌活性,有较好的开发利用价值。     

丰年虫水溶性蛋白的分离纯化及体外抗氧化性研究

目的:对丰年虫水溶性蛋白进行分离纯化,获得体外抗氧化活性最好的水溶性蛋白组分,并测定其分子质量。方法:丰年虫水溶性粗蛋白经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析分离纯化,对纯化后的蛋白质进行体外抗氧化活性的研究,利用SDS-PAGE电泳测定蛋白质分子质量。结果:丰年虫水溶性蛋白经DEAE-Sepharose FF离子交换层析,梯度洗脱得到4个洗脱峰(峰1～4),峰2的体外抗氧化活性最强。峰2经Sephadex G-100凝胶层析分离纯化得到3个洗脱峰(峰2-1～2-3),峰2-1的体外抗氧化活性最强。利用SDS-PAGE对峰2-1进行鉴定,得到单一蛋白条带,纯度较高,蛋白分子质量为82.47kD。体外抗氧化活性比较,峰2-1远远强于水溶性粗蛋白。结论:蛋白组分峰2-1体外抗氧化活性最强,为单一蛋白组分,其分子质量为82.47kD。     

中国林蛙(Rana chensinensis)蛙皮抗菌肽的制备及抗菌作用研究

目的从中国林蛙的皮肤中，提取纯化具有抗菌活性的多肽物质，并对其进行抑菌活性的研究。方法用甲醇进行粗提取。对提取的甲醇浓度、甲醇用量、浸提时间和浸提次数，采用L9（3^4）正交实验，以蛋白含量作为指标，确定最佳提取条件。得到的粗提物经Sephadex G-75、Sephadex G～50和Sephadex G-25凝胶过滤进一步分离纯化获得抗菌肽。对抗菌肽进行氨基酸组成分析，采用杯碟法进行抑菌活性研究。结果提取林蛙抗菌肽的最佳工艺条件：甲醇浓度80％、甲醇体积为蛙皮重量的6倍、提取时间24h，提取次数3次。提取的粗提物经凝胶过滤后得到抗菌肽。抗菌肽的氨基酸组成中，碱性氨基酸占22．1％。酸性氨基酸占13．9％。抗菌肽对细菌的最低抑菌浓度分别为：枯草杆菌73．25μg/ml，金黄色葡萄球菌51．75μg/ml,大肠杆菌51．75μg/ml，铜绿假单胞菌51．75μg/ml。结论经甲醇提取和凝胶过滤可从中国林蛙皮肤得到抗菌肽。该抗菌肽为碱性多肽，对革兰阳性细菌、革兰阴性细菌均有抑制作用。     

鲫鱼鱼鳞抗菌多肽的制备纯化及其抑菌活性

以鲫鱼鱼鳞为原料,对其预处理后采用柠檬酸浸提酶解等工艺得到鱼鳞抗菌多肽粗酶解液,经透析后,再依次经Sephadex G-15、Sephadex G-50凝胶过滤层析和纤维素DEAE-52阴离子交换层析对其进行分离纯化,最后得到具有较强抑菌活性的鲫鱼鱼鳞抗菌多肽,并对其进行分子质量分析以及对多种细菌、霉菌的抑菌活性和最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）测定。结果表明：经分离纯化后得到的具有抑菌活性的蛋白组分AcIII,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为单一条带,表明其已达到电泳级纯,其分子质量约为20.1 kDa,抑菌活性测定结果表明鲫鱼鱼鳞抗菌多肽具有很好的广谱抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、副溶血性弧菌、假单胞菌和希瓦氏菌的MIC为16 μg/mL,对大肠杆菌和沙门氏菌的MIC为32 μg/mL。     

核桃谷蛋白抗菌肽的分离纯化及抑菌稳定性分析

目的：以核桃粕谷蛋白为原料生产抗菌肽,研发一种新型抗生素的替代品。方法：通过菌酶协同固态发酵法（枯草芽孢杆菌和碱性蛋白酶协同）从核桃粕谷蛋白中制备抗菌肽,通过超滤、凝胶层析过滤、液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）和分子对接对核桃粕谷蛋白抗菌肽（walnut glutelin antimicrobialpeptide,WGP）进行分离、纯化和筛选。以对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌性保持率为指标,研究抗菌肽的抑菌稳定性。结果：经超滤、凝胶层析分离后,WGP-ⅢA和WGP-ⅢC组分均具有较强抗菌活性;LC-MS/MS结合虚拟筛选,从2种组分中共鉴定得到6条多肽,分子对接筛选得到3个肽段,分别为WGP-ⅢA组分的LAEAYNIPDTIARRL和WGP-ⅢC组分的SHSVIYVIR、APQLLYIVK;分子对接结果显示,WGP-ⅢC组分的抑菌活性更强;抑菌稳定性分析表明,核桃谷蛋白抗菌肽在高温热处理、紫外线、不同pH值下和不同蛋白酶处理后均表现出较好的稳定性。结论：核桃粕谷蛋白抗菌肽在食品抑菌防腐...     

海洋链霉菌GB-2抗细菌物质的溶解性质和分离纯化

本实验主要对海洋链霉菌株GB-2产生的抗菌物质的溶解性进行了研究,并将其分离纯化.通过对GB-2的发酵液中抗菌物质的溶解性测定,可推知是一种极性较大的水溶性物质.超滤实验发现,抗细菌组分能通过截留分子量(COMW)≤1kD的超滤膜.Sephadcx LH-20色谱柱分离后,经抗菌活性检测发现两个活性峰,其中第1个峰对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性最强.将第1个峰的收集液进一步用高效液相色谱(HPLC)纯化,在图谱上出现两个峰,其中第2个峰具有抑菌活性,表明该物质得到了纯化.     

青刺果抗菌肽组分的分离及其稳定性分析

旨在高值化利用青刺果榨油后副产物青刺果粕中的蛋白质，以青刺果粕为原料，提取青刺果蛋白并制备蛋白酶解物，采用活菌吸附法联合反相高效液相色谱（RP-HPLC）从蛋白酶解物中筛选出抗菌肽组分，评价其抑菌活性，并对抑菌活性最好的组分进行稳定性分析。结果表明：筛选出的3个抗菌肽组分（F1、F2和F3）中，F2组分抑菌活性最好，当其质量浓度为10 mg/mL时对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性分别达到45.5%和39.1%；抗菌肽组分F2抑菌活性随温度升高和盐溶液浓度增加均降低，最适pH为6.0，在酸性环境中极不稳定，对酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性均较差，对中性蛋白酶耐受性较好。综上，青刺果粕中的蛋白酶解物具有抑菌活性，具有开发青刺果抗菌肽的潜力。     

抗菌肽的研究进展及在食品中的应用

抗菌肽是由氨基酸组成的多肽类物质,对细菌、真菌、病毒、原虫等具有广泛抑菌作用。抗菌肽具有高效、广谱的抗菌活性,在食品领域具有良好的应用前景。文章概述了抗菌肽的抗菌机制、分类、基因工程表达及在食品中的应用,并分析了抗菌肽研究过程中存在的问题。     

牦牛酸奶中一株具有抗氧化活性乳酸菌的分离及鉴定

本研究旨在从传统发酵牦牛酸奶中筛选获得具有抗氧化活性的乳酸菌。采用平板计数法对牦牛酸奶样品进行总菌与乳酸菌的菌落计数,采用添加2.5% CaCO₃的M17固体培养基进行乳酸菌的分离筛选,对筛选出的菌株采用16S rDNA基因克隆测序进行分子鉴定以及产酸、糖醇发酵试验,通过测定菌株培养上清液、菌体裂解液和菌体PBS重悬液的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力和羟自由基清除能力,评价乳酸菌的抗氧化活性。结果表明,分离出的革兰氏阳性球形菌株X1具备产酸特性,糖醇发酵实验表现为屎肠球菌生化反应特征,16S rDNA克隆测序鉴定菌株X1为屎肠球菌。体外抗氧化活性检测发现,菌株X1培养上清液的总抗氧化能力与DPPH自由基清除率显著高于对应的菌体裂解液和菌体PBS重悬液(P<0.05);而菌体PBS重悬液对羟自由基清除率显著高于培养上清液和菌体裂解液(P<0.05)。本试验成功从牦牛发酵酸奶中分离出一株具备抗氧化活性的屎肠球菌X1,其抗氧化活性物质主要存在于菌体培养上清液中,该结果为将牦牛酸奶来源乳酸菌开发为新型抗氧化微生态制剂、缓解畜禽养殖过程中的氧化应激提供菌种来源。     

传统乳制品中潜在益生植物乳杆菌的体外筛选

对从内蒙古牧区乳制品中分离到的29株植物乳杆菌的耐酸性（pH=3．0）、耐胆汁性（质量浓度3g／L牛胆酸钠）、抗菌活性进行了系统性研究。结果表明，有10株菌具有较好的耐酸耐胆盐特性，结合抗菌特性及黏附性试验结果，菌株WZ47-1，WZ32-2-1和WH13-2有可能成为潜在益生菌菌株。     

Identification and molecular mechanism of action of antibacterial peptides from Flavourzyme-hydrolyzed yak casein against Staphylococcus aureus

Antibacterial peptides can be released from yak milk casein. To date, the amino acid sequences and mechanism of action of yak casein–derived antibacterial peptides remain unknown. The current study identified antibacterial peptides from yak casein and their molecular mechanism of action. Our results showed that yak α-casein, β-casein, and κ-casein could be effectively hydrolyzed by Flavourzyme (Solarbio Science and Technology Co. Ltd.), and the 2-h hydrolysate showed the highest antibacterial rate of 43.07 ± 2.59% against Staphylococcus aureus. The 1,000 to 3,000 Da fraction accounted for 23.61% of the 2-h hydrolysate and had an antibacterial rate of 62.64 ± 4.40%. Three novel peptides with antibacterial activity were identified from this fraction, and the β-casein–derived peptide APKHKEMPFPKYP showed the strongest antibacterial effect (half-maximal inhibitory concentration = 0.397 mg/mL). Molecular docking predicted that APKHKEMPFPKYP interacted with 2 important enzymes of Staph. aureus, dihydrofolate reductase and DNA gyrase, through hydrophobic, hydrogen bonding, salt bridge, and π-π stacking interactions. Our findings suggest that the yak casein–derived peptides may serve as a potential source of natural preservatives to inhibit Staph. aureus.     

源自螺旋藻渣枯草芽孢杆菌发酵抗菌肽SP-AP-1和伊枯草菌素对金黄色葡萄球菌抑菌机制对比研究

目的:研究枯草芽孢杆菌发酵螺旋藻渣的发酵液中分离出的抗菌肽SP-AP-1和伊枯草菌素对金黄色葡萄球菌的抑菌机理.方法:采用紫外分光光度法、邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷法和原子吸收光谱法研究抗菌肽对金黄色葡萄球菌细胞膜通透性的影响;采用考马斯亮蓝法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳考察抗菌肽对金黄色葡...     

Antimicrobial activity of bacterial isolates from different floral sources of honey

More than two thousand bacterial strains isolated from six US domestic honeys and two manuka honeys from New Zealand were screened for production of antimicrobial compounds. A high incidence of antimicrobial inhibition determined by deferred inhibition assays was observed with the bacterial isolates from all eight honey samples. In total, 2217 isolates out of 2398 strains (92.5% of total isolates) exhibited antimicrobial activity against at least one of the tested microorganisms. Antifungal activity by bacterial isolates originating from the eight honeys ranged from 44.4% to 98.0%. Bacterial isolates from manuka honey (MH1) exhibited antimicrobial activity against Bacillus subtilis ATCC 6633 and Bacillus cereus F4552, at 51.5% and 53.3% of the isolates, respectively. However, less than 30% of the bacterial isolates from the other manuka honey (MH2) and six domestic honey sources exhibited anti-Bacillus activity. Listeria monocytogenes F2-586 1053 showed higher overall rates of sensitivity to between 11 and 66% of the bacterial isolates. The high rate of antimicrobial activity exhibited by the bacterial strains isolated from different honey sources could provide potential sources of novel antimicrobial compounds.     

核桃仁种皮多糖对酸奶中霉菌的抑菌作用研究

从大量生产酸奶中分离纯化出常见酸奶污染霉菌,并利用从核桃仁种皮中提取纯化的多糖分别对这些霉菌进行抑菌作用研究.结果表明,酸奶污染霉菌多集中于几种霉菌,并且纯化后的核桃仁种皮多糖对酸奶中的霉菌具有一定的抑制作用,随着多质量糖浓度增大,抑菌作用增强,当质量浓度达到500 mg/L时,对各霉菌的抑制作用较强,这些结果为核桃仁...     

山茱萸提取物抑菌活性成分稳定性的研究

本实验主要对山茱萸抑菌性能进行研究,结果表明,山茱萸提取物具有强抑菌活性,在pH＜7的条件下提取物对细菌具有较好的抑菌效果,明显强于山梨酸钾.同时以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌,研究山茱萸提取物活性成分的稳定性,结果表明提取物经过酸、碱处理后只有在酸性条件下具有一定的抑菌活性,碱处理使其抑菌活性减弱,甚至消失;温度、紫外照射及常见金属离子(Na 、K 、Ca2 、Fe2 、Fe3 )对其稳定性几乎没有影响.     

铁离子螯合亲和层析分离抗氧化活性核桃肽

采用铁离子螯合亲和层析方法分离出具有不同抗氧化活性的核桃肽,并探讨核桃肽的抗氧化活性与铁结合能力的关系。结果表明,核桃肽在酸性条件(pH 5.5)下与铁的结合能力最强,随着pH逐渐升高,结合能力下降。磷酸氢二钠对吸附到铁亲和层析柱上核桃肽的洗脱效果最好,通过阶段洗脱,得到铁结合能力逐渐增强的核桃肽组分(F1、F2和F3)。对其总还原能力和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力进行测定,发现其抗氧化能力为F3>F2>F1(P<0.05)。结果表明,核桃肽的铁结合能力越强,其抗氧化活性越高。     

Anticancer,antioxidant, and antimicrobial activities of anemone (Anemone cathayensis)

This study was performed to evaluate the anticancer, antioxidant, and antimicrobial activities of fractions and isolated compounds from anemone (Anemone cathayensis). Fourteen compounds were isolated from extracts. Anticancer activities of fractions and compounds were determined by MTT assay, and all tested fractions showed inhibition activity on human breast cancer cells (MDA-MB-231). The fraction 6 displayed the strongest anticancer activity, and inhibition percent was 50.32%. The antioxidant effect of fractions was evaluated by using DPPH scavenging assays. Fraction 5 had a higher DPPH radical scavenging activity with low IC₅₀ value of 30.578 μg/mL. The antimicrobial activity of the fractions was evaluated against 3 microorganisms using the agar well diffusion method. The fractions also showed moderate antimicrobial activity. These results suggest that anemone could hold a good potential source for human health.