食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测结果的分析

目的:分析食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测结果,以及时发现食品安全隐患,为食品安全监管提供参考依据。方法:严格按照《2012年食源性致病菌监测工作手册》中的单核细胞增生李斯特氏菌检验标准,对济宁市2019年1—12月定期采样的8类常用食品(生鲜猪肉、生鲜牛肉、生鲜羊肉、生鲜鸡肉、冻虾、冻带鱼、凉拌菜与冰激凌)进行单核细胞增生李斯特氏菌检测,分析其阳性检出率。结果:567份8类常用食品中,检出单核细胞增生李斯特氏菌27份,阳性检出率为4.76%,其中包括生鲜猪肉6份(5.94%)、生鲜羊肉5份(6.02%)、生鲜鸡肉5份(5.10%)、冻虾4份(7.69%)、冻带鱼2份(3.28%)以及凉拌菜5份(11.63%),生鲜牛肉与冰激凌均未检出单核细胞增生李斯特氏菌。结论:食品中存在单核细胞增生李斯特氏菌污染的风险,其中以凉拌菜的污染风险最高,应加强该方面的防控,以确保食品安全。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证

目的通过能力验证提升食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力和实验室质量管理水平。方法依据GB 4789.30-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检测,利用BAX system Q7全自动病原微生物检测系统对能力验证中的3个样品进行快速筛查,采用VITEK2COMPACT全自动细菌鉴定系统、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和溶血素O基因(hlyA)序列比对分析鉴定可疑菌株。结果编号CODE1和CODE3的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,编号CODE2的样品未检出。结论本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证测试,取得了满意的实验结果。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测分析

目的:分析食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测结果,以及时发现食品安全隐患,为食品安全监管提供参考依据.方法:严格按照《全国食源性致病菌监测工作手册》中的单核细胞增生李斯特氏菌检验标准,对某市2021年1—12月定期采样的10类常用食品进行单核细胞增生李斯特氏菌检测,分析其阳性检出率.结果:897份10类常用食品中,检出...     

食品中单核细胞增生性李斯特氏菌PCR快速检测方法

为建立食品中单核细胞增生性李斯特氏菌 (单增李斯特氏菌 )的快速、敏感、特异的PCR检测方法 ,选取hlyA基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 6 3株从国内食品中分离的李斯特氏菌 (进行传统方法验证 )和 2 0株非李斯特氏菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测 ,扩增片段表现出极好的单增李斯特氏菌种特异性 ,人工污染的生肉、冷冻虾仁、卷心菜的检出限为 39cfu g ,为食品中单增李斯特氏菌的快速、敏感并且特异的检测方法。     

泉州市食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定性、定量及耐药性分析

为了解福建省泉州市食品中单增李斯特氏菌的污染状况，于2000年12月至2001年12月对泉州市市售的155份生肉、熟肉制品、水产品中的单增李斯特氏菌进行了定性，定量及耐药性测定，检出李斯特氏菌47株，总检出率为35．48％，其中生肉类68．12％，海产品类12．5％，熟肉类6．52％，检出单增李斯特氏菌6株，总检出率3．87％，其中生肉类8．7％，海产品和类熟肉类中未检出。6株单增李斯特氏菌均对氨苄西林，头孢噻吩、氯洁霉素，氧氟沙星，青霉素G、四环素，万古霉素敏感，对环丙沙星中度敏感，对呋喃妥因不敏感，根据测定结果，建议有关部门及早制定相应的管理措施，加强监测，防止其引起的食中毒爆发流行。     

广州市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌监测结果分析

目的 分析广州市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染分布情况.方法 2013—2019年共采集16类共4905份食品样品,开展单核细胞增生李斯特氏菌监测分析.按照GB 4789.30—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》中规定的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法开展检测.结果 单核...     

数字PCR定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌方法的研究

目的建立微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的分析方法。方法选择基因hly A为靶序列,设计PCR扩增引物和Taq Man探针,优化反应条件和反应体系,通过细菌分离和dd PCR方法对靶标基因的检测特异性、灵敏度和重复性进行实验,并对定量结果进行分析。结果 ddPCR反应中的最佳探针浓度为5 pmol/μL,特异性好,检出限为(3.6±0.1)copies/20μL,重复性实验良好,标准偏差为0.067%。ddPCR的拷贝数(copy number)与细菌密度(colony forming units,CFU/mL)形成了较好的线性关系。结论本研究建立dd PCR的拷贝数和菌液密度或菌落数的线性关系,可以为单核细胞增生李斯特氏菌的快速定量检测提供参考。     

即食食品中单核细胞增生李斯特氏菌的风险评估

从风险评估的4个方面并结合欧盟法规(Regulation(EC)No 2073/2005)中单核细胞增生李斯特菌的限量指标,介绍关于即食食品中单核细胞增生李斯特菌风险评估的新观点,并指出需要改进微生物标准中的单核细胞增生李斯特菌的限量指标.假设此菌对人类疾病的有关风险,对如何降低即食食品中单核细胞李斯特菌的水平提出建议.     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌的污染概况及防制

本文归纳了单核细胞增生李斯特氏菌在水产品、奶与奶制品、肉类食品中污染情况及对人体造成的危害，提出防制措施。     

不同食品基质中单核细胞增生李斯特氏菌核酸提取方法的比较

比较4类食品基质中单核细胞增生李斯特氏菌核酸提取方法的差异。以不同食品基质中的单核细胞增生李斯特氏菌作为研究对象,选取应用广泛并且原理不同的4种细菌核酸提取方法进行比较,同时结合实时荧光PCR法对各种方法进行实际评估。天根离心柱法核酸提取结果稳定,受不同食品基质的影响较小;Promega沉降法与磁珠法受不同食品基质影响较大,核酸提取结果差异较大;Chelex-100法快速方便,但仅适于纯菌液或菌落的核酸提取。     

Comparison of the hydrophobic grid-membrane filter DNA probe method and the Health Protection Branch standard method for the detection of Listeria monocytogenes in foods

The standard Health Protection Branch (HPB) method for the detection of L. monocytogenes in foods involves lengthy enrichment, selection and biochemical testing, requiring up to 8 days to complete. A hydrophobic grid-membrane filter (HGMF) method employing a digoxigenin-labelled listeriolysin O probe required 5 days to complete, and included an image-analysis system for electronic data acquisition. A total of 200 food samples encompassing 8 high-risk food groups (soft and semi-soft cheeses, packaged raw vegetables, frozen cooked shrimp, ground poultry, ground pork, ground beef, jellied meats, and pâté) were screened for the presence of L. monocytogenes by the two methods. Overall, 32 (16%) and 30 (15%) of the naturally-contaminated food samples tested positive for L. monocytogenes by the HPB and DNA methods, respectively. The DNA probe method was highly specific in discriminating L. monocytogenes from other Listeria spp. present in 50 of the samples tested. Results showed 94% sensitivity and 100% specificity between the two methods. The HGMF DNA probe method is an efficient and reliable alternative to the HPB standard method for detecting L. monocytogenes in foods.     

可视化跨越式滚环扩增技术检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

本研究以现代加工工艺条件下生产制作的金华火腿为研究对象,评估了因单增李斯特菌而引起食物中毒的风险。通过调查生猪肉中单增李斯特菌的初始污染率及污染水平,金华火腿生产及销售过程中影响单增李斯特菌生长的参数,如pH、水分活度、温度以及乳酸菌含量等,再结合单增李斯特菌生长模型,模拟其暴露水平,并评估了不同人群因食用即食金华火腿切片而患李斯特菌病的风险。结果显示：金华火腿零售时污染水平为−9.47~7.05 lg CFU/g（90%的置信区间）;健康成年人食用即食金华火腿切片的平均患病概率小于10⁻¹⁵,易感人群的平均患病概率小于10⁻¹³。食用即食金华火腿切片而患李斯特菌病的风险较低,金华火腿的现代加工工艺对于单增李斯特菌的控制水平可以与国际接轨。本研究首次定量模拟了金华火腿从生猪肉到腌制发酵至最终产品的全过程中单增李斯特菌的暴露情况,为发酵火腿中食源性致病菌的风险评估提供了参考模型。     

Model of the influence of time and mild temperature on Listeria monocytogenes nonlinear survival curves

Heat treatment has long been regarded as one of the most widely used and most effective means of destroying pathogens in food. Up to now the linear relationship between the death rate and the temperature has been used when choosing the best heat treatment to apply. However, the information given by this linear relationship is no longer sufficient when nonlinear survival curves are observed. Consequently, the agri-food industry needs a tool to choose the best mild heat treatment to apply in the case of nonlinear survival curves. This study deals with the temperature-induced death of Listeria monocytogenes CIP 7831 in the stationary phase of growth. Eleven temperatures were tested. With the proposed primary and secondary models good fits of our data were obtained. A model describing both the effect of the duration of treatment and the temperature on the logarithm of the number of survivors was then built. A clear increase in the precision of the estimation of the parameters was obtained with this model. Moreover, with this model a new graphical strategy to choose a mild heat increase regarding a maximal survivor number has been proposed.     

胡椒单萜类化合物对单增李斯特菌抑菌机理的研究

本文研究了胡椒单萜类化合物对单增李斯特菌(L.monocytogenes)的抑菌机制,通过分析单增李斯特菌差异蛋白、呼吸链复合体以及三磷酸腺苷酶(ATP酶)等指标,根据同源建模与分子对接技术探索其作用靶点。添加胡椒单萜类化合物可显著抑制单增李斯特菌的生长(p<0.05),同时Na⁺-K⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase、呼吸链复合体I~V活力均显著低于对照组(p<0.05),其中复合体V在蛋白水平显著下调。胡椒单萜类化合物可使单增李斯特菌细胞膜通透性发生变化,抑制ATPase和呼吸链复合体活性,使得ATP合成减少,从而导致菌体衰亡。这为胡椒单萜类化合物应用于食品保鲜提供理论基础。     

Antimicrobial activity of ethanol, glycerol monolaurate or lactic acid against Listeria monocytogenes

Minimal inhibitory concentrations (MIC) and antimicrobial effects of glycerol monolaurate (monolaurin), ethanol and lactic acid, either alone or in combination, against Listeria monocytogenes in tryptic soy broth were determined. Ethanol at concentrations up to 1.25% did not inhibit growth, but growth was strongly inhibited in the presence of 5% ethanol. MIC values of monolaurin and ethanol alone were 10 μg/ml (0.001%) and 50 000 μg/ml (5%), respectively. However, MIC values were not changed when monolaurin was combined with ethanol. When 5 μg/ml monolaurin was combined with 5% ethanol, the inhibitory effect of the combination was similar to the most active compound alone after 24 h incubation. These data indicate little interaction between monolaurin and ethanol against L. monocytogenes. MIC value of lactic acid alone was 5000 μg/ml (0.5%), but was lower when 1.25% ethanol was combined with 0.25% lactic acid. When 2.5% ethanol was combined with 0.25% lactic acid, the combination did not increase the inhibitory effect of the most active single compound alone. This result also indicates that there was little interaction between ethanol and lactic acid.     

食源性单增李斯特菌与英诺克李斯特菌基因组特征比较

目的 通过全基因组测序对甘肃省市售食品中分离的单增李斯特菌和英诺克李斯特菌基因组特征进行比较分析。方法 收集2021—2022年甘肃省市售食品中分离的25株单增李斯特菌和7株英诺克李斯特菌作为研究对象,对菌株进行全基因组测序,分析其系统发育谱系、克隆复合群（CC）、序列型（ST）、毒力基因、抗性基因及泛基因组。结果 32株李斯特菌分属单增李斯特菌谱系Ⅰ和Ⅱ及英诺克李斯特菌3个群,单增李斯特菌分为10个亚群,英诺克李斯特菌分为5个亚群,与CC型保持一致,核心基因组多位点序列分型能将各谱系中不同CC型的菌株明显分开,谱系Ⅰ与英诺克李斯特菌的进化关系更近。25株单增李斯特菌均携带李斯特菌毒力岛LIPI-1和内化素基因,不携带LIPI-3,有2株ST87型菌株携带LIPI-4;7株英诺克李斯特菌均不携带LIPI-1和内化素基因,均携带LIPI-4,有5株菌携带LIPI-3。单增李斯特菌有16株携带SSI-1、3株携带SSI-2,7株英诺克李斯特菌均不携带SSI-1,有6株携带SSI-2。李斯特菌的泛基因组大小随着测序基因组数目的增加呈现线性增多,25株单增李斯特菌当菌株数量达到15后核心基因数目稳定在2 272个,占泛基因组基因数目的46.2%,25株单增李斯特菌和7株英诺克李斯特菌共同的核心基因1 487个,当菌株数量达到10后数目趋于稳定。结论 核心基因组多位点序列分型可将不同谱系不同克隆复合群的李斯特菌进行区分,英诺克李斯特菌与单增李斯特菌生化特性相似与其亲缘关系相近有关,致病性差异与英诺克李斯特菌缺失单增李斯特菌特有的毒力基因相关。     

胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌抑菌机理及在冷鲜肉中的应用

将不同浓度的萜类化合物添加至单增李斯特菌培养基中,对照组中不添加萜类化合物,通过对单增李斯特菌最小抑菌浓度(MIC)、菌落数、形态和电导率等指标的测定和分析,探究胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌的抑菌机理。结果表明,胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌的MIC为0.05%。添加0.1%萜类化合物可显著抑制单增李斯特菌的生长(P<0.05),使单增李斯特菌细胞膜通透性发生变化,细菌内容物大量流失,菌体相互黏连、衰亡。胡椒油中萜类化合物应用于冷鲜肉保鲜可有效减缓菌落总数的增长,相较于对照组在冷藏后12 h时菌落数已超出国家标准(6.0 lg CFU/g),加入0.1%萜类化合物能够使冷鲜肉菌落数在24 h时仍然处于较低水平。本研究探讨了胡椒油中萜类化合物对单增李斯特菌的抑菌机理并将其用于冷鲜肉的保鲜,这有利于对胡椒油的开发利用,也为日后将其应用于肉制品保鲜领域提供理论基础。     

金华火腿中单增李斯特菌的风险评估

本文拟研究月桂酰精氨酸乙酯（lauroyl arginate ethyl,LAE）对单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）的失活机制。采用二倍稀释法测定LAE对L. monocytogenes的最小抑菌浓度（minimum antibacterial concentration,MIC）。通过测定细胞形态、细胞膜完整性、胞内ATP水平、细胞膜电位、细胞表面疏水性及胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平等指标,揭示LAE失活L. monocytogenes的作用机制。结果表明,LAE对L. monocytogenes的MIC值为10 μg/mL。与未处理组相比,经终浓度为40 μg/mL的LAE处理10 min后,L. monocytogenes细胞形态发生明显皱缩,胞外核酸和蛋白质水平分别升高了1.64和15.39倍（P<0.05）,表明细胞膜通透性显著增强（P<0.05）,且细胞膜发生去极化,细胞表面疏水性显著增强（P<0.05）;胞内ATP水平降低了92.40%（P<0.05）;胞内活性氧水平升高了77.27%（P<0.05）。此外,添加抗氧化剂谷胱甘肽和N-乙酰-L-半胱氨酸均能显著降低LAE的抑菌活性（P<0.05）。综上表明,LAE能够有效失活L. monocytogenes,这可能与其损伤细胞膜和诱导氧化应激等有关。该研究为LAE在食品保鲜中的实际应用提供了理论依据。

     

北京市朝阳区单核细胞增生李斯特菌关键毒力基因缺失与致病性关联性研究

目的 了解北京市朝阳区2016-2018年81株单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)关键毒力基因缺失与菌株致病性和血清型的关联性.方法 聚合酶链反应(PCR)结合血清凝集法进行血清学分型;PCR法检测11种毒力基因;微量肉汤稀释法进行药敏实验;结合流行病学调查数据,研究单增李斯特菌关键毒力基因缺失与致病性、血清型的关联...     

食品中单核细胞增生李斯特菌微滴数字PCR定量检测方法建立

目的 建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌的微滴式数字聚合酶链式反应（ddPCR）快速定量检测方法。方法 筛选单核细胞增生李斯特氏菌的特异性引物和探针,通过对目标菌纯菌液及人工污染样品的检测,比较ddPCR方法和平板计数法的定值效果,对ddPCR结果进行特异性、灵敏性和重复性分析。结果 本研究建立的单核细胞增生李斯特氏菌ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。单核细胞增生李斯特氏菌纯菌液中定量限（LOQ）和检出限（LOD）均为136 CFU/mL,在鱿鱼圈和香肠样品中定量限分别为240 CFU/g和155 CFU/g。ddPCR在各梯度水平上变异系数均小于25%,ddPCR和平板计数定值对数值相对偏差均小于30%。结论 本研究建立的ddPCR方法能够快速、准确、灵敏、特异地定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌。