瓠瓜胰蛋白酶抑制剂的提取

采用水提法从瓠瓜中提取胰蛋白酶抑制剂,以瓠瓜提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标,研究了提取温度、液料比、提取时间、pH四个主要影响因素,优化选出最佳提取方案。从瓠瓜中提取胰蛋白酶抑制剂的最佳条件为：温度70℃、pH=8、液料比4∶1（mL/g）、提取时间1h。     

黑豆胰蛋白酶抑制剂的纯化及性质研究

目的:分离、纯化一种黑豆胰蛋白酶抑制剂,并进行酶学性质及其生物学性质研究,为其生物活性蛋白的研究提供依据。方法:采用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、亲和色谱Affi-gel和SDS-PAGE等方法分离、纯化和鉴定;以BANPA为底物,检测BSTI对胰蛋白酶的抑制活性。结果:从黑豆种子中分离到一种胰蛋白酶抑制剂,命名为BSTI。SDS-PAGE和阴离子高效液相色谱鉴定表明该蛋白具有相当高的纯度。其相对分子质量为20 kD,等电点为5.6。当抑制剂与酶的物质的量比达到1时,使酶完全失活。在温度65℃以下以及经pH 2～10处理后,BSTI活性几乎不受影响。BSTI对植物致病菌苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌和白菜黑斑病菌具有较强的抑制作用,而对甜瓜枯萎病菌和葡萄灰霉病菌无抑制作用。结论:本文分离、表征到一种具有抗菌活性的新型胰蛋白酶抑制剂,可以使用离子交换层析柱进行分离、纯化。     

豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究

对豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了调查 ,发现水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白、水豆腐、干豆腐中胰蛋白酶抑制剂活性均被钝化了 90 %以上 ;对腐乳、豆酱中胰蛋白酶抑制剂活性进行检测 ,结果未检出。无糖豆粉、×××豆粉、豆浆以及内酯豆腐中胰蛋白酶抑制剂钝化率低于90 %。比较了 3种热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果 ,得到巴氏杀菌可钝化胰蛋白酶抑制剂1 4 0 7% ;高压杀菌可钝化 91 1 0 % ,超高温灭菌可钝化 6 5 90 %。     

亚麻种子中胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

将亚麻种子去壳粉碎,经丙酮脱脂和Tris-HCl缓冲液提取后,Q-Sepharose^TM Fast flow离子交换层析一步纯化,获得电泳纯的亚麻胰蛋白酶抑制剂（LUTI）,纯化倍数可达9.62,活力回收率为6.25%,比活力为55.35 U/mg,SDSPAGE电泳显示LUTI分子量大小约为8 ku。质谱鉴定属于Potato型胰蛋白酶抑制剂,其抑制活性在p H2.0⁶.0以及70℃以下有较好的稳定性,最适p H为6.0,最适温度为40℃,属于一种非竞争性抑制剂,Ki值为9.18×10^-4mol/L。DTNB法检测LUTI含有一对二硫键,二硫键存在有助于提高LUTI的稳定性和活性。      

大豆胰蛋白酶抑制剂的提取纯化及其对凡纳滨对虾类胰蛋白酶的抑制作用

凡纳滨对虾的虾头中类胰蛋白酶活性高,死后自溶引起的组织软化大大降低了其商品价值。为了减少品质下降带来的不利影响,通过大豆胰蛋白酶抑制剂来抑制凡纳滨对虾的类胰蛋白酶从而达到提高品质的目的。首先,通过30%~80%硫酸铵沉淀、Q-Sepharose F.F阴离子交换层析和Sephacryl S-100凝胶过滤层析从凡纳滨对虾中提取了类胰蛋白酶,其分子质量为32.6 k Da。通过粉碎、脱脂、0.15 mol/L Na Cl提取,再进行热变性、超滤、Sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到大豆胰蛋白酶抑制剂,该抑制剂分子量为16 k Da,得率为28.95%,纯化倍数达12.51,为电泳纯。实验结果表明,该抑制剂能抑制凡纳滨对虾类胰蛋白酶的活性,其抑制类型为不可逆抑制。     

酶法钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，在其最适pH值和最适温度下水解低温脱脂豆粕1h，分别检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化。结果表明，4种酶都可在不同程度上降解大豆胰蛋白酶抑制剂，但降解程度差异较大，碱性蛋白酶降解作用显著优于其它酶。按照四种酶水解胰蛋白酶抑制剂相对活力的大小排序为：碱性蛋白酶＞酸性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶。     

固定化胰蛋白酶壳聚糖树脂的制备及其对大豆胰蛋白酶抑制剂的吸附性

通过反向悬浮交联法制备了壳聚糖树脂,采用环氧氯丙烷活化,对树脂固定胰蛋白酶进行研究。通过正交设计实验,优化了壳聚糖树脂的活化、偶联条件;结果表明,4.0g壳聚糖树脂,加入1.6mL环氧氯丙烷,8.0mL1.0mol/LNaOH,活化温度60℃、偶联温度30℃时,胰蛋白酶可达到较大偶联量,偶联量为24.63mg/g壳聚糖树脂;添加硼氢化钠4.0mg,1,4-二氧六环6.0mL时,可将壳聚糖树脂的活化效果分别提高2倍、1倍。固定化酶活性检测表明,胰蛋白酶已成功地偶联到壳聚糖树脂上,并具有亲和吸附胰蛋白酶抑制剂活性,对大豆胰蛋白酶抑制剂的清除率约为33.3%。此固定化胰蛋白酶树脂可作为一种新型、廉价的亲和载体材料。      

固定化胰蛋白酶壳聚糖树脂的制备及其对大豆胰蛋白酶抑制剂的吸附性

通过反向悬浮交联法制备了壳聚糖树脂,采用环氧氯丙烷活化,对树脂固定胰蛋白酶进行研究。通过正交设计实验,优化了壳聚糖树脂的活化、偶联条件;结果表明,4.0g壳聚糖树脂,加入1.6mL环氧氯丙烷,8.0mL1.0mol/LNaOH,活化温度60℃、偶联温度30℃时,胰蛋白酶可达到较大偶联量,偶联量为24.63mg/g壳聚糖树脂;添加硼氢化钠4.0mg,1,4-二氧六环6.0mL时,可将壳聚糖树脂的活化效果分别提高2倍、1倍。固定化酶活性检测表明,胰蛋白酶已成功地偶联到壳聚糖树脂上,并具有亲和吸附胰蛋白酶抑制剂活性,对大豆胰蛋白酶抑制剂的清除率约为33.3%。此固定化胰蛋白酶树脂可作为一种新型、廉价的亲和载体材料。     

Alcalase蛋白酶降解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

研究了不同酶解条件下 (pH值、温度、时间、加酶量和添加巯基还原剂 ) ,碱性内切蛋白酶Alcalase对大豆蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂的降解作用。研究结果表明 ,Alcalase可同时降解大豆蛋白和胰蛋白酶抑制剂。该酶解反应的最适条件为 :pH 8 0、温度 6 0℃、最适加酶量 10 μL/g蛋白 (约 0 0 2 832AU/ g蛋白 ) ,添加Na2 SO3为ω(Na2 SO3) =0 3% ,水解时间 4h。在此条件下 ,残留胰蛋白酶抑制活性为对照的 2 0 % ,可溶性蛋白含量可达 2 7mg/mL ,游离氨基酸含量为 7 1mg/mL ,大豆蛋白的水解度为 8 9%。还讨论了Alcalase蛋白酶降解大豆蛋白生成小肽的最佳反应条件     

马铃薯胰蛋白酶抑制剂的抑菌活性

本研究探讨了马铃薯胰蛋白酶抑制剂（PTI）抑菌活性及其抑菌机理。采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径,微量二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）,以此评价PTI的抑菌性。通过扫描电镜观察并测定胞膜通透性、胞膜完整性、胞内活性氧含量及对细菌蛋白酶的抑制率等实验,探讨了PTI的抑菌机理。结果表明：PTI对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和铜绿假单胞菌有较明显的抑制作用,其抑菌圈直径分别为12.56 mm、12.35 mm和11.76 mm,MIC为1.88~3.75 mg/mL,MBC均为3.75 mg/mL。PTI破坏了菌体细胞的形态,导致菌悬液中相对电导率升高和核酸的泄漏,影响了细菌的膜通透性;通过荧光显微镜观察,1 MIC的PTI使菌体胞膜的完整性遭到破坏并促进胞内ROS的产生,造成了菌体氧化损伤;PTI对菌体蛋白酶的活性表现出一定的抑制作用。通过实验得出PTI可能通过这种多靶点协同增效作用达到其抑菌效果。     

甘薯块根中胰蛋白酶抑制剂研究进展

胰蛋白酶抑制剂(TI)是甘薯块根中一类特殊贮藏蛋白,该文从甘薯块根中TI组成分布、提取纯化、活性及影响因子、TI与蛋白含量相关性和TI功能性等方面对国内外有关TI研究进展进行综述。     

太湖蓝藻水华胰蛋白酶抑制剂的含量测定

采用紫外分光光度法对太湖蓝藻提取液中的胰蛋白酶抑制剂进行了含量测定,测定的线性范围在4～40μg/mL.此法简单方便,精密度和回收率均较理想.     

降解大豆胰蛋白酶抑制剂的短小芽孢杆菌菌株及其胞外蛋白的鉴定

本研究以大豆胰蛋白酶抑制剂为唯一碳源,从豆类内部筛选获得3株具有降解大豆胰蛋白酶抑制剂的细菌。通过对菌株的16Sr DNA基因的分析,3株细菌分别被鉴定为枯草芽孢杆菌LZ013-1、短小芽孢杆菌LZ013-2和类芽孢杆菌LZ013-3。进一步研究发现LZ013-2菌株的上清液具有高效降解大豆胰蛋白酶抑制剂的活性,2h可将胰蛋白酶抑制剂抑制率降低73.60%。将LZ013-1和LZ013-2菌株应用于豆粕发酵中,两株芽孢杆菌均能高效降解胰蛋白酶抑制剂。原始豆粕的胰蛋白酶抑制剂活性为22.26 mg/g,经过LZ013-1和LZ013-2菌株的液态发酵后分别降低为0.50 mg/g和0.63 mg/g,经过固态发酵后分别降低为1.06 mg/g和1.03 mg/g。通过硫酸铵分级沉淀和凝胶柱层析,分离LZ013-2菌株发酵上清液中具有降解活性的蛋白质,并采用质谱鉴定分离得到的蛋白质,筛选并鉴定出2种活性蛋白,分别为肽酶S8(Uniprot ID:A0A2T0DB16)和肽酶M84(Uniprot ID:A8FIH7)。     

豆类种籽中胰蛋白酶抑制剂研究进展

胰蛋白酶抑制剂是一种天然存在于植物体内可抑制胰蛋白酶活性的蛋白,它是一种抗营养因子,同时还具有多种重要的生理功能。胰蛋白酶抑制剂广泛存在于豆类种籽中,我国拥有丰富的豆类资源,对豆类胰蛋白酶抑制剂的开发具有长远的意义。     

碱性蛋白酶钝化胰蛋白酶抑制剂的研究

以碱性蛋白酶水解无糖豆粉溶液 ,检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化 ,采用四因素五水平饱和最优试验设计 ,当作用时间为 1h时 ,最佳酶解钝化条件为 :pH值 8 88～ 9 0 8;温度4 3 2 2～ 4 4 90℃ ;酶用量 11 5uL/g;底物浓度 5 99%～ 6 72 %。     

太湖蓝藻水华胰蛋白酶抑制剂和凝血酶抑制剂的测定

为配合太湖蓝藻的收集处理 ,研究了蓝藻水华的资源化可能 ,在前期工作的基础上 ,通过层析分离并结合活性测定 ,发现太湖蓝藻水华中有多种胰蛋白酶和凝血酶抑制剂     

碱性蛋白酶钝化胰蛋白酶抑制剂的研究

以碱性蛋白酶水解无糖豆粉溶液，检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化，采用四因素五水平饱和最优试验设计，当作用时间为1h时，最佳酶解钝化条件为；pH值8.88-9.08；温度43.22-44.90℃；酶用量11.5uL/g；底物浓度5.99%-6.72%。