应用响应面法优化木聚糖酶的双水相萃取条件

采用响应面分析法优化短小芽孢杆菌木聚糖酶在PEG2000/K2HPO4双水相体系中的萃取条件。确定最佳萃取条件为NaCl 6%、PEG 2000 18%、K2HPO4 10%。在最佳萃取条件下得木聚糖酶分配系数为3.38,蛋白分配系数为0.13,纯化倍数为7.93,回收率为84.24%。考察了萃取酶液的部分酶学性质,其最适温度为50℃,最适pH为7.0。     

响应面法优化铁皮石斛多糖纯化工艺

目的:用响应面法优化铁皮石斛粗多糖的双水相萃取纯化工艺。方法:通过单因素实验考察了(NH₄)₂SO₄质量分数、C₂H₅OH质量分数和萃取温度对多糖萃取率和除蛋白率的影响,进而进行响应面试验,以多糖萃取率和除蛋白率为响应值进行统计分析。结果:各因素对多糖萃取率和除蛋白率的影响程度由大到小依次为萃取温度 > (NH₄)₂SO₄质量分数 > C₂H₅OH质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为: (NH₄)₂SO₄质量分数为18.80%、C₂H₅OH质量分数为25.00%、萃取温度为25.00 ℃,铁皮石斛多糖萃取率和除蛋白率分别为94.39%和91.36%。结论:此方法能够有效对铁皮石斛粗多糖进行纯化,为铁皮石斛多糖的开发利用提供理论依据。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

双水相法分离纯化灵芝中三萜的工艺优化

基于亲水性醇-无机盐双水相体系,建立高效分离纯化灵芝三萜的新方法。考察亲水性有机试剂种类、无机盐(种类、浓度、pH)、样品加入量、分相后下相溶液pH对三萜得率的影响。在单因素实验的基础上,选择K₃PO₄溶液浓度、样品加入量、分相后下相溶液pH为实验因素,采用L₉(34)正交实验优化灵芝中三萜分离纯化的最佳条件。最佳萃取条件为:10.6% K₃PO₄、42.5%甲醇、5%灵芝粗提液组成的双水相体系,成相后调节下相萃取液pH至 4.0,灵芝三萜提取量可达(10.13±0.19) mg/g,较碱提酸化法(7.42±0.09) mg/g提高了36.5%。甲醇/K₃PO₄双水相体系是一种简单、高效分离纯化灵芝三萜的新方法。     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

超声-酶辅助双水相提取枳壳黄烷酮工艺的建立与优化

枳壳是我国柑橘属常见的药食同源植物，所含丰富的黄烷酮即新橙皮苷和柚皮苷，是其主要的药理成分。为提高枳壳新橙皮苷和柚皮苷的提取分离效率，该研究采用响应面法优化了超声辅助双水相提取的最佳条件，并进一步建立超声-酶辅助双水相法(ultrasonic-enzyme assisted aqueous two-phase extraction, UEA-ATPE)提取工艺和制备液相色谱分离纯化方法。结果表明，(NH₄)₂SO₄/乙醇为最佳双水相体系，建立并优化的UEA-ATPE最佳工艺条件为乙醇质量分数27%,(NH₄)₂SO₄质量分数21%,超声功率137 W,复合酶质量比为中性蛋白酶∶果胶酶=1∶1。在此条件下，新橙皮苷和柚皮苷的得率分别为(92.27±2.13)、(72.24±1.56) mg/g,优于水煎煮法、50%乙醇浸提法、超声辅助95%乙醇提取法和超声辅助双水相法，同时此新方法提取液中杂质的种类和含量更少。提取液经制备型液相色谱进一步分离纯化后，得到了纯...     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

盐析法联合离子液体双水相纯化木瓜蛋白酶

本实验以海南产番木瓜为研究对象,采取盐析法联合离子液体双水相对其富含的木瓜蛋白酶进行提取纯化。以不同饱和度的(NH4)2SO4对粗酶液进行盐析,通过实验结果分析,确定了以饱和度分别为20%和45%的两步盐析法的最佳条件。然后再进行双水相萃取,通过单因素试验结果设计3因素3水平的响应面试验,优化双水相萃取条件为离子液体[C4mim]N(CN)2质量分数29.76%、(NH4)2SO4质量分数16.08%、pH?8.18,在此最优条件下木瓜蛋白酶萃取率为89.01%,酶活力回收率为86.72%,所得到木瓜蛋白酶比活力为1?056?U/mg,纯化倍数达到9.6?倍。然后对实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,经纯化的酶中杂条带明显减少,验证了分离纯化的效果。     

法尔凯干酵母乙醛脱氢酶的提取和纯化研究

应用硫酸铵分级盐析、热沉淀及双水相萃取方法提取并纯化了法尔凯干酵母胞浆内的乙醛脱氢酶(ALDH).结果表明,粗酶液经过硫酸铵分级盐析、热沉淀和2次双水相萃取后得到的ALDH酶液,比活性为0.14,纯化倍数为3.5,回收率为58 %;酶的最适pH为7.5,最适反应温度为35～40 ℃,以乙醛为底物的Km值为6.9×10-3 mol/L, K+离子为激活剂,Zn2+离子为抑制剂.     

正交实验优化柚皮中柚皮苷的超声辅助双水相提取工艺

采用超声辅助正丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相萃取技术对菊花芯柚果皮中柚皮苷的提取分离工艺进行系统研究。采用单因素均分法系统考察了(NH₄)₂SO₄质量分数、正丙醇质量分数、柚皮干粉加入量、pH、温度和时间6种关键因素对柚皮苷得率的影响,通过正交实验设计确定了双水相萃取技术最优工艺条件,并进行了放大实验研究和对比实验。结果表明,柚皮苷主要富集于上相,在优水平下,构建10.0 g双水相体系,正丙醇质量分数为21%(w/w),(NH₄)₂SO₄质量分数为18%(w/w),柚皮干粉加入量为0.15 g,调节pH至4.5,40℃条件下,超声提取30 min,柚皮苷得率为4.27%,RSD为1.23%,100倍放大后柚皮苷得率达到4.25%。对比热回流提取,正丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相提取具有提取时间短、温度低、能耗小、效果好等优点,优势明显,可以实现柚皮中柚皮苷的有效分离,为工业制备柚皮苷提供了一种新途径。     

双水相法提取木聚糖酶的初步研究

采用双水相法从黑曲霉AS3.4309 的发酵液中提取木聚糖酶,通过正交试验对双水相的组成进行优化。结果表明,双水箱体系最佳组成为：选用PEG4000,其浓度为19%(W/W),磷酸氢二钾浓度为10%(W/W),氯化钠浓度为0(W/W)。此条件下,木聚糖酶的提取效果较好,分离系数(K)和上相产率(Yt)分别为6.23 和88.67%。     

金银花叶中绿原酸的提取及抗氧化活性研究

本研究利用双水相体系分离金银花叶中的绿原酸并分析其抗氧化活性。探讨4种乙醇/无机盐双水相体系提取绿原酸的能力,在乙醇浓度、盐浓度、提取时间和温度4个单因素实验的基础上,通过响应面法研究NaH₂PO₄添加量、乙醇浓度和提取时间3因素及其交互作用对绿原酸提取率的影响。研究结果显示,4种乙醇/无机盐双水相体系中,乙醇/NaH₂PO₄双水相体系具有最佳的绿原酸提取效果。优化的提取工艺为NaH₂PO₄添加量3.15 g、乙醇浓度28.5%和提取时间49 min,提取率可达80.2%。当金银花叶绿原酸浓度为0.5 mg/mL时,其DPPH自由基清除率达84.2%;绿原酸浓度为1 mg/mL时,脂肪过氧化抑制能力达88%。这些研究结果表明乙醇/NaH₂PO₄双水相体系能有效提取金银花叶中的绿原酸,具有较好的应用前景。     

基质固相分散-乙腈/盐双水相萃取结合高效液相色谱法检测蔬菜中的苯脲类农药残留

建立一种简单、高效的基质固相分散-乙腈/盐双水相萃取法,用于提取、净化、富集蔬菜样品中残留的灭草隆、绿麦隆、敌草隆和利谷隆4种苯脲类除草剂,并通过高效液相色谱对目标分析物进行分离和测定。本研究以硅胶为分散剂,以乙腈水溶液为洗脱剂,采用基质固相分散法处理蔬菜样品,随后向洗脱液中加入K₂HPO₄,在盐析作用下诱导乙腈/盐双水相体系形成。取一定体积的上相溶液进行色谱分析。结果表明,在线性范围内各目标化合物具有良好的线性关系(r>0.9988),检出限与定量限分别介于0.9~1.5和2.9~4.9 μg/kg。日内和日间精密度分别介于1.7%~8.6%和4.0%~9.8%,加标回收率在84.3%~118.8%之间。本法集提取、净化和富集为一体,避免了离心、旋蒸、回溶等操作步骤,具有净化效果好、提取效率高、实验成本低等优点,可用于蔬菜中苯脲类除草剂的分离与检测。     

涡旋辅助离子液体双水相萃取五味子中木脂素类化合物

建立一种简单、高效、绿色的涡旋辅助离子液体双水相法萃取五味子中7种木脂素类化合物,结合高效液相色谱法对目标物进行分离和定量.研究以离子液体[C4mim]BF4为萃取剂,以MgSO4为成相盐,在涡旋辅助作用下形成双水相体系且目标物则被萃取至离子液体相中,分别对双水相体系的组成和萃取条件进行了考察和优化,并进行了方法评价....