食品中蜡样芽孢杆菌的分离及携带毒力基因的检测

为了确定成都市食品中蜡样芽孢杆菌所携带的毒力基因情况,本实验对市售食品共采样130份,通过菌落在MYP培养基上形态特征对蜡样芽孢杆菌进行初步分离,再利用16Sr RNA测序结果进行比对分析,并检测分离菌株携带的管家基因gyr B、rpo B、Vrr A、gro EL进一步确认,最后检测分离菌株携带毒力基因情况。结果表明130份样品中共检出23株蜡样芽孢杆菌,检出率为17.7%;23株分离菌株中,蜡样芽孢杆菌的4个管家基因gyr B、rpo B、Vrr A、gro EL检出率为100%,毒力基因的检测结果表明,nhe B和ent FM在16株分离菌株中检出,检出率为69.6%;nhe A和nhe C在14株分离菌株中检出,检出率为60.9%;hbl D在11株分离菌株中检出,检出率为47.8%;cyt K在10株分离菌株中检出,检出率为43.5%;bce T在9株分离菌株中检出,检出率为39.1%;hbl A和hbl C在8株分离菌株中检出,检出率为34.8%;cer和ces在2株分离菌株中检出,检出率为8.7%;未发现分离菌株携带hbl B和Hly基因。研究结果表明市售食品中分离的蜡样芽孢杆菌毒力基因携带率较高,对食品安全具有潜在威胁,应当引起有关部门注意。     

糙米中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及其毒力基因与药敏性检测

本文从一份糙米样品中分离纯化出5株细菌,分别命名为BR1、BR2、BR3、BR4和BR5,对其进行形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA及gyrB基因测序鉴定,并对其毒力基因及药物敏感性等生物学特征进行研究。结果表明,5株分离菌株生化特性符合蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）的特性,结合16S rRNA及gyrB基因测序结果,菌株BR1和BR4鉴定为蜡样芽孢杆菌。毒力基因的PCR检测结果表明,菌株BR1和BR4携带肠毒素基因（hbl、nhe、entFM和bceT）和细胞毒素K基因（cytK）,未检测到呕吐型毒力基因（cer和ces）。菌株BR1和BR4对青霉素、氨苄西林和头孢噻肟等药物耐药,对阿莫西林中度敏感,对诺氟沙星、环丙沙星和庆大霉素等药物敏感。本研究通过分离鉴定糙米源蜡样芽孢杆菌,发现分离菌株携带多种毒力基因,并且对青霉素类、头孢菌素类及磺胺类等药物耐药,表明糙米中的蜡样芽孢杆菌有引起食源性疾病的风险。     

我国食源性蜡样芽孢杆菌毒力基因和药物敏感性研究

目的 了解我国不同地区食源性蜡样芽孢杆菌的毒力基因携带特点及其对抗生素的敏感性,为食源性食物中毒的防治提供参考依据.方法 采用PCR方法对2011年我国不同地区收集的238株食源性蜡样芽孢杆菌10种毒力基因进行检测;采用微量肉汤稀释法测定其抗生素敏感性.结果 溶血素BL基因、肠毒素T基因和细孢毒素K基因是我国食源性蜡样芽孢杆菌的主要毒力基因,至少携带一个毒力基因的菌株达到检出菌总数的87.4％;蜡样芽孢杆菌对庆大霉素、万古霉素、环丙沙星、复方新诺明的敏感率为100％,对红霉素、四环素、氯霉素、克林霉素的敏感率分别为88.8％、90.2％、99.6％、87.1％,对氨苄西林和头孢噻肟的敏感率仅为0.4％和5.4％.结论 我国食源性蜡样芽孢杆菌毒力基因携带率较高,对食品安全和公共健康构成潜在的威胁;蜡样芽孢杆菌对氨苄西林、头孢噻肟的敏感性差,不应作为经验用药和预防用药.     

三类传统发酵食品中蜡样芽孢杆菌的污染状况研究

为探究辣椒酱、酸汤、毛豆腐三类传统发酵食品的蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）污染状况,采用国标GB 4789.14—2014《食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》方法测定样品的污染菌数及分离菌株的生理生化特征,并通过聚合酶链式反应（PCR）方法探究分离菌株的毒力基因谱和多样性。结果表明,5个辣椒酱及4个酸汤样品的蜡样芽孢杆菌检出率均为100%,菌数在3.6～460 MPN/g之间。而7个毛豆腐的蜡样芽孢杆菌检出率为28.57%,其中2个夏季样品的蜡样芽孢杆菌菌数>7 lg(CFU/g),5个秋季样品未检出蜡样芽孢杆菌,污染差异可能与气温变化、运输方式有关,需要实地采样并进行季节性分析。从三类样品中分离的94个菌株均符合蜡样芽孢杆菌生理生化特征,毒力基因均为腹泻型,且菌株多样性与样品差异性有关。综上,蜡样芽孢杆菌的污染特性具有明显的样品差异性,可能与发酵食品的原料、发酵工艺相关。     

基于全基因组测序的蜡样芽孢杆菌食品分离株分子特征及耐药性研究

目的 研究上海市食品中分离的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的基因组特征及其耐药性。方法 本研究对上海市食品中分离的蜡样芽孢杆菌进行鉴定、药物敏感性实验和全基因组测序,利用BioNumerics软件对测序数据进行拼接组装,利用拼接数据进行多位点序列分型(MLST)、毒力基因和耐药基因分析,并与PubMLST数据库中的ST型进行比较;对耐药基因和耐药表型进行比较分析。结果 本研究中37株蜡样芽孢杆菌均可分型,其中7株为ST新型。37株蜡样芽孢杆菌分为34个ST型,其中3株菌为ST26型,其余ST型各占1株,呈高度多样性。37株蜡样芽孢杆菌均携带nheA、nheB、nheC基因,hblACD基因簇的携带率为37.8%,而完整ces呕吐基因簇的携带率只有16.2%,其中2株为分离自即食食品的ST26型。药敏实验显示37株蜡样芽孢杆菌对氨苄西林、青霉素和苯唑西林耐药性较高,与其携带耐药基因种类并不完全一致。结论 上海市食品中分离的蜡样芽孢杆菌菌株分子分型呈现高度多样性,应加强食品中蜡样芽孢杆菌分子生物学监测,为预防控制由其引起的食源性疾病提供科学依据。     

原料乳中蜡样芽孢杆菌部分致病基因的鉴定及毒力评价

研究原料乳中蜡样芽孢杆菌的潜在威胁,对我国10 个省市原料乳中蜡样芽孢杆菌的污染状况进行调查,并利用PCR 扩增技术及血平板检测的方法分析乳源性蜡样芽孢杆菌中的毒性分布。结果表明,原料乳中蜡样芽孢杆菌检出率为33%,检出水平为1 × 103～1 × 106 CFU/ml,检出的蜡样芽孢杆菌中25 株(75.8%)能产生溶血素BL,24 株(72.7%)含有bceT 基因,至少产生一种毒素的菌株有31 株占检出菌总数的93.9%。研究结果证实我国原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染状况不容乐观,严格监控原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染,对生产出优质乳制品具有重要意义。     

1株食源性蜡样芽胞杆菌分离株的分子特征毒性及耐药性研究

目的 研究株蜡样芽胞杆菌SCY分离株的毒力和耐药性。方法 使用选择性培养基从银川市某餐厅鱼肉菜肴中培养分离获得蜡样芽胞杆菌SCY分离株,经23S rRNA基因PCR测序鉴定后,通过二代全基因组测序技术分析SCY分离株的基因组特征,进而分别采用免疫组化技术和药敏纸片实验研究SCY分离株的毒性和耐药性。结果 SCY分离株的基因组大小为5.82 Mb,编码基因个数为5 767,编码区总长度占全基因组的85.50%。SCY分离株基因组中共含有11个基因岛、16个CRISPR和5个前噬菌体;其中,SCY编码基因分别在PHI和VFDB毒力因子数据库中注释到了14个和62个毒力基因（Identiy>80,Evalue<0.05）,在CARD耐药数据库中注释到了215个耐药基因（Best Hit evalue<0.05）。小鼠肠道组织切片免疫组化结果表明,炎性因子IL-1β、CASP1和Nlrp3的表达水平发生差异显著性上调。22种细菌抗生素药敏纸片试验结果显示,SCY分离株对氯霉素、克林霉素等高度敏感,对四环素、头孢唑啉、头孢哌酮、氨苄青霉素表现为中介,对青霉素、苯唑西林、哌拉西林、杆菌肽、头孢他啶等10种抗生素表现为耐药,SCY分离株多重耐药情况较为严重。结论 本研究发现的SCY分离株属于肠毒株,携带多种肠毒素毒力基因,且具有典型的多重耐药特征。研究结果为揭示蜡样芽胞杆菌分离株的致病机制提供参考依据。     

红河州食源性蜡样芽胞杆菌毒力基因研究

目的了解红河州食源性蜡样芽胞杆菌毒力基因的携带情况,为食源性食物中毒的防治提供参考依据。方法采用PCR方法对2011年1月至2014年9月红河州收集到的31株食源性蜡样芽胞杆菌10种毒力基因进行检测。结果分离菌株普遍携带肠毒素毒力基因并且所有菌株均至少携带一种肠毒素基因,而呕吐型毒力基因只有一株菌携带。结论红河州食源性蜡样芽胞杆菌基因携带以腹泻型为主,且携带率较高,对食品安全和公共健康存在潜在威胁。     

食品中蜡样芽孢杆菌的研究进展

蜡样芽孢杆菌是常见食品污染菌,其产生的毒素可引起食物中毒.文中概述了蜡样芽孢杆菌的生物学特性、致病性、安全性、检测方法、食品中的限量标准及其控制方法.有效地控制该菌在食品中的污染,保护公众健康.     

食品中蜡样芽孢杆菌的控制方法

介绍了蜡样芽孢杆菌的特性以及食品生产企业如何控制该致病菌的方法。     

即食米面制品中蜡样芽胞杆菌分离鉴定及毒力基因研究

为探究即食米面制品中蜡样芽胞杆菌的污染状况及食源性蜡样芽胞杆菌中毒力基因的分布规律,以餐饮服务场所采集245份即食米面制品为蜡样芽胞杆菌的污染调查材料,通过国标法及持家基因分离鉴定得到49株蜡样芽胞杆菌阳性株,并对其进行13种毒力基因的PCR检测。结果表明:蜡样芽胞杆菌的平均检出率为10.61%(26/245),阳性检出样品主要为盒饭及米饭,其蜡样芽胞杆菌平均检出水平为3032 CFU/g,其中以盒饭的检出程度最高。49株分离菌株均检出两种或两种以上的毒力基因,非溶血性肠毒素基因nhe和entFM检出率最高,分别达到100%及91.84%,是分离菌株的主要毒力基因;溶血素基因hblA、hblC、hblD检出率分别为20.41%、38.78%和40.82%。同时携带nhe三个基因又携带hblA、hblC和hblD基因的强毒株有7株,占14.29%,且这7株菌均含有entFM基因。呕吐型毒力基因ces、cer、EM1仅2株检出,检出率为4.08%。本研究对即食米面制品中蜡样芽胞杆菌的监控、预警及爆发引起食物中毒后追踪其感染源和传播途径及构建基因指纹图谱库和分子溯源平台具有指导意义。     

成都市市售食品中蜡样芽胞杆菌污染状况与毒力基因分析

目的研究成都市市售食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因携带及对抗生素的耐药情况。方法 2014—2016年,在成都市农贸市场和路边摊点共采集食品样品330份,按照GB 4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》分离疑似菌株,应用管家基因和16S rDNA测序鉴定蜡样芽胞杆菌,并针对分离菌株携带的毒力基因及对抗生素的耐药性进行检测。结果 2014—2016年,蜡样芽胞杆菌总检出率为17.6%(58/330),不同类型食品蜡样芽胞杆菌检出率差异有统计学意义(χ~2=29.683,P0.01),不同年份的食品样品蜡样芽胞杆菌的分离率差异无统计学意义(χ~2=5.835,P0.05)。米面制品、即食凉拌类和腌卤制品是蜡样芽胞杆菌的主要污染食品。腹泻型毒素基因(hbl,nhe,bceT,cytK,entFM)的检出率远高于呕吐型毒素基因(ces和cer)。分离菌株对四环素、红霉素、克林霉素的耐药率分别为29.3%(17/58)、24.1%(14/58)和22.4%(13/58)。结论成都市市售食品中蜡样芽胞杆菌分离菌株携带毒力基因类型多样,对四环素、红霉素、克林霉素的耐药率较高,对食品安全具有潜在威胁。     

应用多重实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌毒力基因

目的:建立一种快速、准确、简便的蜡样芽胞杆菌毒力基因检测方法,为蜡样芽胞杆菌更深入的研究提供依据和便利。方法:采用TaqMan探针法设计了三重hblA,hblC,hblD基因,三重nheA,nheB,nheC基因,三重ces,entFM,bceT基因的多重实时荧光PCR体系检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果:多重体系对蜡样芽胞杆菌毒力基因的检测具有良好的特异性和灵敏性,其最低检出限为63 CFU/mL。结论:利用上述体系对蜡样芽胞杆菌的毒力基因进行检测能够省时省力,特异性、灵敏性良好,具有实际应用价值。     

Investigation of Bacillus cereus contamination sites in a dairy plant with RAPD-PCR

The usefulness of RAPD-PCR as a typing method for investigation of Bacillus cereus isolates from a dairy plant was evaluated. A 1-d in-depth sampling study along the entire production line was performed and long-term sampling of products was conducted over two years. In addition, farm bulk tank isolates were collected. Isolates from an individual sample during storage at 7°C were often identical. Large clusters of identical isolates were found in the silo tank in the 1-d study and in samples from the long-term study. In combination with analytical data, these results indicated a prolonged contamination problem caused by a mesophilic strain early in the production chain. Detailed and useful information on occurrence of psychrotrophic B. cereus was obtained along the production line and among products. RAPD-PCR appeared to be a useful typing method for B. cereus isolates. In combination with carefully planned sampling and microbiological analysis, RAPD could be helpful in solving dairy contamination problems in pasteurized milk.     

Production of diarrheal toxin by selected strains of Bacillus cereus

The production of diarrheal toxin by six selected strains of Bacillus cereus was monitored during growth at 32 °C, a temperature described as near-optimal for growth and toxin production. Toxic activity was measured in culture filtrates and cellular extracts sampled at three different times during growth. Two alternative methods, a cytotoxicity test on Chinese hamster ovary (CHO) cells and a commercial immunological test (BCET-RPLA, Oxoid) were used. Toxin titres were in agreement with epidemiological characteristics and toxicity demonstrated by using other systems in other examinations. A comparison of intra- and extracellular toxicities measured at the exponential and stationary growth phases showed that the toxin was essentially secreted during the exponential phase. For several strains, secretion peaked during the period from the middle exponential phase to the beginning of the stationary phase. There was no important overall increase of the toxicity during full and late stationary phase. The level was stable or even lower, thus indicating that diarrheal toxin production during stationary phase was small, if any, and that the toxin was unstable under these conditions. Statistical analysis of toxicities showed that the cytotoxicity test was correlated with the immunological test (significant at a 1% level). For routine determinations, a toxicologic laboratory may use any of the two methods, depending oft its facilities, the immunological test being relatively expensive.     

四种不同接触表面蜡样芽孢杆菌菌膜形成的影响

为了解食源性致病菌蜡样芽孢杆菌在食品加工环境中菌膜形成能力,以玻璃、不锈钢、聚氯乙烯、聚丙烯为接触面,采用超声波平板菌落计数法测定不同环境因素(温度、pH、氯化钠、葡萄糖、苯甲酸钠及山梨酸钾)、不同材料表面蜡样芽孢杆菌(B.cereus)菌膜形成的变化趋势。结果表明:四种材质表面形成B.cereus菌膜能力的大小顺序为:玻璃 > 不锈钢 > 聚氯乙烯 > 聚丙烯。其中,30 ℃,pH7.0时菌膜形成量最大,添加低浓度葡萄糖(4.0%)或氯化钠(0.5%)对B.cereus菌膜形成有显著促进作用(p<0.05),添加0.15%苯甲酸钠、山梨酸钾的菌膜形成量显著高于添加0.10%的菌膜形成量(p<0.05)。本研究为蜡样芽孢杆菌风险评估提供基础数据,为食品工业蜡样芽孢杆菌菌膜的预防和控制奠定基础,为改进蜡样芽孢杆菌的清洗控制措施提供参考。     

一起疑似由蜡样芽胞杆菌引起的食源性疾病事件的分子溯源研究

目的 对一起食源性疾病事件中食品分离蜡样芽胞杆菌（B. cereus）进行溯源分析,为确定污染源、切断传播途径提供技术支撑。方法 本研究建立脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法,对12株B. cereus进行分子分型,同时对10株B. cereus进行全基因组测序（WGS）,利用BioNumerics软件对测序数据进行拼接组装、多位点序列分型（MLST）、毒力基因、核苷酸多态性（SNP）分析。结果 本起食源性疾病事件中分离自不同食品的12株B. cereus的PFGE分型显示为8种带型,其中3株ST1435型 B. cereus带型相同,且SNP分析显示这3株B. cereus只有3个碱基差异;2株ST24型B. cereus 的PFGE带型完全相同,且SNP分析显示只有1个碱基差异,提示3株ST1435和2株ST24菌株分别为克隆株。2株ST24型B. cereus携带溶血性肠毒素hlbA、hlbC和hlbD,另有4株B. cereus携带腹泻毒力基因（hlbA、hlbC和hlbD）。结论 B. cereus引起的食源性疾病事件比较复杂,污染源也比较复杂,因此加强原辅料监测、从业人员的卫生监测、环境和设备及环节的清洗消毒,对预防控制由其引起的食源性疾病事件非常重要。