重组木聚糖酶XynA的酶学性质及其固定化

木聚糖酶在木聚糖的降解方面具有关键作用,其中酸性木聚糖酶在饲料加工、酿酒、果汁澄清等工业中具有极大应用潜力。该文通过分子克隆技术将酸性木聚糖酶XynA基因在大肠杆菌中进行异源表达,研究其酶学性质,并通过响应面优化试验得到最佳的固定化酶条件。成功将酸性木聚糖酶XynA基因重组于大肠杆菌BL21(DE3),发现该木聚糖酶具有较好的耐酸性,最适p H值为5.0,在pH值为4.5～5.5范围时保持酸稳定性,其相对酶活力能够达到62.37%以上;其最适温度为55℃,且35℃～45℃条件下较稳定;同时采用响应面分析法来优化木聚糖酶的固定化条件,当壳聚糖浓度为2.0%、交联时间为3 h、固定化时间为12 h条件时,其酶活回收率为39.45%。     

康氏木霉木聚糖酶酶学性质的研究

对1株康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适反应pH为6．0；该酶在20-60℃范围内能保持80％以上的酶活，在pH3．0-10．0的范围内能保持85％以上的酶活；金属离子Ba^2＋、Fd^2＋、Al^3＋，12mmol／L的Cu^2＋和Fe^3＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶反应则有促进作用。     

大肠杆菌工程菌产木聚糖酶工艺优化及酶学性质研究

对大肠杆菌工程菌产木聚糖酶的工艺进行优化,并对木聚糖酶的酶学性质进行研究。确定了提取工艺路线,即依次经过细胞破碎(高速珠磨法)、固液分离及除菌(中空纤维膜过滤)、超滤浓缩及烘干包衣步骤后得到肠溶木聚糖酶产品。该产品热稳定性好,在pH 2.5磷酸盐缓冲液中释放度为5.0%,在pH 5.5磷酸盐缓冲液中释放度为98.5%,产品外观光泽性好,能够很好地满足饲料酶市场要求。该木聚糖酶的最适pH值为6.4,最适温度为55℃。该酶具有较好的热稳定性,含水分17%的酶在90℃条件下2.5min仅失活13.6%。对木聚糖酶降解产物进行检测表明该木聚糖酶是一种内切酶。     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化,获得接近电泳纯蛋白.通过SDS PAGE测得相对分子质量为24500.木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白,含有质量分数20.24%的糖.O 糖基化能增加木聚糖酶的活性,O 和N 糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性.5min反应,草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高.在此条件下,该酶的Km值为3.87mg/mL,Vmax为1250IU/mg.纯酶的稳定pH值为6.54,57℃时半衰期为1h.     

基于宏基因策略的新颖木聚糖酶基因cbxynA克隆及其重组酶酶学性质

研究构建了库容量约为1.3×104个克隆子且外源片段的总长为30 Mb的土壤宏基因组文库。基于功能策略,从文库中筛选到分解木聚糖底物的阳性克隆子。该克隆经序列分析发现一个822 bp的潜在的编码木聚糖酶基因(cbxynA)的开放阅读框,其编码的氨基酸序列与来自古细菌属编码的木聚糖酶的相似度最高仅为45%,说明该序列为一条未知的新序列。cbxynA在大肠杆菌中的重组表达产物的分子质量为29 ku,与预测结果一致。对其原核表达条件进行优化,结果表明:质粒在培养5 h后加入0.7 mmol/L IPTG,23℃下诱导25 h后表达,木聚糖酶活力为52 U/mL,较初始值提高4.3倍。而重组酶(CBXYNA)最适pH和最适温度分别为5.2和55℃。金属离子Na+、K+、Li+、Ca2+能提高该酶的酶活,而另外一些金属离子如Mg2+、Mn2+、Zn2+、Fe3+、Al3+、Cu2+能抑制其活性。该酶以水溶性玉米芯木聚糖、燕麦木聚糖、水不溶性木聚糖为底物时,其相对酶活力分别为162%,139%,74%。     

枯草芽孢杆菌B2中果胶酶和木聚糖酶的酶学性质研究

对Bacillus subtilis B2产的果胶酶和木聚糖酶进行了初步的酶学性质分析,得出木聚糖酶的酶学性质是:最适温度为55℃,最适pH是6.0,在40℃以下具有较好的热稳定性,在pH3.0~11.0时有很好的稳定性,酸碱对其酶活的影响不大;果胶酶的酶学性质是:最适温度为60℃,最适pH是8.5,在60℃以下具有较好的热稳定性,在pH3.0~pH11.0时有很好的稳定性,酸碱对其酶活的影响不大。     

粗糙脉孢菌木聚糖酶酶学性质的研究

对粗糙脉孢菌木聚糖酶粗酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该木聚糖酶的最适反应温度50℃、pH值为5.8,温度低于50%、pH 4.6～7.4时该酶稳定性较好;金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+对该酶的活性有促进作用,K+、Na+、Pb2+、Cu2+、Fe3+、Al3+对酶的活性有抑制作用;EDTA、SDS、DMSO对该酶活性的抑制作用较小;以木聚糖为底物的酶动力学常数Km和Vmax值分别为1.30g/L和1.35μmol/(min·mL).     

真菌木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

本实验通过土壤稀释涂布法,经过初筛、复筛,筛选出了两株酶活力较高真菌菌株C4 和G1,在此基础上对它们生长的最佳碳源选择、酶学性质进行了研究。结果表明：菌株C4 产酶的最佳碳源为玉米芯－麸皮,培养24h 就可以达到产酶高峰,其酶活力达6582.29U/ml。此酶反应最适温度为40℃,在50℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,并且pH 稳定性比较好;菌株G1 产酶的最佳碳源为玉米芯,培养96h 就可以达到产酶高峰,其酶活力到达6301.04U/ml。此酶反应的最适温度是40℃,在40℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,但pH 值稳定性不如菌株C4。     

白腐真菌产木聚糖酶发酵条件的优化及酶学性质研究

通过正交实验对白腐真菌Pleurotus ostreatus SYJ042产酶条件进行了优化,研究了该酶的酶学性质。结果表明:最适发酵条件为:碳源为5%的麸皮和玉米芯(1:1),氮源为0.5%的蛋白胨,接种量为每50mL发酵液接4块菌丝块,发酵时间为8.5d。该酶的最适温度是50℃,最适pH为5.4;Zn2+、Ca2+对酶活性影响较小;Ag+、MnO2-4影响较大。     

细菌木聚糖酶粗酶的提取及性质的研究

在 2 0℃条件下 ,采用相对饱和度为 50 %的 (NH4) 2 SO4一步盐析并经 4 5～ 50℃烘干 1 0h得到木聚糖酶粗酶粉 .初步研究了该酶的一些基本性质 ,结果表明 ,该酶在 55℃下 ,pH值为 4 .6～1 0 .5之间较稳定 .最适作用温度与 pH值分别为 50℃和 7.6.该粗酶产品适合造纸工业的纸浆处理 .     

F/10木聚糖酶研究进展

木聚糖酶广泛应用在食品加工、纸浆漂白、饲料添加剂、工业乙醇的生产,生物转化等领域.相对于G/11木聚糖酶,F/10家族在稳定性、耐酸性和耐碱性方面更有优越性,本文综述了该家族木聚糖酶的相关基因,酶分子空间结构及催化机理等基本特性,特别对热稳定性属性及基因工程改造其稳定方面进行了详细说明,为进一步进行酶分子改造和应用提供借鉴.     

几种酚酸对木聚糖酶活力的影响

采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定酶解后还原糖释放量,研究4种不同酚酸(阿魏酸、对-香豆酸、水杨酸、单宁酸)对木聚糖酶活力的影响。结果表明:阿魏酸、对-香豆酸、水杨酸能提高木聚糖酶活力,当这3种酚酸质量浓度为0.75mg/mL时,酶活力分别提高65.59%、46.21%和12.83%。单宁酸抑制木聚糖酶活性,添加量为0.50mg/mL时,抑制率达37.18%。动力学研究表明:上述4种酚酸均能提高酶与底物的亲和力,对-香豆酸能提高酶反应速度,但单宁酸会使反应速度显著降低。     

Influence of double enzymic hydrolyses on gluten functionality

Functional properties of chemically deamidated and/or double enzymically‐treated gluten were studied. Performances of the modified glutens were compared to those of egg white proteins, casein, deamidated gluten and gluten submitted to deamidation plus single enzymic treatment. Higher nitrogen solubility index (>90%) was obtained after treatment of the gluten with the sequence pepsin + alcalase and deamidation + pepsin + papain. The sequence pepsin + papain has permitted the production of a gluten with foaming properties close to those of egg white. Deamidation + papain treatment leads to interesting emulsifying properties although different from those of casein. The results show that modified glutens present thresholds in the degree of enzymic hydrolysis (DH) for foaming and emulsifying properties (respectively 1.3% and 2.0%). For higher DH the stability decreases. © 1999 Society of Chemical Industry     

待测酶液制备方法对饲用木聚糖酶活性测定结果的影响

探讨了浸提倍数、稀释倍数、浸提次数对饲用木聚糖酶活性测定结果的影响。研究表明：在测定条件一致的情况下，酶制剂浸提倍数、稀释倍数、浸提次数对酶活测定结果均有显著影响。浸提倍数在20-80倍时测得的酶活处于上升趋势；待测酶液稀释1000倍时，测得的酶活最高，稀释800-1000倍时酶活较稳定；从实验操作和浸提效果看，1次性浸提就可以满足测定要求。     

脂肪酶在磁性纳米粒子上固定化及其酶学性质研究

以Fe_3O_4纳米粒子为载体,碳化二亚胺为交联剂,共价结合制备固定化脂肪酶,探讨脂肪酶固定化影响因素,并对固定化脂肪酶性质进行研究;运用TEM测定其粒径,用FTIR检测脂肪酶—Fe_3O_4磁性纳米粒子耦联。结果表明,脂肪酶固定化适宜条件为:200 mg磁性纳米粒子,加入2 ml 2.5mg/mL脂肪酶磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH7.5),在4℃超声分散45 min,固定化酶最适pH为7.0,最适温度为45℃,均与游离酶相似;与游离酶相比,该固定化脂肪酶热稳定性明显提高,并具有良好操作和存储稳定性。     

金属离子对木聚糖酶制备阿魏酸糖酯的影响

采用木聚糖酶制备小麦麸皮中的阿魏酸糖酯。结果表明：添加金属离子会明显影响木聚糖酶的活性,K⁺、Ca²⁺、Mn²⁺、Ag⁺、Zn²⁺、Co²⁺ 对木聚糖酶有激活作用,其中Mn²⁺、Ag⁺、Zn²⁺、Co²⁺ 有较强的激活作用;而EDTA、Sn²⁺、Fe²⁺、Fe³⁺、Hg²⁺、Mg²⁺ 对木聚糖酶有抑制作用,而且高浓度的金属离子也会抑制木聚糖酶的活性。在制备阿魏酸糖酯时添加一定浓度对木聚糖酶有激活作用的金属离子,可以降低木聚糖酶的添加量。     

脂肪酶和纤维素酶/木聚糖酶混合用于ONP脱墨

将脂肪酶和纤维素酶/木聚糖酶以不同比例混合用于旧报纸(ONP)的脱墨实验.结果表明,当脂肪酶与纤维素酶/木聚糖酶混合酶(50/50)以40/60的比例混合时,能获得较佳的脱墨效果,浆料的裂断长、耐破指数和撕裂指数分别比纤维素酶/木聚糖酶(C/X)脱墨浆提高3.2%、7.4%、和7.1%,得率高于纤维素酶、木聚糖酶及二者的混合酶脱墨浆,滤水性能也得到了改善.混合酶中脂肪酶、纤维素酶和木聚糖酶用量分别比单一酶脱墨节省了60%、70%和70%.     

Influence of environmental conditions on thermal stability of recombinant Aspergillus aculeatus pectinmethylesterase

The thermal stability of purified recombinant Aspergillus aculeatus pectinmethylesterase (PME) in different media was studied. The influence of pH, ionic strength and additives (salts and polyols) was evaluated. At pH 5.0 and a high ionic strength (0.50 M), the enzyme showed a high thermostability (inactivation at temperatures 60 °C). Interestingly, an enhancement of its heat stability was observed at pH 7.0 and temperatures above 55 °C, this behaviour was reflected in an atypical evolution of structural changes in the overall conformation of the enzyme, according to FTIR spectroscopy results. Recombinant A. aculeatus PME thermal inactivation at pH 7.0 could be described by a fractional-conversion model. Addition of NaCl increased the thermal stability at pHs 5.0 and 7.0, while addition of CaCl₂ had no influence. With regard to sugars (sucrose, trehalose, glucose and maltose) and polyols (sorbitol, lactitol and glycerol) addition, at the same concentration and pH, the polyols showed a higher protective effect than sugars. Also, the thermostability of recombinant A. aculeatus PME increased with the additive concentration, although the source of OH groups was the main parameter involved.