还原前后大豆球蛋白酶解物的性质

主要研究了还原前后大豆球蛋白不同酶解物的抗氧化特性,首先制备了不同的大豆球蛋白酶解物,然后对酶解物进行了表征(巯基含量、水解度、分子量等),并研究了还原前后不同酶解物的抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、铁还原能力及二价铁螯合能力)以及抗氧化活性与巯基含量的关系,结果表明还原后的大豆球蛋白具有较好的酶解特性,还原后酶解物具有较高的巯基含量和抗氧化活性,还原后酶解物的DPPH自由基清除能力和铁还原能力与巯基含量具有显著相关性,二价铁螯合能力与巯基含量也呈现一定的相关性。     

超声预处理对β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化性的影响

研究比较超声预处理前后β-伴大豆球蛋白的结构,表面疏水性和β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化活性的变化。超声预处理显著提高了β-伴大豆球蛋白酶解物的抗氧化活性(p0.05),当β-伴大豆球蛋白经过超声功率100 W,超声时间30 min,超声温度50℃处理后,结构变化最显著且其酶解物抗氧化活性最高。β-伴大豆球蛋白经过超声预处理后,在280 nm附近的紫外吸收峰增强,α-螺旋结构含量最多增加3.14%,β-转角结构含量最多增加1.22%,β-折叠结构含量最多减少4.17%,埋藏在疏水环境中的酪氨酸和色氨酸等疏水基团从分子的内部展露到分子的表面,提高了蛋白质的表面疏水性,这可能是β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化活性提高的主要原因。因此,超声预处理是一种辅助提高β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化能力行之有效的方法。     

2种蛋白酶酶解曲拉干酪素条件优化及抗氧化性比较

以曲拉干酪素为原料、水解度为指标,在酶解时间、酶解温度、pH值、曲拉干酪素质量浓度、酶添加量单因素试验基础上,采用响应面试验对碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化,并对2 种酶解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率,Fe2＋、Cu2＋螯合能力和还原力等抗氧化性指标进行比较。结果表明,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分别在酶解时间3.8、2.5 h,酶解温度49.8、47.8 ℃,曲拉干酪素质量浓度60、35 g/L,pH 8.5、7.5,酶添加量140、2 900 U/g时水解度最大,为24.25%和13.57%。碱性蛋白酶解液超氧阴离子自由基清除率、Fe2＋螯合能力显著低于胰蛋白酶解液（P＜0.01）;羟自由基清除能力高于胰蛋白酶解液（P＞0.05）;2 种蛋白酶酶解液在酶解液质量浓度1～5 mg/mL时,Cu2＋螯合能力、DPPH自由基清除率和还原力随质量浓度均呈上升趋势,Cu2＋螯合能力低于Fe2＋螯合能力（P＞0.05）,DPPH自由基清除率和还原力二者差异显著（P＜0.01）。2 种蛋白酶对酶解物抗氧化性指标影响不同,碱性蛋白酶酶解物抗氧化性相对较优。     

大豆球蛋白酶解物的抗氧化性及汞离子结合特性的研究

以未还原大豆球蛋白水解物为对照,研究了还原大豆球蛋白胃酶酶解物的抗氧化性及汞离子结合特性。结果表明:还原蛋白酶解物巯基含量为117.5μmol/g,是未还原蛋白酶解物的76.8倍。还原蛋白酶解物分子质量更小,疏水性与未还原蛋白酶解物相差不大。还原蛋白酶解物对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基清除的IC50分别为18、20和0.7 mg/m L,当质量浓度为2 mg/m L时,Fe3+还原能力为0.557,汞离子结合量为8.02 mg/g,还原蛋白酶解物的抗氧化性和汞离子结合能力显著优于未还原酶解物。说明还原大豆球蛋白酶解物具有一定的汞离子解毒潜能。     

大豆球蛋白酶解物清除DPPH自由基活性的研究

以7S和11S大豆球蛋白为原料,用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶制备大豆球蛋白酶解产物,分别测定其DPPH(1,1-二苯基苦酰基苯肼)自由基清除活力和水解度,从5种蛋白酶中筛选出碱性内切蛋白酶酶解物的清除活力最高,且相同水解时间的水解度最大.选择碱性蛋白酶为最佳水解酶,利用正交试验优化了其最佳水解条件,碱性内切蛋白酶水解7S和11S大豆球蛋白的最佳条件为:温度55℃,pH 8.0,酶用量5%,底物浓度4%.结果表明:在最佳水解条件下,7S大豆球蛋白酶解物的DPPH自由基清除活力比11S大豆球蛋白酶解物的高.     

β-伴大豆球蛋白的水解研究

采用Nagano法从豆粕中分离β-伴大豆球蛋白并酶解制备水解肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析β-伴大豆球蛋白水解肽的分子量分布,比较并检测了β-伴大豆球蛋白水解肽和大豆分离蛋白水解肽的体外抗氧化效果。结果显示:在20g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比10000U/g,温度55℃,pH7.5,水解时间4h,水解度为72.7%,明显高于酶解大豆分离蛋白51.4%的水解度,且水解时间更短。β-伴大豆球蛋白水解肽主要为130～1000u的短肽,占肽总量的86.3%,均一性极高。β-伴大豆球蛋白水解肽对O2-.和.OH均有清除作用,清除.OH的能力明显高于大豆分离蛋白水解肽,即β-伴大豆球蛋白的水解肽对大豆肽清除.OH的作用贡献更大。     

大豆β-伴球蛋白多肽抗氧化活性研究

以大豆β-伴球蛋白为原料,利用枯草芽孢杆菌进行发酵制备抗氧化肽,研究发酵时间和浓度对大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活性影响。结果表明,发酵40 h时,大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活力最高,抑制自由基能力最强;在此最佳发酵时间下,当大豆β-伴球蛋白肽浓度为1.6 mg/mL时,对羟自由基清除率最大;浓度为2 mg/mL时,对超氧阴离子自由基清除能力最强。     

扫频超声处理时间对β-乳球蛋白酶解制备多肽抗氧化活性的影响

目的:研究不同扫频超声处理时间对β-乳球蛋白酶解制备多肽抗氧化活性的影响。方法:研究不同的超声预处理时间(10,20,30,60,90 min)对β-乳球蛋白表观结构的影响,以及超声波处理对β-乳球蛋白酶解产物的抗氧化活性、氨基酸组成、分子质量分布和疏水性的影响。结论:超声波处理可显著提高β-乳球蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率、ABTS·清除能力和Fe2+络合能力。随着超声时间的延长,β-乳球蛋白酶解产物抗氧化活性呈先增加后降低的趋势。扫频超声波处理可以提高β-LG酶解产物的疏水性,并且显著增加多肽中的疏水性氨基酸的含量。扫频超声处理10~60 min有利于分子质量为200~2000 u多肽的生成,从而提高其酶解产物的抗氧化活性。粒径分布表明短时间的超声处理(<30 min)引起β-LG粒径减小,大分子蛋白的结构疏松,分子间的疏水性作用力增加;长时间(60~90 min)的超声处理则引起大分子蛋白聚集,疏水性作用力降低,蛋白颗粒粒径增大。     

大豆蛋白酶解过程中聚集行为的研究

主要研究了大豆β-伴球蛋白对大豆球蛋白酶解过程聚集行为的影响。在相同蛋白浓度下使用Alcalase进行酶解时,与β-伴球蛋白、大豆分离蛋白相比,大豆球蛋白聚集现象较为明显,这说明大豆蛋白酶解过程的聚集与蛋白种类有关;改变β-伴球蛋白对大豆球蛋白的添加量进行酶解时发现,β-伴球蛋白添加量越大,大豆球蛋白酶解过程的聚集程度越小,这说明β-伴球蛋白对大豆球蛋白的酶解过程的聚集有抑制作用。高效液相和SDS-PAGE结果表明上清液的分子质量大于聚集物的分子质量,聚集体主要是由分子质量小于5 ku的肽段聚集而成。     

木瓜蛋白酶水解大豆球蛋白的抗氧化性研究

采用木瓜蛋白酶水解大豆球蛋白制备抗氧化肽。以自由基的清除率为评价指标,通过单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件。结果显示:最佳条件为p H7.5,酶和底物比8 000 U/g,水解时间3 h,温度60℃。优组合条件下的羟自由基清除率为77.6%,超氧阴离子的清除率为47.3%。     

不同酶切方式引发大豆蛋白构象变化及功能特性评价

本研究以枯草杆菌碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物为研究对象,借助十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱、荧光光谱、红外光谱解析不同酶切条件下蛋白产物构象变化,并对其乳化性及抗氧化活性等功能特性进行评价。结果表明：酶解促进蛋白解折叠,内部氨基酸暴露,并受到酶切方式的影响;菠萝蛋白酶酶解作用范围宽泛,疏水性氨基酸浓度达到最大值(27.10±0.08)%,氨基酸存在微环境发生改变,形成柔性结构单元,其乳化性及抗氧化性都得到明显改善,为具有最佳功能特性的酶解蛋白;酶特异性作用位点导致酶解作用程度较低的枯草杆菌碱性蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶水解产物功能特性均高于未处理样品。值得注意的是,水解程度最低的胰蛋白酶水解产物呈现优异乳化稳定性,这是因为大豆中胰蛋白酶抑制剂抑制蛋白过度水解,提升蛋白溶解度同时,肽段长度适宜稳定包裹油滴。     

超声预处理对大豆分离蛋白-儿茶素非共价/共价复合物结构及功能的影响

目的:探究超声预处理对大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)-儿茶素非共价/共价复合物结构及功能的影响.方法:对SPI进行超声处理后,在不同pH值(3.0、7.0、9.0、12.0)下与儿茶素通过非共价/共价结合方式制备复合物,并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium do...     

生物解离大豆蛋白酶解物体外模拟消化抗氧化活性变化

挤压膨化大豆在生物解离过程中,通过酶解（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）产生的大豆蛋白酶解物（soybean protein hydrolysate,SPH）有良好的抗氧化活性,因此,需要探索模拟胃肠道（gastrointestinal,GI）消化对蛋白酶解物抗氧化活性的影响。分别以蛋白酶（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）酶解得到的SPH和经过模拟GI消化后的产物作为研究对象,采用水解度、氨基酸组成、分子质量分布、氧化自由基吸收能力（oxidative radical absorption capacity,ORAC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力及2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt,ABTS）阳离子自由基清除能力对样品抗氧化活性进行分析。结果显示：相对于风味蛋白酶酶解,采用碱性蛋白酶进行酶解时抗氧化活性更高;但是经过模拟GI消化后,风味蛋白酶酶解得到的SPH抗氧化活性更高,ORAC为69.15 μmol/mg、DPPH自由基清除能力为27.29%、ABTS阳离子自由基清除能力为56.21%,肽的相对含量更高,为75.86%,并且肽中具有抗氧化活性的氨基酸含量更高,分子质量小于1 kDa的肽相对含量最高,为17.35%。     

11S球蛋白酶解产物功能特性及对猪肉肠品质的影响研究

以中豆36为原料,提取11S球蛋白,用胰蛋白酶进行水解。研究不同水解度酶解产物的乳化性、持水性、持油性等功能特性,比较不同水解度产物添加到猪肉肠中对其质构及得率等的影响。结果表明水解度为12%时,11S球蛋白酶解产物的乳化活性及乳化稳定性最高并且对肉肠质构特性和得率影响最佳。     

绿豆蛋白酶解物抗氧化活性与其结构、氨基酸组成的相关性

本试验以碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶四种不同来源的蛋白酶酶解绿豆蛋白,测定酶解物的抗氧化能力,结合傅里叶红外光谱技术（FTIR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、圆二色谱（CD）以及氨基酸分析仪,分析酶解物的氨基酸组成以及抗氧化活性与结构变化的相关性。结果表明,绿豆蛋白4 h中性蛋白酶酶解物抗氧化能力最强,其DPPH自由基清除率、羟自由基清除率分别达到71.03%、51.94%,TBARS值达到0.4045 mg/L,Fe2+螯合率达到52.31%;结合SDS-PAGE、FTIR、CD等分析得出:绿豆蛋白酶解物的抗氧化能力与其分子量大小、二级结构构象及氨基酸组成变化紧密相关,与绿豆蛋白相比,绿豆蛋白酶解物的α-螺旋结构含量增加了4.12%、β-折叠结构含量降低了19.99%,而抗氧化活性与其α-螺旋含量的增加、β-折叠含量的降低密切相关;影响抗氧化活性的疏水氨基酸增加了0.208 g/100 g,芳香氨基酸增加了0.207 g/100 g,分子量低于10 kDa的小分子量酶解物具有更好的抗氧化性。综合以上研究结果证实绿豆蛋白酶解物活性与其α-螺旋、β-折叠的相关性较大。     

大豆蛋白的酶水解及类蛋白反应对其抗氧化活性的影响

采用Alcalase 2.4L FG 蛋白酶水解大豆蛋白,筛选并制备出ABTS+·清除率最高的水解物,其水解度为14.0%,对ABTS+·清除率为43.6%。以此水解物为底物,以修饰产物的游离氨基减少量为指标,应用响应面分析得到类蛋白反应的优化条件为：酶添加量1037U/g pro、底物质量浓度30g/100mL、温度20℃。在此条件下反应6h,水解物的修饰反应程度和抗氧化活性均为最大。制备反应程度不等的3 个修饰产物,进一步抗氧化活性分析表明：大豆蛋白水解物及其修饰产物的抗氧化活性好于大豆蛋白;修饰产物与水解物的DPPH 自由基清除能力、还原力、超氧阴离子自由基(O2 － ·)清除率差别不显著,但是对羟自由基(·OH)清除率差别显著。     

超声波辅助酶法制备大豆蛋白抗氧化肽的研究

采用超声波辅助木瓜蛋白酶水解大豆蛋白的方法制备抗氧化肽。结果表明,大豆蛋白的最佳水解条件如下:90℃预处理15min,pH6.5,[E]/[S]为7%,超声波处理30min,65℃水解3h,水解度可达19.2%。大豆蛋白肽抗氧化性的高低和水解度的大小没有直接的线性关系,采用此法制备大豆蛋白抗氧化肽的效果较好,具有良好的应用前景。     

Aminopeptidase from Streptomyces gedanensis as a useful tool for protein hydrolysate preparations with improved functional properties

The aim of the present study was to evaluate the efficiency of amino peptidase (AP) from Streptomyces gedanensis to produce protein hydrolysates (PHs) with better antioxidant, nutritional, and functional properties and to compare it with the PHs produced by commercial protease. Three proteins, soy, casein, and wheat protein were employed to produce their hydrolysates by applying 2% (w/w) AP at optimal conditions of pH 8.5 and temperature 55 °C. The results disclosed that the degree of hydrolysis ranges from 15.93 to 20.68% after 6 h showed better antioxidant activity and functional properties such as solubility, foaming properties, and water holding capacity than the commercial protease treated hydrolysates. AP treated PHs were enriched in Glu followed by Leu, Tyr, Lys, Phe, Asp, Met, His, Ile, Ala, and Val. Therefore, S. gedanensis AP would be an attractive microbial AP with high potential for the preparation of PHs which could offer industrial applications especially in the realm of producing food formulations as food additives in medicine and sport. PRACTICAL APPLICATION: AP from S. gedanensis was found to be the most effective enzyme to produce PHs with good antioxidant, nutritional, and functional properties. The antioxidant and essential amino acids of AP treated PHs unveiled that this amino peptidase could give credence to eliminate the bitter taste by hydrolysis of peptides and could offer interesting possibilities for industrial applications, including debittering of protein hydrolysates. The findings could be useful in the food industry especially in the realm of producing food formulations requiring high protein supplements.     

鳕鱼和鲅鱼鱼肉蛋白酶解产物功能特性及抗氧化性

采用风味蛋白酶对鳕鱼和鲅鱼鱼肉进行酶解,研究水解度、pH值及酶解时间对酶解产物功能特性和抗氧化活性的影响.结果表明:随着酶解时间延长,鳕鱼和鲅鱼鱼肉酶解产物的水解度、亚铁离子螯合力逐渐增加,DPPH自由基清除能力逐渐下降;不同pH值下,鳕鱼和鲅鱼鱼肉蛋白酶解产物均具有良好的溶解性和热稳定性;鲅鱼酶解产物的水解度、溶解性、热稳定性和亚铁离子螯合力显著高于鳕鱼酶解产物.