动物双歧杆菌细菌素bifidocin A群体感应合成调控行为分析

bifidocin A是由Bifidobacterium animalis BB04代谢合成的一种新型广谱高效细菌素。为探讨该细菌素的群体感应合成调控行为,本研究通过监测发酵过程中菌体生长及细菌素抑菌活性变化规律,分析菌体密度和细菌素合成的相关性;基于低产细菌素培养模型体系的构建,检测发酵上清液中是否存在群体感应自诱导肽,判断是否存在细菌素合成相关群体感应系统;并通过对发酵上清液中自诱导肽进行提纯和分子质量测定,初步明确其分子特性。结果表明,当菌体细胞达到活菌数为7.31（lg（CFU/mL））时,细菌素才开始合成;发酵过程中,菌体密度与细菌素的合成呈现正相关性;成功构建了低产细菌素培养模型体系,其培养条件为培养温度37?℃、培养基起始pH?5、培养基浓度1/10改良MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基、接种量1%、培养时间24?h;基于此模型体系,确定发酵上清液中确实存在可以诱导细菌素合成的自诱导肽,细菌素bifidocin?A的合成是受群体感应系统调控的;通过对发酵上清液进行超滤管筛分、葡聚糖凝胶柱层析及高效液相色谱层析提纯,获得了高纯度自诱导肽样品;采用基质辅助激光解析电离飞行质谱测定其分子质量为3?587.253?Da。     

细菌素bifidocin A对凝固型发酵乳品质及贮藏性能的影响

目的:bifidocin A是由动物双歧杆菌BB04代谢合成的一种新型广谱高效细菌素,有作为天然食品生物防腐剂的巨大应用潜力。本研究旨在探讨细菌素bifidocin A在凝固型酸奶生产、加工及贮藏过程中的应用可行性。方法:以50 mg/mL乳酸链球菌素(nisin)为对照,设置细菌素bifidocin A的不同添加量(56,28,14 mg/mL)处理组,通过测定凝固型酸奶28 d贮藏期内pH值、可滴定酸度、持水力、活菌数、质构性、流变性、挥发性风味物质含量等指标变化,分析比较细菌素bifidocin A对其产品品质及贮藏性能的影响。结果:添加28 mg/mL细菌素bifidocin A可在28 d贮藏期内维持酸度小于110°T,pH4.2,活菌数高于108CFU/mL,且酸奶持水力及挥发性风味物质含量显著提高。结论:细菌素bifidocin A可作为一种替代乳酸链球菌素的天然防腐剂加入凝固型酸奶中,以提高其产品品质及贮藏性能,其最佳添加量为28 mg/mL。     

硒酸壳聚糖通过线粒体途径诱导A549细胞凋亡的初步研究

本文研究了硒酸壳聚糖(SC)对非小细胞肺癌A549增殖抑制及诱导凋亡作用,并进一步研究了SC对其凋亡前后蛋白差异表达。采用MTT法检测了SC对A549细胞的增殖抑制作用;并用激光共聚焦分别观察了Hoechst33342/PI染色后A549细胞形态的变化以及钙黄绿素染色后细胞线粒体MPTP的开放状况;流式细胞仪检测了SC对A549细胞线粒体跨膜电位的影响;利用2-DE结合MALDI-TOF质谱技术检测了细胞凋亡相关蛋白的差异表达。结果表明:SC对A549细胞具有显著的增殖抑制作用,并在一定范围内呈现时间和浓度依赖性;SC可使A549细胞发生形态改变,使细胞变得不规则,染色质固缩和边集;经SC处理后,细胞的线粒体膜通道逐渐开放;经MALDI-TOF鉴定发现了2个差异表达的蛋白,即抗增殖蛋白(prohibitin isoform 1),细胞内热休克蛋白(heat shock protein)。     

传统牦牛酸奶中产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

采用溶钙圈法对来自青海海南藏族自治区、四川阿坝、甘孜理塘的牦牛酸奶样品的菌株进行分离筛选，采用形态学观察和16S rRNA序列分析进行鉴定；测定筛选菌株上清液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌活性；考察筛选菌株上清液对蛋白酶的耐受性及对抗生素的敏感性，并确定细菌素种类。结果表明，共分离筛选出6株菌（编号为A1～A2及G1～G4），其中菌株A1～A2被鉴定为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus），菌株G1～G4被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）；菌株G3对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌圈直径＞20 mm，且对蛋白酶不耐受，表明该菌株产细菌素，对常见抗生素敏感，经细菌素基因鉴定证实，该菌株产肠球菌素A和肠球菌素P。综上，菌株G3可作为产细菌素益生菌的候选菌株。     

食用色素藻蓝蛋白对非小细胞肺癌A549细胞体外增殖和凋亡的影响

本研究以人类非小细胞肺癌A549细胞系为模型,采用藻蓝蛋白处理体外培养的细胞,分别从细胞存活率、细胞形态、细胞凋亡程度以及周期分布4?个方面阐述了藻蓝蛋白对A549细胞的影响。结果表明,藻蓝蛋白能够显著降低A549细胞的存活率与生长速率（P＜0.05）,引起细胞形态发生非正常改变;同时上调促凋亡基因Bax、Bad,下调抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl的表达而诱导细胞凋亡;此外,藻蓝蛋白能够异常调控细胞周期G1/S转换点相关基因的表达而引起细胞发生G1期阻滞。研究结果揭示了藻蓝蛋白对A549肺癌细胞具有显著的抑制作用,为开发新型抗癌类功能性食品着色剂提供了必要的理论依据。     

枯草芽孢杆菌细菌素A32的抑菌机理研究

将酸沉淀法提取的枯草芽孢杆菌细菌素A32作用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,利用牛津杯法、分光光度法、扫描电镜技术和电导率法、SDS-PAGE电泳法探讨细菌素A32的抑菌活性和抑菌机理。结果显示,细菌素A32对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑菌性,最小抑菌质量浓度为1.25 mg/mL;对指示菌的生长曲线、细胞形态结构、细胞膜渗透性、细胞膜通透性、细胞膜和细胞壁完整性、细胞中蛋白质的合成均有影响;且随着细菌素A32质量浓度的增大,对指示菌的影响也逐渐增大。以上现象表明,细菌素A32的抑菌性主要是通过破坏革兰氏阴、阳性菌壁膜的通透性和完整性,使内容物外漏,进而影响菌体代谢和生长。孔道形成理论是细菌素A32对革兰氏阴、阳性菌的作用机理。研究结果为细菌素A32作为绿色生物防腐剂的开发应用奠定了理论基础。     

双歧杆菌细菌素Bifidocin A对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及其机制

Bifidocin A是由Bifidobacterium animalis BB04代谢合成的一种新型广谱高效细菌素。以革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌为测试敏感菌,分析细菌素Bifidocin A的最低抑菌浓度及不同质量浓度下的抑菌效果,并从敏感菌细胞形态与结构、细胞膜的通透性、细胞膜的完整性以及细胞膜质子移动势的变化4个角度分别探讨该细菌素的抑菌作用机制。结果表明,细菌素Bifidocin A对金黄色葡萄球菌CVCC 26112的最低抑菌浓度为0.058μg/m L,抑菌活性较强且存在浓度依赖性;并初步推测其抑菌作用机制是通过耗散细胞膜质子移动势,增加细胞膜通透性,形成孔洞,进而破坏细胞膜完整性,并最终瓦解细胞。     

MALDI-TOF MS方法快速鉴定大肠杆菌及ESBLs菌株检测探索研究

目的研以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)方法检测大肠杆菌,并利用MALDI-TOF MS方法鉴别ESBLs菌株及聚类分析法区分不同分型的ESBLs菌株,探索MALDI-TOF MS方法鉴定大肠杆菌及ESBLs菌株的可行性。方法利用MALDI-TOF MS采集47株大肠杆菌分离株的质谱数据,生成肽指纹图谱,并利用biotyper软件进行菌种鉴定,同时研究其耐药性鉴定结果,并利用聚类分析法研究大肠杆菌ESBLs菌株,最终确定MALDI-TOF MS对大肠杆菌菌种鉴定及ESBLs菌株鉴别的可行性。结果 MALDI-TOF MS方法鉴定大肠杆菌的结果与传统方法及PCR方法检测结果均符合,经MALDI-TOF MS鉴定方法提示为ESBLs菌株的10株大肠杆菌中有9株为ESBLs菌株,且聚类分析法对OXA型ESBLs大肠杆菌具有较好的鉴别能力。结论MALDI-TOF MS方法可以快速、准确地鉴定大肠杆菌,对ESBLs菌株具有一定的筛选鉴别能力。     

Fe 3O 4-COOH纳米材料对大肠杆菌菌株水平的指纹峰确定

通过合成Fe ₃O ₄COOH纳米颗粒提高MALDI-TOF MS对大肠杆菌菌株水平的鉴别,并利用Fe ₃O ₄-COOH纳米对大肠杆菌K-12和大肠杆菌DSM 30083T裂解液中的菌体蛋白进行富集,不仅增加MALDI-TOF MS检测的分辨率和灵敏性,而且可以大大增加大肠杆菌菌株水平的指纹峰,根据实验结果,大肠杆菌K-12有4个匹配的指纹峰,而大肠杆菌DSM 30083T获得8个指纹峰,从而提高MALDI-TOF MS对大肠杆菌菌株水平的鉴别。     

乳酸菌细菌素Avicin A的高效表达及抑菌活性研究

乳酸菌细菌素是一种广谱抑菌素,已成为天然食品防腐剂研究与开发的热点。文章进行了该类细菌素在大肠杆菌中的异源表达,并应用Western-blot鉴定。利用组氨酸标签纯化及Trx-Tag标签的切除,对重组蛋白的抑菌活性进行检测。根据GenBank数据库中公布的细菌素Avicin A基因设计引物,以本实验室分离自酸马乳中的乳酸菌XM-38株为模板,采用PCR方法扩增了细菌素Avicin A片段,利用原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒HIS-Trx-Avicin A,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得了可溶性表达的融合蛋白(HIS-Trx-Avicin A)。SDS-PAGE分析HISTrx-Avicin A蛋白大小约为42 ku,表达量约占菌体总蛋白的19%。经亲和柱层析纯化后,得到纯化的HIS-Trx-Avicin A蛋白,含量180μg/mL。用肠激酶对融合蛋白HIS-Trx-Avicin A进行解离,获得浓度为20μg/mL的目的蛋白Avicin A。对HIS-Trx-Avicin A进行Western-blot鉴定,表明该细菌素蛋白得到了重组表达,对多种菌的抑菌实验表明,该重组蛋白具有良好的抑菌活性,研究的Avicin A为食品添加防腐剂提供了一个切实可行的来源。     

外源CO对采后枣果实链格孢菌浸染过程中蛋白组的影响

为了阐明外源CO处理对链格孢菌(Aternaria alternata)浸染过程中的枣果实蛋白组影响,采用同位素标记蛋白组分析技术测定链格孢菌入侵枣果实过程中枣果实的蛋白质表达水平,鉴定差异蛋白,并对差异蛋白进行基因本体(gene oncology,GO)及基因通路(kyoto encyclopedia of gene...     

Proteome changes of fresh-cut Zizania latifolia during refrigerated (1?°C) storage

The total proteins from the fresh-cut Zizania latifolia during refrigerated storage were extracted and separated by two-dimensional electrophoresis (2-DE). A total of 657 protein spots were detected on the gels, among which 33 spots showed a significant change in protein abundance based on twofold difference. Using MALDI-TOF/TOF, 25 spots were identified, which were classified into five functional categories that included cell structure (32?%), stress response and defense (28?%), ripening and senescence (8?%), signal transduction (8?%), and unclear functional proteins (24?%). Of the 25 differentially expressed proteins, 10 were up-regulated and 15 were down-regulated. Among 10 up-regulated spots, 5 were related to cell structure, 2 to oxidative stress, 1 to ripening and senescence, 1 to signal transduction, and 1 to unclear functional proteins. For the 15 down-regulated spots, 5 were related to stress response, 3 to cell structure, 1 to ripening and senescence, 1 to signal transduction, and 5 to unclear functional proteins. These results indicate that specific proteins expressed in fresh-cut Z. latifolia during storage at 1?°C show a coordinated response to cope with wounding stress caused by fresh-cut processing.     

iTRAQ分析蜂胶乙醇提取物处理烟曲霉中差异蛋白的表达

为进一步探索蜂胶对烟曲霉的抗真菌作用模式,本文采用蜂胶乙醇提取物处理烟曲霉菌丝,采用iTRAQ技术对蜂胶乙醇提取物处理前后的烟曲霉进行蛋白质组相对定量分析,对鉴定出的差异蛋白采用生物信息学技术进行分析。结果表明,蜂胶乙醇提取物处理后的菌株中共鉴定出284个差异表达蛋白,其中123个(43.5%)表达上调,161个(56.5%)表达下调,GO和KEGG功能分析结果表明这些蛋白主要参与了能量代谢、碳代谢无机离子运输、脂质体运输、及信号转导过程。根据COG功能分类,差异蛋白分为能量产生与转化、碳水化合物运输与代谢、细胞周期调控、染色质结构与动力学等21类。其中,表达差异最大的蛋白为Tubulin,上调6倍。蛋白组数据表明,蜂胶乙醇提取物能够干扰呼吸电子传递链、ATP生成和细胞骨架等蛋白表达水平的变化,为蜂胶抑菌机制的研究提供了理论基础。     

Tea polyphenols inhibit Pseudomonas aeruginosa through damage to the cell membrane

This paper aims to delineate the inhibition mechanism of tea polyphenols (TP) toward Pseudomonas aeruginosa by cell membrane damage. Morphological changes in bacteria treated with TP were investigated by transmission electron microscopy, with results indicating that the primary inhibitory action of TP is to damage bacterial cell membranes. TP also increased the permeability of the outer and inner membranes of P. aeruginosa and disrupted the cell membrane with the release of small cellular molecules. A proteomics approach based on two-dimensional gel electrophoresis and MALDI-TOF/TOF MS analysis was used to study the differences in the membrane proteins of TP-treated P. aeruginosa and those of control samples. Twenty-seven differentially expressed proteins were observed in the treated and the control groups. Most of the proteins identified by MALDI-TOF/TOF MS were enzymes (dihdrollpoamide dehydrogenase 50s ribosomal protein, and so on), which may have induced the metabolic disorder of the bacteria and resulted in their death.     

基于iTRAQ技术分析牛初乳与常乳乳清差异蛋白质组

为阐明牛初乳、牛常乳乳清蛋白的差异,利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)蛋白质组学技术对二者进行蛋白质组差异分析,在得到的599 种具有定量信息的乳清蛋白中,鉴定出60 种差异蛋白.将牛初乳与牛常乳乳清丰度差...     

“乌叶”与“兰竹”荔枝转色期果肉的差异蛋白分析

为探索转色期荔枝(Litchi chinensis Sonn.)品质形成过程中蛋白质的变化,应用蛋白质组学技术分析"乌叶"和"兰竹"荔枝品种转色期的差异蛋白质,共发现37个2倍以上的差异表达蛋白,32个差异蛋白被成功鉴定。这些蛋白参与了糖类和能量代谢(21.9%)、抗性胁迫(9.4%)、蛋白质代谢(15.6%)、细胞结构形成(12.5%)、次级代谢(12.5%)、发育调控(12.5%)和未知功能途径(15.6%)等代谢活动。与"兰竹"荔枝相比,"乌叶"荔枝中与糖酵解途径和能量代谢相关蛋白均下调表达,说明在转色期,"乌叶"荔枝中糖类物质降解速率较慢,有利于糖分的积累,形成高糖的品质。同时,"乌叶"荔枝中与细胞结构形成和抗性相关蛋白的上调表达,这有利于"乌叶"荔枝形成果肉质地密集、耐贮藏的良好品质。     

低钾胁迫下烤烟苗期叶片的差异蛋白及其生物信息学分析

  目的  探究低钾胁迫下烤烟苗期叶片的差异表达蛋白, 并对其进行生物信息学分析, 为烟草品种选育与栽培调控奠定基础。  方法  分别在低钾和正常钾环境下培育烤烟高钾品系HKDN-5, 提取苗期烟叶总蛋白, 进行酶解, 液相色谱串联质谱和label-free蛋白定量分析。  结果  (1) 与正常钾相比, 低钾胁迫中发现101个差异表达蛋白(差异倍数大于1.5倍), 其中表达下调的有52个, 上调的有49个。(2)差异表达蛋白主要参与碳水化合物代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等途径。其中, 上调蛋白具有碳水化合物运输和代谢相关功能的数量最多, 下调蛋白具有翻译后修饰、蛋白质转换和伴侣蛋白等相关功能的数量最多。  结论  物质代谢和应激反应相关蛋白在低钾胁迫下发生差异表达。      

猪软骨多糖对滚瓶培养MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其差异表达蛋白的初步研究

本文研究了人乳腺癌细胞MCF-7在滚瓶培养形成大量细胞聚集体时,猪软骨多糖对MCF-7的诱导凋亡作用,并初步研究了其凋亡前后的差异表达蛋白。采用Hoechst 33342/PI染色于共聚焦显微镜下观察细胞的凋亡特征;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;并提取MCF-7细胞的全蛋白,利用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF质谱技术检测差异表达蛋白。结果表明:MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后出现典型的凋亡现象,通过流式细胞仪检测发现在猪软骨多糖作用12 h,24 h的MCF-7凋亡率分别为20.23%和44.7%;同时发现MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后,细胞周期被阻滞在了S期;初步鉴定出2个差异表达蛋白,其中一个为肌动蛋白actin,另一个为抗氧化类蛋白PRDX6。     

驴初乳与常乳乳脂球膜蛋白质组的对比分析

为阐明驴初乳与常乳中乳脂球膜蛋白的差异,利用蛋白质组学技术对二者进行蛋白质组差异分析。在驴初乳和驴常乳中分别鉴定到216 种和215 种乳脂球膜蛋白,并在其中筛选出40 种差异蛋白,包括15 种差异表达蛋白和25 种特异表达蛋白。将驴初乳与常乳中的差异蛋白进行生物信息学分析发现,差异蛋白主要参与的细胞组成为细胞外泌体、胞外囊泡、胞外细胞器等;主要参与的生物过程为对外部刺激的反应过程、细胞增殖过程、血管形态生成过程等;主要参与的分子功能为金属离子结合、阳离子结合、钙离子结合等。此外,这些差异蛋白主要参与补体和凝血级联,为生成IgA而形成的肠道免疫网络等代谢通路。利用蛋白质网络互作分析发现,差异蛋白中存在具有高连接度的关键乳脂球膜蛋白因子。本研究有助了解驴乳脂球膜蛋白的生物学特性,并为驴乳中乳脂球膜蛋白的营养学研究及相关配方乳粉的研发提供理论基础。