应用酶联免疫法检测鱼肉、蜂蜜中氯霉素的残留量

检测鱼、蜂蜜中氯霉素残留,以评价试剂盒性能为目的。用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA法)对鱼肉、蜂蜜中的氯霉素残留量进行了测定。结果表明,标准曲线的R2为0.9943,线性方程y=-0.3668x+0.4353,IC50为0.71μg/L,线性范围为0.05～4.05 ng/mL。鱼肉和蜂蜜中的检测限分别为0.126μg/kg和0.081μg/kg。鱼肉和蜂蜜的添加回收率分别大于88.1%和85.5%,批内变异系数分别小于15.8%、13.6%,批间变异系数小于15.5%、12.3%。与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应率为152.63%,与其他药物的交叉反应率均小于0.01%。该法测定氯霉素灵敏准确,重复性好,特异性高,适合用于检测鱼肉、蜂蜜中的氯霉素残留。     

小分子半抗原直接包被ELISA用于虾肉氯霉素检测

探讨新型氨基化小分子半抗原直接包被ELISA方法检测食品中氯霉素残留的可行性。采用氨基化氯霉素直接包被在经戊二醛活化后的酶标板表面,并通过生物素-链霉亲和素放大系统进一步提高该检测方法的灵敏度。结果表明,氨基化小分子半抗原直接包被ELISA的灵敏度和最低检出限分别为12.9ng/mL和0.7ng/mL,CV%为1.8%~4.5%。新型氨基化小分子半抗原直接偶联ELISA具有灵敏度高,干扰少,检测步骤简便、操作安全,测定结果较准确可靠。     

氯霉素ELISA检测试剂盒的研制及其性能测试

采用包被多克隆抗体直接竞争ELISA法建立了氯霉素残留的酶联免疫分析方法,并构建了氯霉素残留ELISA检测试剂盒.研究结果表明,所选用的抗体对氯霉素亲合力强、特异性高,试剂盒对氯霉素残留检测的线性范围为0.24～250 ng/mL,检测限(IC10)0.47 ng/mL,样品的加标回收率70%～130%.试剂盒性能测试结果表明,其准确性和重现性较好,保存期至少6个月,可用于虾肉、鸡肉、蜂蜜、鲜奶样品中氯霉素残留的批量快速、廉价检测.     

直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B1

建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系数9.2%,以玉米为样品的加标回收率达到100.2%～115.4%。谷物盲样的检测结果显示,该方法与酶联免疫吸附检测试剂盒、高效液相色谱检测结果的相关系数分别为0.9793、0.9851,三者之间无显著性差异,所建立的直接竞争化学发光酶免疫方法可用于谷物样品中伏马菌素B1的大规模快速筛查。     

酶联免疫检测法测定水产品中残留氯霉素的研究

研究了水产品中残留氯霉素的检测方法。采用酶联免疫检测法(ELISA)测定鱼、虾类水产品中残留氯霉素含量,结果表明:检出限为0.009ng/mL,变异系数为3.0%,样品测定的相对偏差为3.4%～7.1%,回收率为92.5%～102.0%。在0.025～2.00ng/mL测定范围内呈良好的线性关系,相关系数R=0.9993。用ELISA测定水产品中氯霉素残留量,实验结果令人满意。     

苏丹红Ⅰ酶联免疫吸附检测方法的建立

应用抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体12D8建立了间接竞争ELISA方法,用于检测辣椒粉中的苏丹红Ⅰ,最低检出限为4.22 ng/mL,检测范围为7.8～125 ng/mL.用体积分数70%甲醇水溶液提取辣椒粉中的苏丹红Ⅰ(80～4 000 ng/g),回收率为52.3%～110%,变异系数为3.2 %～8.9%.     

虾肉中氯霉素的UPLC/MS-MS检测方法研究

建立虾肉中氯霉素残留的超高压液相色谱/质谱/质谱测定方法.用乙酸乙酯提取,蒸干后用蒸馏水溶解残渣,直接过Oasis HLB小柱净化,洗脱液收集吹干后用流动相定容,用UPLC/MS/MS测定.在0.5 ng/mL～10ng/mL浓度范围内,该方法的回收率为71.2%～110%.批内变异系数为6.3%～16.8%.批间变异系数为14.3%～19.7%.该方法测定虾肉中氯霉素的最低检测限为0.1 ng/L.     

直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶

建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为：利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质量浓度为0.8μg/mL,酶标抗体2000倍稀释,竞争反应25min;所建立的方法分析灵敏度为2.96ng/mL,批内变异系数小于8.32%,批间变异系数小于13.4%,以猪肉为样品的分析回收率为75.6%～103.7%,与其他结构类似物未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9922、检测线性范围为4.14～244ng/mL、检测时间为25min,可在实际生产中应用。     

纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立

目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术（AlphaLISA）建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007～100ng/mL,批内批间变异系数均<5%。不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%～110%、67%～100%、74%～100%。结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。      

纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立

目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法.方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能.结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007～100ng/mL,批内批间变异系数均<5%.不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%～110%、67%～100%、74%～100%.结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.     

直接竞争酶联免疫吸附法检测虾过敏蛋白

目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12～128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%～98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。     

直接竞争ELISA法快速测定水产品中6种氟喹诺酮类药物

采用过碘酸钠法将抗环丙沙星单克隆抗体（MAb-CIP）与辣根过氧化物酶（HRP）偶联制备酶标抗体MAbCIP-HRP,建立了检测水产品中6种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争酶联免疫吸附分析方法（dcELISA）,考察了包被原浓度、竞争反应时间和有机溶剂等因素对方法灵敏度的影响。结果表明:在优化的反应条件下,所建立的dcELISA针对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星和双氟沙星6种氟喹诺酮类药物的检测限（LOD）均不超过0.5ng/mL,线性范围（IC20^IC80）在1.0¹2.1ng/mL之间;对虾、鳗鲡和鲫鱼三种水产样品中添加5.0、10.0和20μg/kg时,加标回收率为70.4%¹04.1%,相对标准偏差为5.0%¹4.7%;本方法可用于水产品中氟喹诺酮类（FQs）药物多残留的快速测定。      

Sensitive enzyme-linked immunosorbent assay and gold nanoparticle immunochromatocgraphic strip for rapid detecting chloramphenicol in food

Antibody specific to chloramphenicol (CAP) was produced from rabbit that had been immunized with CAP-keyhole limpet hemocyanin (KLH). Using the antibodies, we established a sensitive direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay (dcELISA) and a gold nanoparticle immunochromatographic strip (immunostrip) for detection CAP in food samples. In the dcELISA, CAP at levels of 0.15 ng/ml causes 50% inhibition (IC₅₀) of the binding of CAP-horseradish peroxidase to the antibodies. The overall analytical recoveries of CAP (0.25–100 ng/g) added to the honey or milk samples in the dcELISA were 81.9 and 73.7%, respectively. Onsite determination of CAP was accomplished by immunostrips with a detection limit of 0.5 ng/ml and completed within 10 min. Carefully studying 10 honey and 6 milk samples using the dcELISA and immunostrip indicated that all examined samples were negative for CAP. The presented dcELISA and immunostrip methods are sensitive enough for the rapid determination of CAP in the samples.     

沙丁胺醇直接竞争ELISA 法快速测定

建立沙丁胺醇的直接竞争ELISA(dcELISA)快速检测方法,采用高碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记沙丁胺醇单克隆抗体,棋盘滴定法确定包被抗原质量浓度和抗体稀释倍数,通过单因素试验,考察反应体系中表面活性剂、离子浓度、甲醇体积分数、pH 值因素对dcELISA 性能的影响,确定最优检测条件,同时考察方法的特异性。结果表明：酶标抗体克分子比为2.1 时偶合物的滴度最高,最佳反应条件为包被抗原质量浓度1μg/mL,酶标抗体稀释2560 倍,0.01mol/L、pH7.4 的磷酸盐抗体稀释液(PBS)中含体积分数0.05% 的Tween-20、0.5mol/L NaCl溶液和体积分数5% 的甲醇时dcELISA 具有最高的灵敏度和最好的稳定性,所建立方法的IC50 为10.3ng/mL,检测限为0.049ng/mL,线性范围0.3～76.30ng/mL,批内变异系数13.8%,批间变异系数为22.38%,与克伦特罗交叉反应率为321.18%,与溴布特罗交差反应率为29.09%,与其他结构类似物没有明显交叉反应。本研究所建立的dcELISA 可用于沙丁胺醇和克伦特罗的多残留检测。     

可视化微阵列蛋白芯片法同时检测蜂蜜中3种农药残留

目的建立可视化微阵列蛋白芯片法同时检测蜂蜜中多菌灵、啶虫脒、蝇毒磷3种农药残留含量的分析方法。方法依次向制备好的微孔板芯片里加入50μL标准品工作液和50μL相应的抗体,在25℃、600 r/min下反应30 min;再向每孔中加入50μL纳米银标记的羊抗鼠IgG, 37℃、600 r/min下反应30 min;最后显色并用芯片专用软件(MiELISA)进行自动化分析。结果该方法对多菌灵、啶虫脒、蝇毒磷的定量检测范围分别为0.4~6.4、0.3~4.8、0.75~12 ng/mL,相关系数r>0.99,检测限分别为3.21、2.47、2.52 ng/mL,准确度为83.6%~126.4%,变异系数均<10%,且三者之间具有极低的交叉反应;向不同种类的空白蜂蜜中添加2种不同浓度的标准品时,检测结果具有较高的准确度和重复性。结论本研究建立的可视化微阵列蛋白芯片检测法操作简便,检测限低,准确度、重复性、特异性均很好,且具有高通量、多指标同时检测等优点,适用于蜂蜜中多菌灵、啶虫脒、蝇毒磷3种农药残留同时检测。     

化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ

为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析（chemi luminescent enzymeimmunoassay,CLEIA）法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156～5 ng/mL,最低检测限为0.078 9 ng/mL,IC50为0.679 ng/mL。CLEIA回收率为75.08%～112.18%,变异系数为8.89%～15.61%;通过与酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。     

An Enhanced Direct Competitive Immunoassay for the Detection of Kanamycin and Tobramycin in Milk Using Multienzyme-Particle Amplification

Kanamycin (Kan) and tobramycin (Tob) are widely found in many foods of animal origin, including milk. More rapid, simple, and sensitive methods are urgently needed to monitor antibiotic residues in milk. An enhanced direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay (dcELISA) based on gold nanoparticles (AuNPs)/horse radish peroxidase-Kan (HRP-Kan) was developed. A monoclonal antibody (Mab) against Kan was developed by classic hybridoma technology. The Mab had higher cross-reactivity with Tob (99.07%) and no cross-reactivity with other related antibiotics (<?0.5%). A novel multienzyme probe was synthesized based on AuNPs modified using HRP-Kan. The Mab against Kan, fixed by a goat anti-mouse antibody, was competitively bound by AuNPs/HRP-Kan and Kan in samples. After optimization, the limit of detection of the enhanced dcELISA was 0.022 ng/mL, representing a fivefold improvement when compared to that of conventional dcELISA (0.13 ng/mL). The recoveries of Kan and Tob in milk samples varied from 81.0 to 121.0% and 86.4 to 123.9%, respectively. Kan or Tob was found to be present at concentrations of 0.352–0.548 ng/mL in five milk samples from local markets. The results by the enhanced ELISA and UPLC-MS/MS had good correlation. It was suggested that the enhanced dcELISA, based on AuNPs/HRP-Kan, has higher sensitivity and reliable reproducibility, and thus, this could be used to detect trace contaminants.     

毒死蜱单克隆抗体制备及icELISA检测方法优化

目的制备毒死蜱单克隆抗体,建立icELISA(间接竞争酶联免疫吸附方法)检测方法并对其进行优化。方法以毒死蜱为基础物质,制备半抗原CPF-H1和CPF-H2,偶联蛋白制备人工抗原,进而通过免疫、细胞融合、筛选得到特异性的单克隆抗体,建立毒死蜱的icELISA检测方法,并对其分析条件进行优化。结果质谱鉴定结果表明毒死蜱半抗原制备成功;半抗原偶联蛋白,紫外全波长扫描鉴定人工抗原制备成功;免疫动物、细胞融合并制备单克隆抗体;建立了icELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:PBST为标准品稀释液,包被抗原最佳稀释倍数为1:1000,抗体最佳稀释倍数为1:1000,一抗反应最佳时间为40 min,二抗反应最佳时间为30 min,制得毒死蜱标准曲线,毒死蜱对抗体的IC_(50)为73-25 ng/mL,线性范围IC_(20)~IC_(80)为32.52~260ng/mL,LOD为19.34 ng/mL。结论本研究为毒死蜱快速检测技术奠定了理论基础,对保障人们的身体健康具有重要的意义。     

恩诺沙星化学发光免疫分析试剂盒的研制

主要研制一种基于鲁米诺-辣根过氧化物酶体系的化学发光免疫分析试剂盒,用于检测食品中的痕量恩诺沙星残留。反应条件优化结果为:最佳包被抗原浓度为0.5ng/mL,最佳抗体稀释倍数为1:2000,药物稀释液为0.01mol/L的PBST溶液,一抗反应时间为30min。研究结果显示:本文研制的试剂盒的回归曲线方程是y=-22842x+172936,检测线性范围是0.024～2.76ng/mL,IC50为0.106ng/mL,对蜂蜜、牛奶、鱼肉和虾肉样本的添加回收率在96%～116%、90%～97%、92%～112%、86%～112%之间,批内和批间变异系数均小于15%,试剂盒在4℃下有效期为180d。      

间接竞争化学发光酶联免疫分析法检测番茄酱和果汁中异细交链孢菌酮酸

针对番茄酱和果汁中链格孢霉菌毒素污染问题,建立异细交链孢菌酮酸(iso-tenuazonic acid,ITe A)间接竞争化学发光酶联免疫分析法。通过棋盘法和单因素试验确定最佳包被原质量浓度为15.6 ng/m L、抗体质量浓度为稀释96 000倍、缓冲体系pH 7.4、竞争反应时间和二抗反应时间分别为40 min和50 min。方法IC50为2.13 ng/m L,线性范围为0.50~9.12 ng/m L,检测限为0.10 ng/m L,与结构功能类似物交叉反应率均小于0.1%,样品添加回收率在78.60%~110.83%之间,变异系数均小于15%。本方法适用于样品中ITe A污染的特异性快速筛查。