环介导恒温扩增法(LAMP)检测金黄色葡萄球菌

建立一种能够快速准确地检测金黄色葡萄球菌的LAMP方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因设计了引物,然后进行LAMP反应条件的优化、特异性和灵敏度的检测并与实际样品进行检出率的比较。LAMP方法特异性好,最佳反应温度为61℃,只对金黄色葡萄球菌进行扩增;灵敏度高,金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为8～9cfu/mL时仍能检出。LAMP方法检测金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌的新方法。     

环介导恒温扩增法(LAMP)检测金黄色葡萄球菌

建立一种能够快速准确地检测金黄色葡萄球菌的LAMP方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因设计了引物,然后进行LAMP反应条件的优化、特异性和灵敏度的检测并与实际样品进行检出率的比较。LAMP方法特异性好,最佳反应温度为61℃,只对金黄色葡萄球菌进行扩增;灵敏度高,金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为8～9cfu/mL时仍能检出。LAMP方法检测金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌的新方法。      

环介导等温扩增技术快速检测肉中金黄色葡萄球菌

应用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术建立了对肉中金黄色葡萄球菌检测的方法。实验中,使用了最新的Bst 2.0 Warm Start DNA聚合酶完成LAMP扩增反应,并针对金黄色葡萄球菌所特有的保守性耐热核酸酶基因（nuc）设计得到了一套LAMP扩增引物。对LAMP法和PCR法的检测灵敏度进行了比较,同时对人工污染肉中的金黄色葡萄球菌进行检测。结果表明：所建立的LAMP法能够特异性的检测金黄色葡萄球菌,并且检测金黄色葡萄球菌纯菌的灵敏度为2.01×10~0CFU/m L,是普通PCR检测灵敏度的100倍。在检测肉中金黄色葡萄球菌时,检测限为2.01×10~1CFU/m L。因此,本实验所建立的LAMP法检测肉中金黄色葡萄球菌的方法,具有灵敏、快速以及简便等的优点,是一种具有很好的发展前景的检测手段。     

金黄色葡萄球菌两种检测方法的比较研究

目的比较Baird-Parker平板计数法和3M Petrifilm~(TM)测试片法检测金黄色葡萄球菌的优缺点。方法采用GB 4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、SN/T 1895-2007《食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法Petrifilm~(TM)测试片法》检测金黄色葡萄球菌菌悬液,并对结果进行分析比较。结果在高浓度菌液(102 CFU/mL)时,国标法和测试片法检测金黄色葡萄球菌有显著差异,测试片法计数较困难,国标法检测结果值更准确,但测试片法在简便性、检测时间等方面都优于Baird-Parker法。结论对不同样品进行检测时应注意根据实际金黄色葡萄球菌污染程度选择合适的方法。     

PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌的研究

近年来,金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件频发,这就需要建立一种快速准确地检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。传统方法检测食品中金黄色葡萄球菌活菌存在很多缺点。由于细胞死亡后其DNA依然能够存活许久,所以传统方法不能有效区分DNA来自死菌还是活菌。通过荧光染料PMA与快速检测技术LAMP相结合的方法快速、灵敏的检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌,并对死/活菌进行区分。根据金黄色葡萄球菌nuc基因设计引物,并对LAMP反应体系及PMA-LAMP方法进行优化,同时优化了灭菌乳中提取DNA的方法。在纯培养的金黄色葡萄球菌中,PMA-LAMP方法检测灵敏度为3.2CFU/mL,PMA-PCR方法的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL;对人工污染灭菌乳中的金黄色葡萄球,PMA-LAMP方法检测灵敏度为5×101CFU/mL,而PMA-PCR方法检测灵敏度为5×103CFU/mL。整个反应需要大约6h,说明PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌活菌的新方法。     

肉制品微生物检测中金黄色葡萄球菌监测数据分析

现有的金黄色葡萄球菌监测数据分析方法存在精度低、完整度差的缺陷。针对上述问题,提出肉制品微生物检测中金黄色葡萄球菌的监测数据分析方法。根据金黄色葡萄球菌监测数据分析的需求,采用荧光定量PCR法对肉制品中的金黄色葡萄球菌进行快速检测,对检测中的金黄色葡萄球菌数据进行提取并分析。通过模拟实验进行数据分析,与现有的金黄色葡萄球菌监测数据分析方法相比较,发现提出的金黄色葡萄球菌监测数据分析方法极大的提升了分析的准确度与完整度,结果表明,所提出的金黄色葡萄球菌监测数据分析方法具有较好的分析性能。     

Mini VIDAS与国标法检测金黄色葡萄球菌的比较及其在食物中毒中的应用

笔者使用Mini VIDAS方法和GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄球菌,并对二者进行比较。GB4789.10-2010第一法(国标法),只检验金黄色葡萄球菌,对可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定,应检验其肠毒素。利用Mini VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素与检测金黄色葡萄球菌致病菌相比较,从检测时间、检出率、中毒判断等方面来说明检测肠毒素的重要性。Mini VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素检测时间一般为25.5小时,最快只需要90分钟,而GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄球菌平均检测时间为78小时,而且检出率较前者低。可见,Mini VIDAS能在较短时间内直接检出金黄色葡萄球菌肠毒素,并克服了食物中毒时致病菌已死,无法检出,造成判断失误的弊端。     

金黄色葡萄球菌三种定量检验方法的比较

采用GB4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、SN/T1895-2007《食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法PetrifilmTM测试片法》、Brird-Parker琼脂+RPF(兔血浆)快速培养法三种方法检测同一浓度的金黄色葡萄球菌菌悬液,并对结果进行分析比较,结果表明在较低浓度100CFU/mL~102CFU/mL,三种方法计数结果无明显差异,103CFU/mL浓度时,SN/T 1895-2007与快速培养法相近,但均与GB 4789.10-2010有显著差异,且GB4789.10-2010计数值较高。在实际检测工作中,应该根据需要,采用不同的检测方法,使结果更加准确可靠。     

ATP生物发光法评价餐饮具的微生物污染研究

目的对ATP生物发光法与平板计数法在评价餐饮具微生物污染的检出限及检出率进行评价,并对2种方法的相关性进行研究。方法应用3家国内公司生产的ATP生物发光检测仪,分别对不同浓度的ATP标准溶液检测并绘制标准曲线;以不同浓度的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌液及人工接种大肠杆菌的餐饮具作为被检品,分别应用ATP生物发光法和平板计数法进行检测,绘制ATP生物发光法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌检测的标准曲线,并对2种检测方法在人工污染餐饮具检测的相关性绘制曲线。结果 3家公司的ATP生物发光检测仪对ATP标准溶液、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的检出限差异较大;但在某一检测范围内,3家公司ATP生物发光检测仪的检测RLU值与ATP标准溶液、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌量均有良好的线性相关性。3家公司ATP生物发光检测仪对人工接种大肠杆菌餐饮具的检测显示,ATP生物发光法与平板计数法有良好的线性相关性。结论3家公司的ATP生物发光法对ATP、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的检出限存在不同检测仪的仪器误差,且差异较大,目前,ATP生物发光法不能替代传统的平板计数法来评价餐饮具的微生物污染状况。     

能力验证中金黄色葡萄球菌定量检测测量不确定度评定

通过对食品能力验证样品中金黄色葡萄球菌定量检测进行不确定度评定,分析影响金黄色葡萄球菌定量检测的相关因素。根据能力验证作业指导书和GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数进行测定,按照JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》对检测结果进行分析和评定。结果表明检测样品中金黄色葡萄球菌所引入的扩展不确定度为1 025 CFU/mL,重复检测带来的不确定度在评定中贡献较大占主导地位。此评定方法适用于检测条件相近的实验室金黄色葡萄球菌定量检测不确定度评定。     

金黄色葡萄球菌分离培养与胶体金法检测的比较研究

比较分离培养法与胶体金免疫层析法检测金黄色葡萄球菌，对1400份各类标本均为阴性，两种检测方法无统计学意义，另一种结果一致。从2009—2010年对1400份各类标本同时用分离培养法与胶体金法进行检测，比较两种方法结果的符合率，致性为优。符合率为100％。结果表明，胶体金免疫层析法可作为快速检测金黄色葡萄球菌的方法，其结果准确性高。     

一起食物中毒事件中产独特肠毒素表型的金黄色葡萄球菌病原学分析

目的对一起疑似为金黄色葡萄球菌所导致的食物中毒事件进行葡萄球菌肠毒素检测,结合金黄色葡萄球菌病原学分析,为明确食物中毒诊断提供依据。方法根据流行病学调查,采用ELISA方法对可疑食物进行葡萄球菌肠毒素检测,同时对可疑食物和患者呕吐物进行金黄色葡萄球菌分离,运用Vitek2 Compact全自动细菌鉴定仪和血浆凝固酶试验鉴定为金黄色葡萄球菌,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对病原菌进行同源性分析,以ELISA方法对检出的金黄色葡萄球菌菌株进行肠毒素检测,用PCR方法对肠毒素基因进行分型。结果食物和患者样品中分别分离出2和11株金黄色葡萄球菌,PCR方法及ELISA方法对肠毒素分型结果显示,其中12株同时存在SEA、SEB、SED、SEE 4种肠毒素及相关基因,PFGE聚类分析显示,其中12株产肠毒素金黄色葡萄球菌具有高度同源性。结论本起食物中毒事件为具有独特肠毒素表型的金黄色葡萄球菌导致,在金黄色葡萄球菌中毒实验室调查过程中,肠毒素检测结合病原菌溯源分析可以为相关公共卫生事件提供科学依据。     

预包装食品中金黄色葡萄球菌3种鉴定方法的比较

目的 比较国家标准方法(GB 4789.10-2016)、VITEK2 Compact全自动微生物鉴定系统、基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对预包装食品中金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法 使用金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)人工污染12种不同种类的预包装食品,按照GB4789.10-2016进行样品前处理和增菌,通过上述三种方法对上述样品中分离的疑似金黄色葡萄球菌进行鉴定,并对鉴定结果进行比较。结果 三种方法均能够对12种不同种类的人工污染预包装食品中分离的金黄色葡萄球菌进行准确有效的鉴定。相对于国标法,两种仪器鉴定方法无需进行后续溶血分析和血浆凝固酶试验,对操作人员技术要求更低,能够在更短的时间内获得鉴定结果。结论 两种仪器鉴定方法快速、可靠且操作简单,可以作为国标法的有效补充。     

建立金黄色葡萄球菌肠毒素B悬浮芯片定量检测方法

目的建立金黄色葡萄球菌肠毒素B悬浮芯片定量检测方法。方法利用双抗体夹心法免疫学原理,以金黄色葡萄球菌肠毒素B的特异性抗体包覆微球为载体,利用悬浮芯片(Bio-Plex)系统建立检测模型;检测不同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B,测定方法的灵敏性;通过该方法对大肠杆菌、普通变型杆菌、蓖麻毒素和禽流感病毒HA、NH蛋白和金黄色葡萄球菌热休克毒素的检测,判断方法的特异性;将不同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B添加到奶粉中验证方法的实用性和稳定性。结果悬浮芯片方法对金黄色葡萄球菌肠毒素B的检测线性范围为0.2～1653.4ng/ml,最低检测值为203pg/ml,均优于酶联免疫吸附实验;除与2.3μg/ml金黄色葡萄球菌热休克毒素有交叉反应外,和其他几种细菌、毒素、蛋白均无交叉反应;对添加相同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B奶粉的检测的相对标准偏差在1.30%～16.93%。结论悬浮芯片定量检测方法对于模拟添加的金黄色葡萄球菌肠毒素B具有良好的检测效果。     

食品中金黄色葡萄球菌计数方法的比较研究

比较食品中金黄色葡萄球菌计数的两种方法,寻找再现性较好的金黄色葡萄球菌计数方法。采用Baird-Parker琼脂倾注法与涂布法,对含一定浓度的金黄色葡萄球菌标准菌液、加菌样液进行计数,通过结果分析两种方法哪一种稳定性、重复性更好。金黄色葡萄球菌计数方法,利用Baird-Parker琼脂倾注法操作简便、结果稳定、再现性好。金黄色葡萄球菌计数方法,采用Baird-Parker琼脂倾注法,更加简便,便于推广。     

BAX Q7系统快速检测食品中金黄色葡萄球菌效果验证

目的验证BAX Q7全自动病原菌检测系统快速检测食品中金黄色葡萄球菌的效果,以强化食品检验机构对金黄色葡萄球菌的快速检测能力和推进快速检测技术的有效应用。方法通过BAX Q7全自动病原菌检测系统和GB 4789.10-2010《食品安全国家标准-食品微生物学检验-金黄色葡萄球菌检验》2种方法同步检测定量污染的样品,比较2种方法的检测结果的符合率和灵敏度。结果采用2种方法对24份样本检测的结果基本一致,金黄色葡萄球菌检测符合率均为100%,但BAX Q7实时荧光定量PCR法相比国家标准方法检出时间缩短4～6 h,具有更高的灵敏度,而且操作简便快速。结论 BAX Q7实时荧光定量PCR系统能在食品安全突发事件中快速锁定病原菌,为溯源调查指明方向,应用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测合理可行。     

实时荧光核酸恒温扩增技术检测食品中金黄色葡萄球菌的方法评价

目的 以传统国标培养法作为参比方法, 评价实时荧光核酸恒温扩增检测(real-time simultaneous amplification and testing, SAT)方法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力。方法 依据 GB 4789.10—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》对SAT法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力进行评价。分别检测纯培养物、人工污染样品以及实际样品来评价试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率和准确度, 同时采取2种方法的显著性差异分析, 确定最终结果。结果 SAT法灵敏度为100, 纯培养物检出限为103 CFU/mL, 人工污染检出限灵敏度为103 CFU/mL, 假阴性率为0、假阳性率为2.9%; 金黄色葡萄球菌的特异性符合要求。结论 SAT检测方法灵敏度高、特异性好, 假阳性率、假阴性率、准确度等检测结果全部达标, 并且检测时间短, 适用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。     

传统发酵豆制品中3种致病菌的三重荧光PCR快速检测方法的建立

为了建立传统发酵豆制品中单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的三重荧光PCR快速检测方法。以单增李斯特菌hly A基因、蜡样芽孢杆菌Cereolysin AB基因和金黄色葡萄球菌nuc基因为靶基因设计引物与TaqMan探针,通过优化PCR反应体系,建立了可同时检测单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的三重荧光定量PCR体系,并进行了特异性和敏感性试验。结果显示,该方法灵敏度高,特异性强,重复性好。对26株非目标菌进行检测,结果均为阴性,而定量检测批内和批间的变异系数均小于2%。单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌敏感性试验结果表明,这三种细菌的最低检测浓度分别为3×103cfu/mL、2×104cfu/mL、2×104cfu/mL。应用该方法可在8h内完成对样品中单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的同步检测。     

环介导等温扩增检测猪血中金黄色葡萄球菌

采用环介导等温扩增(LAMP)技术,检测猪血中金黄色葡萄球菌.以金黄色葡萄球菌(CMCC10201)的femA基因作为靶序列,设计LAMP和PCR引物,通过凝胶电泳,判断检测结果.对8株常见致病菌进行LAMP特异性实验,表明对金黄色葡萄球菌的检测具有很高的特异性;LAMP检测金黄色葡萄球菌的灵敏度为8.7CFU/mL,直接检测猪血中金黄色葡萄球菌的检出限为8.7×102CFU/mL,PCR法的检出限为8.7×103CFU/mL.本实验所建立的快速检测猪血中金黄色葡萄球菌的LAMP法具有较高的特异性和敏感性,能够满足快速检测的需要.     

鉴定金黄色葡萄球菌的多重PCR方法

建立了一种快速鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌的多重PCR方法。利用金黄色葡萄球菌的特异基因、耐甲氧西林基因和4种肠毒素基因nuc、mecA和sea、sec、sed、see建立6重PCR反应体系,并对PCR体系,引物浓度进行优化。6对PCR引物均能特异地扩出相应的目的基因。对47株金黄色葡萄球菌的检测结果与应用单重PCR鉴定结果完全一致。实验所建立的多重PCR方法能在一个反应体系中鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效的检测手段。