金属离子对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成及环境耐受性的影响

筛选出对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成促进效果最显著的金属离子,确定生物膜形成最适培养条件,探究生物膜形成后对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性。在培养基里添加Na~+、Mn~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)和Fe~(3+)5种金属离子后,利用96孔法及扫描电镜测定生物膜形成量,选出最佳金属离子。对其添加量、培养温度和培养时间下生物膜形成的规律进行研究,确定了生物膜形成的最适条件。结果表明,Na~+对生物膜形成具有明显促进效果。在NaCl质量浓度为53 g/L,40℃培养24 h时,生物膜的形成量最大。形成生物膜后的菌株对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性均有明显提升。Na~+可以促进植物乳杆菌生物膜的形成,在工业生产中,可以通过形成生物膜,使微生物在不良环境中保持活性。     

诱导植物乳杆菌生物膜形成的环境因素探索

为了探索诱导植物乳杆菌生物膜形成的外界环境因素,采用微量板半定量法分别对不同理化因素及几种食品添加剂诱导其生物膜形成情况进行了探索。结果显示,6%的NaCl能够明显诱导植物乳杆菌形成强阳性生物膜;弱酸性的条件(pH 4.8⁵.8)、0.2%和0.4%的柠檬酸、H3PO4以及明胶的添加均能够诱导植物乳杆菌形成弱阳性的生物膜。植物乳杆菌生物膜的形成受到某些外界环境因素的调控。     

葡萄酒中植物乳杆菌的鉴定及其耐受性分析

本论文对4株分离自甘肃、宁夏产区葡萄酒中的乳杆菌进行鉴定并通过调整改良MRS培养基分析植物乳杆菌对酒精浓度、pH和SO2浓度的耐受性.结果表明:16S rDNA鉴定得到3株植物乳杆菌,在单一因素影响下,3株菌在pH 3.0条件下有良好生长,在16％vol酒精浓度可生长,110mg/L SO2浓度下可生长.在综合因素影响...     

植物乳杆菌LPb1耐受性及发酵乳制备条件的优化

模拟人体消化道环境,即在人工胃液、肠液的环境下对植物乳杆菌LPb1的耐受性进行研究,结果表明：在37℃条件下,用人工胃液处理3h,收集的菌体再转入人工肠液处理3h,最后测得菌株存活率仍达88.6%。LPb1与一株嗜热链球菌混合发酵脱脂乳,与单菌发酵相比,混合菌产酸效果较好,发酵乳制品具有良好的持水性能,且发酵完成后,4℃冰箱贮存后酸化程度缓慢。通过单因素和响应面分析,混合发酵最佳发酵条件为：接种量4.45%、发酵时间8.53h、发酵温度40.40℃。     

叠氮溴化丙锭-qPCR法定量检测植物乳杆菌

目的：选取植物乳杆菌单拷贝基因plnF为靶基因,设计引物探针,将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时荧光聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)相结合,建立了活性植物乳杆菌定量检测PMA-qPCR方法。方法：优化PMA反应条件,进行特异性验证,建立标准曲线,验证灵敏度,并将该方法用于检测人工添加奶粉、米粉、酸奶样品以及冻干样品中的植物乳杆菌。结果：显示经PMA条件优化,最佳PMA浓度为2μg/mL,最佳曝光时间为10min,所建立的PMA-qPCR方法可以快速、高效地检测植物乳杆菌,利用细菌纯培养物与对应Ct值建立标准曲线,可以看出纯培养物浓度与Ct值之间存在对应线性关系,相关系数(r_² )为 0.9992,最低检测限为15拷贝/反应体系,人工添加样品以及冻干样品检测中PMA-qPCR和平皿计数法结果的对数值进行配对t检验,结果显示两者结果在不同的人工添加样本以及冻干样品中均无显著性差异(P＞0.05)。结论：本研究建立的PMA-qPCR检测方法能快速准确、特异、灵敏地定量检测植物乳杆菌。     

不同生长阶段保加利亚乳杆菌关键蛋白酶基因表达变化规律

乳酸菌自身不能直接利用外源蛋白质,必须通过蛋白水解体系水解外源蛋白质,生成供菌体正常生长需要的短肽和游离氨基酸。该研究选择6株保加利亚乳杆菌(KLDS1.0207、1.0501、1.1007、1.9201、1.9203、1.0208)进行脱脂乳发酵,在mRNA转录水平上,应用实时荧光定量PCR技术,探讨保加利亚乳杆菌的蛋白水解体系中关键蛋白酶基因(prtB、oppD、pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)在菌体不同生长阶段表达的动态变化。结果表明,所有菌株生长曲线均呈S型。随着菌体在脱脂乳中的不断生长,蛋白水解活力极显著增强(P<0.01),7个目的基因相对表达量呈现总体上调。6株菌的prtB和oppD基因在对数期的相对表达量极显著高于对照组(4h)(P<0.01)。对数期的胞内肽酶基因(pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)的表达量与对照组(4 h)相比,呈极显著上调(P<0.01),但菌株KLDS 1.0207的pepQ基因在对数期下调,而稳定期上调。由此可见,蛋白水解活力较高的菌株,其生长和产酸特性也较高;发现在脱脂乳中培养保加利亚乳杆菌,其关键蛋白酶基因的表达量呈时间依赖性,且菌株间各蛋白酶基因表达量有较大差异。     

植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法

根据已报道的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的23S rRNA基因保守序列,设计用于检测植物乳杆菌的特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,结合SYBR GreenⅠ实时荧光PCR技术,建立植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法,对其特异性和灵敏度进行了评价,并将建立的检测方法用于实际样品的检测中。结果显示,该方法对2株植物乳杆菌能得到阳性扩增,其余11株乳酸菌及阴性对照没有扩增曲线,灵敏度高达0.001 ng/μL,而且在退火温度为50~60℃范围内不影响其特异性,表明该方法对退火温度不敏感;用微生物菌制剂和酸奶共13种益生菌产品进行了验证,检出情况与产品标识一致。因此,该研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR能够快速、准确、高效地检测微生物菌制剂及其他益生菌产品中的植物乳杆菌。     

具有缓解口臭效果的植物乳杆菌HCS03-001对食品防腐剂的耐受性研究

为研究植物乳杆菌HCS03-001对常见的化学防腐剂山梨酸钾、苯甲酸钠及天然防腐剂ε-聚赖氨酸和乳酸链球菌素的耐受能力,本研究以菌株存活率为考察指标,参照食品中防腐剂的允许最大添加量,探究菌株HCS03-001耐酸能力及在酸性条件下不同浓度防腐剂环境中的存活能力。结果菌株HCS03-001在pH3.0和pH 2.0条件下处理17h后存活率分别为89.0%和85.8%;在含山梨酸钾、苯甲酸钠和乳酸链球菌素最大允许添加量的酸性环境中培养17h,菌株HCS03-001的存活率均达95%以上,在含ε-聚赖氨酸的酸性环境中,当ε-聚赖氨酸浓度为0.25g/L时,其在pH 2.0条件下存活率稍低为74.9%。植物乳杆菌HCS03-001对酸性环境具有较好的耐受性,能够一定程度的耐受酸性环境产品中防腐剂的影响。     

植物乳杆菌XCT-1对温和气单胞菌群体感应及生物膜形成的抑制作用

利用双层琼脂扩散法从辽宁葫芦岛农家腌芥菜中获得对温和气单胞群体感应有较强抑制活性的菌株XCT-1,该菌株经生理生化和16S r RNA序列被鉴定为植物乳杆菌。4 mg/mL菌株XCT-1代谢产物的粗提物对温和气单胞菌生物膜的抑制率为38%,显微镜观察显示其粗提物能够减少细菌生物膜的形成。扫描电镜结果表明:菌株XCT-1粗提物不仅降低了温和气单胞菌生物膜的生成量,而且使其生物膜结构疏松。菌株XCT-1粗提物经100℃30 min后其抑制活性保持不变,而经胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶处理后活性完全丧失。初步确定菌株XCT-1粗提物中的群体感应抑制成分为蛋白类物质,具有热稳定性。研究表明菌株XCT-1粗提物中的蛋白类物质主要通过干扰温和气单胞群体感应系统抑制其生物膜的形成。     

植物乳杆菌SCP53生物膜的形成条件

研究了不同状态下植物乳杆菌SPC53生物膜形成能力的情况。通过改变其生长的环境条件与营养状况,采用结晶紫染色法和扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察,定量及定性分析其生物膜的形成。结果表明:接种量5×10~7CFU/mL,培养时间36 h,培养温度42℃,pH值5.8是植物乳杆菌SCP53生物膜形成的最适培养条件,在MRS肉汤中依次添加200 mg/mL NaCl、75 mg/mL葡萄糖、7.5 mg/mL果胶、75 mg/mL全脂乳粉,可以促进植物乳杆菌生物膜的形成,形成后的生物膜A_(490)值为4.492 3。对照组A_(490)值为0.136 5,扫描电镜结果显示生物膜与浮游菌体有明显差异。     

植物乳杆菌C8-1产细菌素发酵条件优化研究

以XMRS为基础培养基对植物乳杆菌C8-1产细菌素的培养基组成和发酵条件进行了优化,结果表明:最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为大豆蛋白胨.刺激因子Tween 80最佳添加量为3‰(体积分数).在大豆蛋白胨1.5%,牛肉膏1.5%,蔗糖2.0%(均为质量分数),初始pH值为6.5,30℃培养28 h条件下培养植物乳杆菌C8-1所产细菌素的效价可达到271.36 IU/mL,增长34.3%,优化后产细菌素能力提高,效果显著.     

植物乳杆菌Zhang-LL耐胃肠道逆环境及降胆固醇特性研究

利用从发酵米粉中筛选出的一株植物乳杆菌Zhang-LL探讨其胃肠道耐受性及体外降胆固醇功效。本实验分别在p H1.5³.0、胆盐浓度0.1%⁰.5%的条件下模拟人体胃肠道环境,采用活菌计数法检测菌株Zhang-LL耐胃肠道逆环境特性及邻苯二甲醛法检测降胆固醇效果。结果表明:初始菌数为1×107CFU/m L的植物乳杆菌Zhang-LL在p H1.5³.0的环境中3 h后,活菌数仍可达106CFU/m L;在胆盐浓度为0.10%⁰.50%环境中8 h,活菌数可达105¹07CFU/m L;体外胆固醇降低率在20.69%³5.68%范围。研究表明植物乳杆菌Zhang-LL具有较强的耐胃肠道逆环境特性及良好的降胆固醇能力,为开发研制降胆固醇功能食品及微生态制剂提供了实验基础。      

Diversity of stress tolerance in Lactobacillus plantarum, Lactobacillus pentosus and Lactobacillus paraplantarum: A multivariate screening study

Sixty-three strains of the taxonomically related species Lactobacillus plantarum subsp. plantarum, L. plantarum subsp. argentoratensis, L. paraplantarum and L. pentosus isolated from sourdoughs and other food and non-food sources and 14 strains of other members of the genus Lactobacillus were screened for their tolerance of acid, alkaline, heat, oxidative, osmotic, detergent and starvation stresses in order to evaluate the diversity of stress response. Most strains of the L. plantarum group were highly tolerant of acid, alkaline and osmotic stress and highly sensitive to detergent stress, while a larger diversity was found for other stress. Multivariate analysis allowed grouping the strains in clusters with similar response patterns. Stress response patterns in the L. plantarum group were similar to those of species of the L. casei/L. paracasei group but clearly different from those of other mesophilic Lactobacillus. No relationship was found between grouping obtained on the basis of stress response patterns and by genotypic fingerprinting (rep-PCR), nor with the taxonomic position or isolation source of the strains. Further experiments with selected strains showed that exponential phase cells were generally but not always more sensitive than stationary phase cells. The ability to grow under stressful conditions showed a slightly better correlation with the ecological conditions prevailing in the isolation niches of the strains.This study will be the basis for further investigations to identify and exploit the basis of diversity in the stress response of lactic acid bacteria.     

(-)-3t,4t-Dihydroxycyclohexane-1c-carboxylate, a new quinate metabolite of Lactobacillus plantarum

Lactobacillus plantarum, isolate No. 13a, reduces (?)-quinate, shikimate and (?)-dihydroshikimate to a new metabolite identified as (?)-3^t, 4^t-dihydroxycyclohexane 1^c-carboxylate. The absolute stereochemistry of the product is given and is shown to resemble that of (?)-quinic and (?)-dihydroshikimic acids.     

培养条件对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻活性的影响

以前期优化的MRS培养基为基础培养基,采用二次响应面分析法优化植物乳杆菌LIP-1的培养条件（温度、接种量、初始培养pH）,研究改变培养条件是否可提高植物乳杆菌 LIP-1高密度发酵培养后的活菌数以及对冷冻干燥后菌株的冻干抗性的影响。结果显示：最佳培养条件：培养pH6.7、培养温度36 ℃、接种量8.8%,在此培养条件下,植物乳杆菌LIP-1高密度发酵后活菌数为10.1855 lg（CFU/mL）,冷冻干燥后的存活率达83.40%,与未优化的培养条件相比,发酵培养后活菌数及冻干存活率显著提高（P<0.05）,分别提高0.2935 lg（CFU/mL）和8.46%。结轮：通过改变培养条件可显著提高植物乳杆菌LIP-1的高密度发酵活性和冷冻干燥存活率。     

植物乳杆菌对pH、酒精浓度和SO2浓度耐受性的研究

通过调整MRS培养基的pH、酒精浓度及SO2浓度,以菌株培养前后的菌密度差(△OD600nm)为指标研究了6株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对低pH、高SO2、酒精浓度及三者相互作用的耐受性.结果表明:试验所选取的6株菌都可耐受pH 3.0、75mg/LSO2浓度,其中有5株菌可耐受16％vol酒精浓度,3个因素对菌株生长影响的次序是SO2浓度＞pH＞酒精浓度.