蓝莓花色苷提取物干预人肝癌细胞对葡萄糖消耗的作用研究

探究蓝莓花色苷提取物对胰岛素抵抗的人肝癌细胞HepG2细胞对葡萄糖消耗的干预作用。利用MTT实验筛选得到3个品种蓝莓花色苷提取物的最适作用浓度;筛选胰岛素和葡萄糖诱导HepG2细胞产生胰岛素抵抗的最佳浓度;以MTT矫正细胞数量,用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基中葡萄糖的变化来研究蓝莓花色苷提取物的对细胞胰岛素抵抗的干预作用。北陆花色苷提取物在低于200μg/m L的浓度时,灿烂和园蓝花色苷提取物在低于100μg/m L的浓度时,对HepG2细胞活力无明显影响;以诱导剂胰岛素的浓度为1×10-8mol/L,孵育24h作为诱导条件,其模型效果较佳、对细胞活力改变小且稳定性好;3个品种的蓝莓花色苷提取物在7.8125～31.25μg/m L浓度时,可不同程度促进正常HepG2细胞和胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖的消耗量,且与剂量成正比关系,在31.25μg/m L达到促进最大值,与模型组比较均有极显著差异,糖消耗量分别增加了60%、65%和88%。三个品种的蓝莓花色苷提取物均能较好的预防和改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的利用。     

藻蓝色素对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响

为探究藻蓝色素(phycocyanin, PC)体外改善胰岛素抵抗的作用机制,采用胰岛素体外诱导方式,分别设置5个胰岛素浓度梯度(10-9、10-8、10-7、10-6 、10-5μmol/L)以及6个时间梯度(0、12、24、36、48、72h)处理HepG2细胞,以葡萄糖消耗量和细胞存活率为指标,确定建立胰岛素抵抗型HepG2细胞模型的较佳作用浓度及时间。检测PC干预后HepG2细胞葡萄糖消耗量、糖原合成和存活率,利用RT-qPCR和Western blot探讨PC可能的作用机制。实验结果表明:胰岛素抵抗型HepG2细胞模型最佳诱导时间和浓度为36h、10-7μmol/L;不同浓度的PC可以提升胰岛素抵抗型HepG2细胞的葡萄糖消耗量;PC能够上调正常HepG2和胰岛素抵抗型HepG2细胞中IRS1、IRS2、GLUT1、GLUT4基因的转录水平,并且增加细胞中IRS1、AMPK、GSK-3β以及AKT蛋白的磷酸化水平。研究结果表明,PC能够显著提升胰岛素抵抗型HepG2细胞的葡萄糖消耗量,通过激活胰岛素调节相关的IRS1/AKT信号通路,增加AMPK的磷酸化和葡萄糖转运蛋白GLUT1、GLUT4基因表达,加速HepG2细胞对葡萄糖的利用和改善细胞胰岛素抵抗。研究结果显示,PC在预防或改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗方面有潜在作用。     

壳寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用及机制研究

壳寡糖(chitooligosaccharides, COS)是一种具有多种生物活性的低聚寡糖,该文探究了COS对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响作用。通过胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,评估COS及其单体组分(聚合度2～4)对其缓解作用。结果显示,COS显著提高产生胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量,促进其葡萄糖代谢。进一步评估不同聚合度的COS单体发现,壳二糖和壳四糖对胰岛素抵抗的肝细胞无显著改善效果,而壳三糖显著提高胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量。另外,COS及壳三糖显著提高胰岛素受体(insulin receptor, IR)、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1, IRS-1)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4, GLUT4)蛋白水平,活化蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)以及改善相关基因转录水平。综上,COS通过介导Akt/GLUT4通路改善HepG2细胞的胰岛素抵抗,壳三糖在促进糖代谢中表现最优。     

豌豆肽缓解胰岛素抵抗形成效果探究

目的:探究豌豆肽对缓解人肝癌细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)形成的作用。方法:体外采用高浓度胰岛素诱导人肝癌细胞HepG2建立IR细胞模型,利用葡萄糖氢化酶过氧化氢酶法(GOP-POD)测定不同浓度豌豆肽对胰岛素诱导前后HepG2/IR细胞的葡萄糖含量及消耗量变化;MTT比色法检测豌豆肽对发生胰岛素抵抗细胞的毒性影响;采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)手段检测细胞中胰岛素受体(InsR)及凋亡促进蛋白Caspase-3的表达。结果:胰岛素诱导48 h建立的HepG2/IR抵抗模型最为稳定,其葡萄糖消耗量与正常HepG2细胞相比降低10%。利用不同浓度豌豆肽对胰岛素诱导的HepG2细胞进行作用时,其葡萄糖消耗量提高1.31~1.68倍,InsR的表达水平提高1.19~1.34倍,凋亡蛋白Caspase-3阳性率表达增加。结论:豌豆肽对肝细胞内胰岛素抵抗的形成具有一定缓解作用。     

苦瓜皂苷对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响

采用高浓度的胰岛素诱导HepG2细胞出现葡萄糖代谢异常,从胰岛素的添加量和作用时间角度探讨建立胰岛素抵抗细胞(HepG2/IR)模型的最佳条件;分别设立阴性对照组、胰岛素抵抗模型组、盐酸吡格列酮阳性对照组以及苦瓜皂苷干预组(100、300、500、700μg/mL),利用葡萄糖测定试剂盒检测各组葡萄糖消耗量,同时MTT法评价苦瓜皂苷对HepG2/IR细胞活性的影响。结果表明,30μg/mL胰岛素诱导处理HepG2细胞36h是产生胰岛素抵抗的最适条件。与HepG2/IR模型组相比,300μg/mL的苦瓜皂苷不仅可以显著改善HepG2/IR细胞的葡萄糖消耗量,还能提高其细胞活性。     

高糖高脂诱导胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立及活性成分的功能评价

胰岛素抵抗是导致Ⅱ型糖尿病发生的主要机制之一,它会导致高血糖,最终引发糖尿病发病。目前胰岛素抵抗的细胞模型多样,但是以单一因素诱导造模为主。利用高糖联合高脂诱导HepG2细胞模型,更符合人体发病时高血糖高血脂的状态。实验采用25mmol/L葡萄糖联合不同浓度的油酸软脂酸(摩尔浓度比2:1),于36h测定细胞的糖吸收、糖原含量以及甘油三酯含量,以确定合理的造模浓度。最终用0.5mmol/L的游离脂肪酸联合诱导液建立了胰岛素抵抗HepG2细胞模型,并利用此模型对4种成分改善胰岛素抵抗进行了评价。结果发现,葛根素、甜菊苷、熊果酸和表儿茶素均能有效地改善HepG2细胞模型的胰岛素抵抗,相比较甜菊苷和表儿茶素的效果较好。     

HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立影响因素研究

目的建立体外肝癌(HepG2)细胞胰岛素抵抗(IR)模型,研究血清添加、诱导剂浓度和培养时间对模型建立的影响。方法采用不同浓度胰岛素对肝癌HepG2细胞进行不同时间的诱导,建立肝细胞IR模型;以葡萄糖氧化酶法研究不同诱导浓度、培养时间及血清添加对胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗量(ΔGC)的影响。采用噻唑蓝(MTT)法评价细胞活性,并计算葡萄糖比消耗率(ΔGC/R),得到最佳建模条件。结果适当提高胰岛素诱导浓度可缩短诱导时间,或可通过延长诱导时间来降低诱导浓度。胰岛素能促进HepG2细胞增殖,且在含血清培养基中增殖较迅速。诱导后的细胞在含血清培养基中培养24 h即能得到理想的胰岛素抵抗模型。结论可通过胰岛素诱导培养法建立稳定的IR模型,在含5×10~(-8) mol/L胰岛素的培养基中诱导48 h,再换含血清培养基继续培养24 h,易形成明显的胰岛素抵抗模型。此HepG2细胞模型在较长时间内(72 h)均可维持胰岛素抵抗特性。     

D-手性肌醇及D-松醇对缓解HepG2细胞胰岛素抵抗的作用

对D-手性肌醇及D-松醇缓解胰岛素抵抗作用进行评价,选用HepG2人肝癌细胞建立胰岛素抵抗细胞模型。将实验分为正常对照组和D-手性肌醇及D-松醇实验组,分别设立50、100、200、400mg/L4个剂量。采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测受试样品对细胞增殖的影响。选用1×10-6mol/L浓度的胰岛素诱导细胞建立胰岛素抵抗模型,给予不同浓度D-手性肌醇及D-松醇,考察二者对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响。实验结果表明,在200~1000 mg/L的浓度范围内D-手性肌醇和D-松醇对HepG2细胞的正常增殖无显著影响。D-手性肌醇浓度为50、100和200 mg/L时,对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量与模型对照组相比有显著促进作用(p0.05),浓度为400 mg/L时,有极显著性差异(p0.01);D-松醇浓度为200 mg/L时,对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量与模型对照组相比有显著促进作用(p0.05),浓度为400 mg/L时,有极显著性差异(p0.01)。因此,D-手性肌醇和D-松醇均能够缓解HepG2细胞胰岛素抵抗现象,且在1000 mg/L浓度范围内对HepG2细胞正常增殖无显著影响。     

D-松醇复配Mn2+对HepG2细胞胰岛素抵抗的调节及其作用机制

采用胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型(IR),研究D-松醇复配Mn2+对细胞葡萄糖消耗量和糖原合成量的影响。实时荧光全定量分析(RT-PCR)实验检测AMPK信号通路相关基因mRNA表达水平。结果表明当胰岛素浓度为1×10-3 mmol/L,作用时间为36 h时,细胞葡萄糖消耗量达到最低,产生最大的胰岛素抵抗效应。与模型对照组相比,当D-松醇浓度为100 mg/L,复配MnSO₄为10 mg/L时,葡萄糖消耗量和糖原含量均极显著升高(p<0.01)。此外,复配组AMPKα-1、AMPKα-2和GLUT4基因表达水平均显著上调(p<0.05),G6Pase基因mRNA表达水平显著下调(p<0.05)。D松醇复配Mn2+可显著促进胰岛素抵抗细胞葡萄糖的利用,增加糖原合成,其作用机制可能涉及AMPK参与的抑制糖异生等生化调控过程起到降血糖作用。     

沙棘多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激的保护作用与机制

目的：研究沙棘多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激的保护作用与机制。方法：采用水提醇沉法对沙棘多糖进行提取,并用苯酚硫酸法测定多糖含量。CCK-8法测定不同浓度沙棘多糖对HepG2细胞活力的影响,用含5×10-8mol/L胰岛素的培养基诱导HepG2细胞24 h,建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型。采用试剂盒测定葡萄糖消耗量以及糖原相对含量,并测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,Western Blot法测定氧化应激相关蛋白的表达。结果：沙棘多糖含量为88.46%,在沙棘多糖质量浓度达到800 μg/mL时,细胞活力出现显著下降(P＜0.05),后续安全剂量选择400 μg/mL。经沙棘多糖处理后的葡萄糖消耗量以及糖原相对含量均显著提高(P＜0.05),SOD水平达到(79.31±2.16) U/mg,MDA水平达到(2.15±0.12) nmol/mg。沙棘多糖处理后显著提高Nrf2和HO-1的表达水平(P＜0.05),显著降低Keap1的表达水平(P＜0.05)。结论：沙棘多糖能够改善胰岛素抵抗细胞模型异常糖代谢情况和氧化应激水平,并通过调控Nrf2/Keap1/HO-1通路起到改善胰岛素抵抗的作用。     

紫薯花青素体外抗氧化及对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究紫薯花青素的体外抗氧化作用,建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,初步评价紫薯花青素的抗氧化应激作用。方法：紫薯干粉经过提取、纯化制得紫薯花青素干粉,分别测定紫薯花青素的总还原力、对羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2－•）的清除能力以及对大鼠红细胞溶血的保护作用。建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测不同质量浓度紫薯花青素对HepG2细胞氧化损伤的保护作用。结果：紫薯花青素的还原力和VC基本相当;紫薯花青素对·OH有很好的清除效果,在实验浓度范围内有明显的剂量-效应关系;随紫薯花青素浓度的升高,对O2－•的清除作用增强,呈现良好的量-效关系,单位浓度的紫薯花青素对O2－•的清除作用比2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（butylated hydroxytoluene,BHT）效果好。不同质量浓度的紫薯花青素均可抑制H2O2诱导的大鼠红细胞溶血,且随着紫薯花青素质量浓度的升高,大鼠红细胞的溶血度降低,呈现良好的量-效关系。H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤模型中,50～1 600 μg/mL的紫薯花青素均能够抑制H2O2引起的HepG2细胞凋亡,当紫薯花青素质量浓度达到800 μg/mL时,HepG2细胞存活率为（88.03±7.48）%。结论：紫薯花青素具有良好的体外抗氧化作用,并对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤具有明显的保护作用,研究初步揭示了紫薯花青素具有体外抗氧化作用。     

紫甘薯花青素体外抑制α-糖苷酶活性研究

为了研究紫甘薯花青素体外对α-糖苷酶活性的影响,采用HPLC和LC-MSn对紫A19(ZA1)和京薯(JS6)中花青素的含量和组分进行对比分析。结果表明：两种紫甘薯花青素含量分别为52.44mg/g和39.46mg/g,其组分基本一致,不同的是ZA1另含牵牛花色素类色素,而JS6另含天竺葵色素类色素;这两种紫甘薯花青素对α-糖苷酶活性都有抑制效果,但ZA1的抑制效果最佳,当加入质量浓度为0.1mg/mL 600μL(即抑制剂ZA1占总反应体积的18%)、抑制时间15min、抑制温度40℃时对α-糖苷酶活性抑制率可达50%以上,用Lineweaver-Burk双倒数作图考察其抑制类型,根据曲线可判定为竞争性抑制,抑制常数Ki=5.43×10-2mmol/L,vmax=1.71μmol/(L ·min)。     

天然食用色素紫甘薯花青素的稳定性研究

采用乙醇浸提法提取紫甘薯花青素,考察了紫甘薯花青素的稳定性。紫甘薯花青素是水溶性色素,具有较强的耐热性,避光保存花青素的稳定性最好。食品防腐剂对紫甘薯花青素的稳定性无明显影响;葡萄糖、蔗糖对花青素有一定的护色作用;VC对紫甘薯花青素影响较明显;H2O2,Cu2+和Fe2+对紫甘薯花青素的稳定性影响较大,其中Cu2+,Fe2+会使花青素溶液变浑浊。     

紫马铃薯花色苷的提取、纯化及其稳定性研究

优化了超声波辅助提取紫马铃薯(黑金刚)花色苷的工艺条件,并在此基础上研究了紫马铃薯花色苷的纯化工艺及其在不同环境条件下的稳定性。结果表明,最佳提取条件为:提取功率300 W,料液比1:50 g/mL,提取温度50 ℃,提取时间15 min,在此条件下提取量为(1.435±0.27) mg/g。采用AB-8大孔树脂,上样浓度0.29 mg/mL,纯化样品量9 BV,用6 BV 60%乙醇溶液洗脱,上样和洗脱速度均为2.0 mL/min,纯化后提取液中花色苷的浓度达到(6.43±0.37) mg/mL。稳定性研究结果表明,紫马铃薯花色苷在245 nm短波紫外线和室内散射光条件下稳定性较差,在黑暗避光条件下稳定;加热条件下稳定性随温度升高而降低;在含有Al3+、Mg2+、K+、Ca2+、Na+、Zn2+离子的溶液中稳定,在含有Cu2+的溶液中产生沉淀;在酸性环境中稳定,在碱性环境中易降解。因此,紫马铃薯花色苷应尽量在避光,冷藏或常温的酸性环境下贮藏和使用。优化的紫马铃薯花色苷提取工艺合理且具有良好的可行性,提取出的紫马铃薯花色苷产物具有较高的稳定性,可作为健康食品着色剂或食品功能性成分应用于食品的生产和研发过程中。     

马苏大马哈鱼籽营养成分分析及其卵磷脂对胰岛素抵抗的改善作用

从氨基酸组成、矿物质含量、维生素和卵磷脂含量等角度分析大马哈鱼(Oncorhynchus keta)和马苏大马哈鱼(Oncorhynchus masou)鱼籽的基本营养组成,并通过构建胰岛素抵抗HepG2肝细胞模型,以葡萄糖吸收水平为指标,研究马苏大马哈鱼籽来源的卵磷脂对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善效果.结果表明:马...     

酶法制备紫马铃薯汁及其乳酸菌发酵特性

本文以紫马铃薯为原料,通过酶法制备富含花色苷的紫马铃薯汁,分别使用干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌及植物乳杆菌三种乳酸菌对其进行发酵,研究烫漂时间、酶用量对紫马铃薯汁出汁率、花色苷、还原糖含量的影响及发酵过程中pH、花色苷、总酚含量、糖组分、有机酸、DPPH·清除能力等变化。结果表明:紫马铃薯经烫漂护色2.5 min时出汁率最高。烫漂时间对紫马铃薯汁的花色苷含量影响极为显著,烫漂2.5 min时花色苷含量比未经烫漂处理的提升了7.7倍。经高温α-淀粉酶(20 U/g)、糖化酶(200 U/g)酶解处理后的紫马铃薯汁出汁率为69.80%±3.85%,总酚含量1136.7±33.76 mg/L,花色苷含量为218.25±1.89 mg/L。紫马铃薯汁经乳酸菌发酵后pH逐渐下降,并产生大量的乳酸,产酸能力大小依次为保加利亚乳杆菌 > 植物乳杆菌 > 干酪乳杆菌,蔗糖、葡萄糖和果糖在发酵过程中均作为底物被乳酸菌消耗,发酵48 h后花色苷、总酚、DPPH·清除能力分别下降了11.33%~17.82%、6.22%~7.73%、24.23%~27.62%。抗氧化活性下降与花色苷和总酚含量的减少有关。     

紫色马铃薯花青素的抑菌性及其对草莓保鲜效果的研究

为研究紫色马铃薯花青素的抑菌性及其对草莓保鲜的作用,考察了紫色马铃薯花青素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉菌和酵母菌的抑菌能力、最低抑菌浓度和紫色马铃薯花青素与山梨酸钾、对羟基苯甲酸乙酯及其混合液的抑菌效果;测定紫色马铃薯花青素对室温贮藏条件下的草莓失重率、腐败率、可溶性固形物含量和菌落总数的影响。结果表明:紫色马铃薯花青素的抑菌能力为金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>青霉菌>酵母菌;对四种菌的最低抑菌浓度分别为5.625、11.25、22.5和45 mg/mL。25 mg/mL紫色马铃薯花青素+0.5 μg/mL对羟基苯甲酸乙酯混合液处理组草莓的失重率、腐败率显著低于对照CK（P<0.05）,可溶性固形物含量显著高于对照CK（P<0.05）,菌落总数极显著低于对照CK（P<0.0001）。保鲜能力为对羟基苯甲酸乙酯+花青素>对羟基苯甲酸乙酯>花青素>对照。综上,紫色马铃薯花青素具有一定的抑菌和保鲜效果,但效果差于对羟基苯甲酸乙酯,与其联合使用效果最佳。     

壳三糖胍盐酸盐对胰岛素抵抗细胞模型的改善作用

为探究壳三糖胍盐酸盐对胰岛素抵抗的改善能力,本研究通过高糖高脂诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,以不同浓度和胍基取代的壳三糖胍盐酸盐干预该细胞模型并检测葡萄糖吸收量等指标。结果表明:300 μg/mL和600 μg/mL的壳三糖胍盐酸能显著提高模型细胞的葡萄糖吸收量（P<0.05）,其中600 μg/mL效果较佳;不同胍基取代度的壳三糖胍盐酸盐均能显著提高模型细胞的葡萄糖吸收量（P<0.05）,其中胍基取代度为78%的壳三糖胍效果较佳;600 μg/mL、胍基取代度78%的壳三糖胍盐酸盐能显著提升模型细胞的葡萄糖吸收量、糖原含量（P<0.05）,并显著降低模型细胞中iNOS活力（P<0.05）,且作用效果优于原料壳三糖,说明壳三糖胍盐酸盐对胰岛素抵抗细胞模型具有一定的改善作用,这为开发具有糖尿病干预作用的新型功能性食品提供理论参考。