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1.
本研究旨在探讨原花青素B2(procyanidin B2,PCB2)对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及其机制。采用噻唑蓝法分析PCB2在不同浓度和不同处理时间下对MCF-7细胞存活率的影响;通过激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度变化并观察Hoechst 33342染色后的细胞凋亡形态;采用流式细胞分析仪检测PCB2对MCF-7细胞凋亡率、周期、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及线粒体膜电位变化的影响;通过Western blot检测PCB2对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达量的影响。结果表明,当浓度在10~80 μmol/L范围内时,PCB2能显著降低MCF-7细胞的存活率(P<0.05),且呈浓度依赖性,处理24、48、72 h时对MCF-7细胞存活率的半抑制浓度分别为114.82、57.15 μmol/L和55.64 μmol/L。PCB2能显著增加MCF-7细胞凋亡率、胞内ROS水平(P<0.05)、细胞核荧光强度,并破坏Ca2+平衡,同时显著降低线粒体膜电位(P<0.05),并将细胞周期阻滞在G0/G1期进而诱导细胞凋亡。PCB2可上调Bax、细胞色素c、Caspase-12和Caspase-3蛋白的相对表达水平,下调Bcl-2蛋白相对表达水平。综上可知,PCB2具有抗肿瘤作用,其机制与激活线粒体和内质网介导的凋亡通路、周期阻滞和细胞内ROS水平增加有关。 相似文献
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在本实验中,通过MTT法和LDH法检测姜黄素对MCF-7细胞抗肿瘤和毒性作用,通过流式细胞仪的分析揭示了姜黄素对细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(△ψm)的影响,利用caspase试剂盒来检验caspase的活性以及用western blot法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、PARP、细胞色素c的表达。结果显示姜黄素对MCF-7细胞有抗肿瘤以及毒性作用;姜黄素能使MCF-7阻滞在G0/G1期,可以诱导细胞凋亡。在姜黄素作用下细胞的线粒体膜电位(△ψm)增加,caspase-3、caspase-9、Bax、PARP蛋白表达上调,同时细胞色素c从线粒体释放到细胞液中,而Bcl-2的表达减少。这些结果表示姜黄素可以通过使MCF-7细胞的周期阻滞在G0/G1期和通过线粒体途径诱导的凋亡两方面来引起对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用。 相似文献
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本文研究了人乳腺癌细胞MCF-7在滚瓶培养形成大量细胞聚集体时,猪软骨多糖对MCF-7的诱导凋亡作用,并初步研究了其凋亡前后的差异表达蛋白。采用Hoechst 33342/PI染色于共聚焦显微镜下观察细胞的凋亡特征;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;并提取MCF-7细胞的全蛋白,利用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF质谱技术检测差异表达蛋白。结果表明:MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后出现典型的凋亡现象,通过流式细胞仪检测发现在猪软骨多糖作用12 h,24 h的MCF-7凋亡率分别为20.23%和44.7%;同时发现MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后,细胞周期被阻滞在了S期;初步鉴定出2个差异表达蛋白,其中一个为肌动蛋白actin,另一个为抗氧化类蛋白PRDX6。 相似文献
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目的:探讨葡萄籽提取物原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)诱导人食管癌细胞ECA109凋亡的效果及机制。方法:ECA109细胞用0、25、50、100、200、400 μg/mL GSPE干预24 h,噻唑蓝法检测并计算不同质量浓度GSPE对ECA109细胞的活性抑制情况,选取半数抑制浓度(50 μg/mL)作为干预剂量;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附检测法测定炎性因子及Bax/Bcl-2表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,qPCR)、Western blot检测核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达情况。结果:不同质量浓度GSPE作用24 h均可抑制ECA109细胞的增殖,细胞凋亡率由54.44%增加到82.80%;酶联免疫吸附检测结果显示,相比于空白对照组,GSPE和NF-κB抑制剂BAY11-7082可显著抑制细胞内炎性因子前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的产生以及C型反应蛋白(C reactive protein,CRP)的分泌(P<0.05);qPCR和Western blot结果表明GSPE和BAY11-7082处理使Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),NF-κB信号通路中IκB、p65、p50 mRNA表达量显著降低(P<0.05),p-IκB、p65、p50相对表达量显著下降(P<0.05)。结论:GSPE可通过抑制PGE2、CRP的产生诱导ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路、活化Bax有关。 相似文献
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目的:研究纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的作用。方法:通过酸沉、有机溶剂提取以及活性炭吸附等方法从纳豆发酵液中提取纳豆脂肽。MTT法测定纳豆脂肽对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪检测纳豆脂肽对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。结果:纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖有显著抑制作用且抑制率随纳豆脂肽浓度的增加而上升,其IC50为3.68μg/mL。纳豆脂肽可以影响MCF-7细胞的凋亡率,并将细胞周期阻滞在S期。结论:纳豆脂肽能显著抑制体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,引起人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。 相似文献
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目的:研究纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的作用。方法:通过酸沉、有机溶剂提取以及活性炭吸附等方法从纳豆发酵液中提取纳豆脂肽。MTT法测定纳豆脂肽对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪检测纳豆脂肽对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。结果:纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖有显著抑制作用且抑制率随纳豆脂肽浓度的增加而上升,其IC50为3.68μg/mL。纳豆脂肽可以影响MCF-7细胞的凋亡率,并将细胞周期阻滞在S期。结论:纳豆脂肽能显著抑制体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,引起人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。 相似文献
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目的:探讨不同质量浓度的海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用。方法:分别以质量浓度为5、10、20、30 mg/mL的海带多糖处理Bel-7402细胞,48 h后观察海带多糖对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡状况,酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测Caspase-3活性,Western blotting法检测细胞内Caspase-3和甲胎球蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)表达量。结果:海带多糖对Bel-7402细胞的增殖有明显抑制作用,最佳抑制剂量为30 mg/mL;随着海带多糖质量浓度的升高,细胞凋亡率明显增加(P<0.05),海带多糖处理组Bel-7402细胞内的Caspase-3表达水平同正常对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);AFP蛋白表达水平呈下降趋势。结论:海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖具有抑制作用,其机制可能是激活Caspase-3,引起细胞凋亡和AFP蛋白表达水平下降所致。 相似文献
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以黑脉羊肚菌多糖为原料,研究羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞MDA-MB-231(以下简称MDA)增殖和凋亡的影响。结果表明:在无细胞毒性范围内,羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞MDA的增殖,半数有效浓度(median effective concentration,EC50)值为0.096 mg/mL,同时人乳腺癌细胞MDA表现出多种细胞凋亡的形态学变化。免疫印迹检测实验结果显示,羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达,促进Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达,同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值,并呈现出剂量依赖效应。说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞MDA增殖,促进细胞凋亡。 相似文献
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目的:探究君迁子叶杨梅苷诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及其作用机制。方法:噻唑蓝法测定杨梅苷对细胞存活率的影响;激光共聚焦显微镜结合Hoechst 33342染色观察杨梅苷对细胞形态的影响;流式细胞分析仪检测杨梅苷对细胞凋亡、周期阻滞、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和单丹璜酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)荧光强度的影响;Western blot检测杨梅苷对细胞凋亡和自噬相关蛋白表达量的影响。结果:浓度为10~200 μmol/L的杨梅苷对人正常肝细胞L-02细胞无显著影响(P>0.05),但可显著降低HepG2细胞的存活率(P<0.05),促进其凋亡,提升ROS水平,增加MDC和细胞核荧光强度,将细胞阻滞在G2/M期;此外,可显著上调HepG2细胞中Bax、细胞色素c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-3、Beclin 1、Atg5和LC3-II的相对表达量(P<0.05),下调Bcl-2和LC3-I的相对表达量(P<0.05)。结论:杨梅苷具有抗肝癌作用,其机制与激活线粒体介导的凋亡通路、阻滞细胞周期、提升ROS水平和促进细胞自噬有关。实验可为杨梅苷作为天然抗肝癌药物的研究及应用提供参考。 相似文献
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为了探讨肉苁蓉总苷(total glycosides of Cistanche deserticola,TG)对HepG2细胞的抑制作用及其机制研究。采用不同浓度(0、3.5、10.5、21、31.5、42 μg/mL)TG处理HepG2细胞24 h后,使用CCK8法检测细胞存活率;应用Hoechst 33342/PI双染法及Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;并通过细胞迁移试验检测细胞迁移现象;同时采用流式细胞仪检测细胞周期进展变化;通过Western blot法测定α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、β-连环蛋白(β-catenin)、蓬乱蛋白(Dishevelled,Dsh)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达量。结果发现,TG可以降低HepG2细胞的增殖能力,且有浓度依赖性,当TG为42 μg/mL时,细胞存活率仅有31.04%;此外,TG可以破坏细胞结构,诱导细胞凋亡,AV/PI检测后细胞凋亡率可高达32.44%;还可促使细胞坏死,限制细胞迁移,处理后的组别与对照组之间存在显著差异(P<0.05或P<0.01) ;同时,高浓度TG可以阻滞HepG2细胞在S期和G2/M期;与对照组相比,TG处理之后,β-catenin、Dsh表达下降,而GSK-3β表达量升高。由此可知,肉苁蓉总苷通过影响细胞周期进展、促进细胞凋亡、限制细胞迁移等方面抑制HepG2细胞增殖,其作用机制可能是通过Wnt/β-catenin信号通路,激活GSK-3β降解β-catenin来实现肝癌抑制作用的。 相似文献
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研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。 相似文献
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目的:探讨阿魏菇乙酸乙酯相三萜类化合物(ethyl acetate fraction of Pleurotus ferulatus triterpenoid,PFTP-E)对食管癌Eca109细胞的生长抑制作用及可能机制。方法:采用3-(4,5-二甲基噻-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测PFTP-E体外抑制Eca109细胞的增殖活性;Hoechst 33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测PFTP-E对Eca109细胞的增殖、周期、凋亡、线粒体膜电位以及胞内活性氧水平变化的影响;免疫印迹法检测PFTP-E对细胞凋亡相关蛋白Bcl2、Bax、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)3、Caspase9、细胞周期相关蛋白Cyclin B1、内质网应激相关蛋白真核起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)、CHOP以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响。结果:PFTP-E以时间和剂量依赖性抑制Eca109细胞的增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,进而诱导Eca109细胞凋亡。PFTP-E可引起Eca109细胞线粒体膜电位崩溃并导致胞内活性氧水平升高。PFTP-E可上调细胞色素c、Bax、p-eIF2α、CHOP表达,下调Bcl2、Cyclin B1表达,显著增强剪切型PARP、Caspase3及Caspase9表达,同时诱导内质网应激,激活MAPK/JNK信号通路。结论:PFTP-E能有效诱导Eca109细胞凋亡,其抗肿瘤机制与线粒体损伤途径、周期阻滞、内质网应激等有关。 相似文献
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目的探讨低剂量盐酸哈尔酚骆驼蓬碱(harmol hydrochloride dihydrate,HHD)对肝癌细胞株HepG2生长的影响及其自噬诱导作用。方法用不同浓度的HHD作用于肝癌细胞株HepG2 24 h后四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用蛋白质印迹(western blotting, WB)的方法检测LC-3Ⅱ表达水平。结果 MTT检测结果显示不同浓度的HHD作用于HepG2细胞24h后,细胞活力随HHD浓度升高而降低,差异均有统计学意义(P0.05)。0、0.005、0.01 mg/mL HHD作用于HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P0.05)。0.01 mg/mL的HHD处理HepG2细胞24 h后,凋亡小体的形成明显增多(P0.05)。Western blotting法检测发现0.01 mg/mL HHD作用细胞24 h后自噬标记蛋白LC-3Ⅱ表达显著升高。结论 HHD抑制肝癌细胞株HepG2在体外生长,其诱导细胞自噬可能是抑制作用机制之一。 相似文献
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目的:探讨山楂原花青素(hawthorn procyanidins,HPC)诱导肝癌细胞Huh-7增殖和促进其凋亡的机制。方法:体外常规培养Huh-7细胞株和过表达Traf6基因Huh-7细胞株,配制0、5、10、20、40、80μg/mL不同质量浓度的HPC,采用细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒检测HPC对Huh-7细胞和过表达Traf6基因Huh-7细胞增殖的抑制作用,并选40μg/mL作为HPC实验质量浓度;利用实时定量聚合酶链反应检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB?p65、Bax和Caspase-3的mRNA表达水平;利用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB p65、Bax和Caspase-3蛋白表达水平;利用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测HPC对Huh-7细胞凋亡的影响。结果:HPC质量浓度大于20μg/mL时可以明显抑制Huh-7细胞增殖,并随HPC质量浓度升高Huh-7细胞的相对存活率显著降低(P<0.05);Traf6蛋白过表达可以促进Huh-7细... 相似文献
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目的:探讨山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,噻唑蓝法检测不同质量浓度山楂原花青素对细胞增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达;检测每组细胞中过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、Na+K+-ATP酶活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果:山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2呈时间和质量浓度依赖性地显著抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05),促进细胞凋亡;与对照组相比,SMMC-7721细胞中SOD、CAT、GSH-Px、Na+K+-ATP酶活力降低,MDA含量升高;细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-3、Bcl-2相关X蛋白表达量和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶片段化增加,Bcl-2表达量降低。结论:山楂原花青素可通过影响抗氧化酶活力和细胞凋亡相关蛋白来抑制SMMC-7721细胞增殖,促进细胞凋亡。 相似文献