TritonX-100-硫酸铵双水相体系分离地榆根总黄酮

目的:研究利用双水相体系萃取地榆根总黄酮提取的最佳工艺条件。方法:探讨了Triton X-100质量分数,硫酸铵质量分数,黄酮粗提液质量分数、Na Cl质量分数和p H等因素对总黄酮萃取率的影响,并采用Box-Benhnken实验确定了最佳实验条件。结果:双水相萃取黄酮最佳条件为,确定双水相体系组成15%Triton X-100/15%硫酸铵,黄酮粗提液质量分数12%、Na Cl质量分数0.5%、p H6,地榆根总黄酮前萃取率达到80.02%;反萃取的最佳条件:取1.5m L黄酮萃取上相和2m L乙酸丁酯混合,反萃取率为80.03%。结论:采用双水相萃取地榆根总黄酮简单、易行,生产成本低,在中药提取中具有良好应用前景。     

双水相萃取地皮菜中藻蓝蛋白的研究

采用单因素实验和正交实验法对双水相萃取纯化地皮菜藻蓝蛋白技术进行优化。研究PEG1000/硫酸铵体系中PEG1000含量、硫酸铵含量及离子强度对地皮菜藻蓝蛋白纯化的影响,以回收率为检验指标,确定了双水相萃取纯化地皮菜藻蓝蛋白的优化条件。结果表明,通过正交实验发现3种因素对地皮菜藻蓝蛋白回收率的影响大小依次为硫酸铵>氯化钾>PEG1000;并得到最优组合：双水相体系总质量为20 g,加入藻蓝蛋白粗提液5 g时,PEG1000质量分数为14%、硫酸铵质量分数为15%、氯化钾质量分数0.5%,得到藻蓝蛋白纯度为0.302,回收率为96.43%。     

两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

双水相萃取法提取条斑紫菜R-藻红蛋白工艺

以条斑紫菜为原料,采用双水相萃取法对R-藻红蛋白进行提取,讨论不同工艺条件聚合物分子大小及质量分数、成相盐质量分数、离子强度对藻红蛋白的提取效果,通过正交试验确定藻红蛋白的最佳提取条件。结果表明当6%聚乙二醇4000、13%硫酸钠、1.5%氯化钠时,蛋白纯度可由粗液的0.187上升至0.727,是传统硫酸铵盐析法的2.25倍,说明双水相萃取法比硫酸铵盐析法更适合提取R-藻红蛋白。     

双水相体系萃取纯化紫甘蓝色素

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系萃取纯化紫甘蓝中的花青素。通过单因素实验优化了硫酸铵、PEG、粗提液的质量分数和体系的pH,通过正交实验确定各因素对花青素选择性系数的影响程度,粗提液的质量分数 pH硫酸铵的质量分数 PEG的质量分数。实验最佳提取条件为:粗提液的质量分数为12%,硫酸铵质量分数为20%,pH为3.5,PEG的质量分数为15%,花青素的选择性系数为750.26。     

响应面法优化黑胡萝卜红色素双水相萃取工艺

采用聚乙二醇（PEG）/硫酸铵双水相体系萃取纯化黑胡萝中的花青素。通过单因素实验考察了硫酸铵、PEG6000、粗提液的质量分数对花青素选择性系数和萃取率的影响,并以花青素的萃取率为响应值,结合响应面试验优化萃取工艺。结果表明,各因素对萃取率的影响程度由大到小依次为硫酸铵质量分数>粗提液质量分数>PEG6000质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为:硫酸铵质量分数为20.0%、粗提液质量分数为12.0%、PEG6000质量分数为14.0%,黑胡萝卜红色素的平均萃取率为94.17%。此萃取方法得到的黑胡萝卜红色素具有一定的抗氧化活性,对DPPH自由基清除能力的IC₅₀值为30.51 mg/L。     

双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白技术探讨

采用正交试验法对双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白技术进行优化,研究体系中PEG2000含量、酒石酸钾钠含量及p H值三个因素对钝顶螺旋藻藻蓝蛋白纯化的影响,确立了双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的优化条件:双水相体系总质量为20 g,加入C-PC粗提液5m L时,PEG2000的浓度为17%(w/w),酒石酸钾钠的浓度为21%(w/w),p H值为6.5。结果表明,双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白所得的PC纯度3.11,C-PC的回收率为93.07%。     

响应面试验优化双水相萃取大吴风草总黄酮工艺及抑菌活性测定

目的：优化大吴风草总黄酮（total flavonoids of Farfugium,TFF）双水相萃取体系并研究其抑菌活性。方法：超声波辅助C2H5OH-(NH4)2SO4双水相萃取TFF,依据Box-Behnken试验设计原理,采用三因素三水平响应面分析法,以TFF萃取率为响应值进行方差分析,获取多元二次线性回归方程;采用K-B纸片扩散法测定6 种供试菌种的抑菌圈直径,对比最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimumbactericidal concentration,MBC）确定其抑菌活性。结果：24% C2H5OH-18% (NH4)2SO4双水相萃取体系条件下TFF萃取率最高,响应面试验方差分析表明,粗提液质量分数显著影响TFF萃取率（P=0.023 9＜0.05）,而pH值和NaCl质量分数对萃取率的影响不显著;最佳双水相萃取条件为粗提液质量分数20%、pH 7.64、NaCl质量分数2.68%,萃取率模型预测最大值为96.366 7%（P=0.994）;TFF对枯草芽孢杆菌抑制作用最强,高剂量作用下抑菌率可达98.67%,MIC为1.56 mg/mL;对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用次之,对青霉和黑曲霉抑制作用最弱。结论：粗提液质量分数对萃取率影响较大,pH值和NaCl质量分数对萃取率的影响较小;TFF对6 种供试菌种均表现出较强的抑菌活性,抑菌率与TFF质量浓度呈正相关,TFF对细菌的抑制效果相对强于真菌。     

正交优化超声辅助双水相法粗提雪菊色素

研究超声辅助正丙醇(NPA)/(NH4)2SO4双水相技术对雪菊色素的粗提工艺。以(NH4)2SO4质量分数、NPA质量分数、雪菊粉末用量、超声温度、时间及p H为考察因子,以总黄酮为指标,选择差示分光光度法测定粗提物中色素含量,并以单因素试验为基础设计正交试验优化提取工艺,发现雪菊色素主要集中于上相。在最佳水平,建立20.0 g ATPS,(NH4)2SO4质量分数29%、NPA质量分数23%,雪菊粉末用量0.08 g,调pH3,温度60℃下超声提取60 min;雪菊色素得率240.1469 mg/g,RSD为4.414%。与传统提取法相比,超声辅助NPA/(NH4)2SO4双水相粗提雪菊色素时间短、温度低、效率较高,可以实现雪菊色素粗提物的提取分离,且差示分光光度法用于雪菊色素的检测可信度较高,为雪菊色素粗提工艺提供一种新途径。     

两种乙醇/盐双水相纯化蓝莓花青素的比较

为比较乙醇/硫酸铵和乙醇/磷酸二氢钠两种双水相体系对蓝莓皮渣粗提液中的花青素的纯化效果,通过单因素试验和正交试验,得到最佳的工艺条件：乙醇/硫酸铵体系中硫酸铵质量分数22.5%、乙醇质量分数24.0%、pH4.5、色素添加量15%,选择性系数β 为27.10;乙醇/磷酸二氢钠体系中磷酸二氢钠质量分数25%、乙醇质量分数29%、pH2.5、色素添加量14%,选择性系数β 为140.05,乙醇/磷酸二氢钠体系的选择性系数是乙醇/硫酸铵体系的5 倍。采用乙醇/磷酸二氢钠体系纯化的色素保留率高,且磷酸二氢钠具有溶解度低、易于回收的特点,所以该体系具有更好的工业化应用前景。     

甘薯叶绿原酸的微波协同双水相提取及其抗氧化活性

采用微波辅助乙醇-磷酸氢二钾双水相的方法对甘薯叶中绿原酸进行提取,探讨了双水相体系的磷酸氢二钾用量、乙醇体积分数、液料比、提取时间和微波功率等因素对绿原酸提取的影响,并采用正交实验法进行优化。并以对照物VC作比较,通过清除DPPH·的能力对甘薯叶绿原酸粗提液抗氧化活性进行评价。实验结果表明:以40%乙醇溶液、磷酸氢二钾质量浓度100 mg/mL组合的乙醇-磷酸氢二钾双水相萃取体系,微波提取时间75 s、液料比100∶1(V/m)、微波功率为320 W等条件下,绿原酸得率可达(3.72±0.036)%。甘薯叶绿原酸粗提液清除DPPH·的能力强于对照物VC。本实验优化甘薯叶绿原酸的提取工艺参数准确可靠、稳定、可行,所提取的甘薯叶绿原酸纯度高、抗氧化活性较好,为甘薯叶的进一步资源化开发利用提供了参考。     

芦笋中黄酮和多糖的复合提取工艺

以绿芦笋为原料,研究提取次数、乙醇体积分数、温度、料液比及提取时间对黄酮提取效果的影响,以正交试验对连续回流法提取芦笋黄酮的工艺进行探讨,采用三氯乙酸法(TCA)在醇沉前脱蛋白,然后用乙醇沉淀法从芦笋粉浸提液中分离出多糖。结果表明：芦笋中黄酮的最佳提取条件为乙醇体积分数70%、料液比1:25(g/mL)、在80℃条件下提取2h、提取2 次;芦笋粉浸提液TCA 加入量为1.0% 脱蛋白效果较好,离心后上清液加入3 倍体积的95% 乙醇沉淀,沉淀经真空干燥得到粗多糖,多糖得率为1.21%。     

盐诱导乙醇水体系萃取分离葡萄皮中原花青素

采用盐诱导乙醇水体系萃取分离葡萄皮中原花青素,利用单因素试验和正交试验研究了盐的种类和加入量、乙醇体积分数、样品加入量、温度对原花青素萃取效果的影响。并且以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力、还原Fe3+能力、羟自由基清除能力分析葡萄皮中原花青素的抗氧化活性。结果表明,乙醇体积分数为50%,料液比为1∶15(g∶mL)制备原花青素粗提液;然后向15 mL粗提液中加入3.6 g Na2HPO4,在30 ℃条件下充分混匀分相后,葡萄皮中原花青素萃取率和分配系数分别为85.51%和2.48。抗氧化实验结果表明,葡萄皮中原花青素有一定抗氧化活性,萃取后原花青素比粗提液中原花青素的抗氧化能力强。     

响应面法优化离子液体双水相提取银杏黄酮的工艺研究

通过合理的实验设计和响应面优化获得一种提取银杏黄酮的最佳工艺条件。采用离子液体[C4mim]Br与(NH_4)_2SO_4形成的双水相体系提取银杏黄酮,通过离子液体用量、盐用量、样品加入量、pH、温度和时间六个影响因素进行单因素分析,依据Design-Expert 8.0.6软件Box-Benhnken试验设计原理设计实验,以离子液体量、盐用量、体系温度为三个独立变量,以总黄酮提取效率为响应值进行方差分析并进行多项式拟合回归建立多元二次响应面回归模型,确定各影响因素对黄酮提取率的主次性为:IL量硫酸铵量体系温度,在[C4mim]Br/(NH_4)_2SO_4双水相提取中,各个因素的最佳条件组合为:离子液体质量分数为35.09%,硫酸铵质量分数为27.94%,样品加入量0.11g,体系温度50.22℃,pH为6,提取时间45min,在优化后的条件下进行实验,银杏叶黄酮的预测提取率可以达到1.65%。在优化后的提取条件下进行黄酮提取,做3次平行实验所得到的黄酮提取率为1.63%,与预测值相比较,误差为1.21%,说明此模型优化的提取条件准确可靠。     

响应面优化葡萄籽中原花青素的双水相萃取条件

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系分离纯化葡萄籽中原花青素,确定其双水相体系组成为20%PEG4000-10%(NH4)2SO4,并通过单因素实验和响应面分析实验探讨粗提液质量分数、pH和NaCl质量分数对萃取效果的影响。最佳萃取条件为:粗提液质量分数17.2%、pH4.8、NaCl质量分数0.7%。在此条件下,葡萄籽原花青素主要分布在上相,原花青素的萃取率可达96.66%。     

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe~(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。     

乙醇/硫酸铵双水相体系分离纯化葡萄籽总黄酮

利用乙醇-硫酸铵双水相体系分离纯化葡萄籽中总黄酮,首先对无水乙醇、(NH4)2SO4、黄酮粗提取液质量分数、pH值、NaCl质量分数进行单因素研究,确定双水相体系组成为23%无水乙醇-17%(NH4)2SO4。然后利用Box-Benhnken Design实验,对黄酮粗提取液质量分数、pH值、NaCl质量分数进行了优化,结果表明:黄酮粗提取液质量分数21.3%、pH 7.2、NaCl质量分数1.97%,此条件下葡萄籽总黄酮的萃取率可达到98.8%;与预测值96.437 2%接近。     

双水相体系萃取啤酒酵母中乙醇脱氢酶工艺

研究构建聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系对乙醇脱氢酶(ADH)进行提取。探讨了PEG分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度、粗酶添加量对ADH纯化倍数的影响。结果表明,在(NH_4)_2SO_4浓度为18%、PEG800浓度为22%、粗酶添加量为5%所组成的双水相体系下,ADH的纯化倍数可达3.815。     

响应面优化双水相提取黑豆皮花色苷工艺的研究

研究通过比较5种方法提取花色苷,发现乙醇/硫酸铵双水相体系提取黑豆皮中花色苷得率最高。通过单因素试验确定双水相提取的最优条件,采用响应面法优化了双水相法提取黑豆皮花色苷工艺。结果表明:双水相法提取黑豆皮花色苷最佳工艺为料液比1∶56(g/mL),硫酸铵质量分数22%,乙醇质量分数30%,pH3.0,花色苷得率为2.81 mg/g。此研究为花色苷实际生产应用提供理论依据。     

响应面法优化铁皮石斛多糖纯化工艺

目的:用响应面法优化铁皮石斛粗多糖的双水相萃取纯化工艺。方法:通过单因素实验考察了(NH₄)₂SO₄质量分数、C₂H₅OH质量分数和萃取温度对多糖萃取率和除蛋白率的影响,进而进行响应面试验,以多糖萃取率和除蛋白率为响应值进行统计分析。结果:各因素对多糖萃取率和除蛋白率的影响程度由大到小依次为萃取温度 > (NH₄)₂SO₄质量分数 > C₂H₅OH质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为: (NH₄)₂SO₄质量分数为18.80%、C₂H₅OH质量分数为25.00%、萃取温度为25.00 ℃,铁皮石斛多糖萃取率和除蛋白率分别为94.39%和91.36%。结论:此方法能够有效对铁皮石斛粗多糖进行纯化,为铁皮石斛多糖的开发利用提供理论依据。