异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理

异鼠李素是沙棘果实和美白类中草药白蒺藜、白鲜皮的主要黄酮类活性成分,具有广泛的药理活性。酪氨酸酶是人体细胞产生黑色素和果蔬褐变的关键酶。本文研究了异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理。以L-多巴为底物,测定异鼠李素对酪氨酸酶二酚酶活性的IC50、抑制类型和抑制常数。抑制类型由Lineweaver-Burk双倒数作图法来判断,并计算相应的抑制常数(KI和KIS)。实验结果显示,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力抑制效果显著,IC50为25μmol/L,是混合型可逆抑制,抑制常数KI为20.1μmol/L,KIS为108.6 mol/L。总之,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力有很好的抑制作用,是值得进一步研究的美白类候选药物和防止果蔬褐变的食品添加剂。     

对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化反应的抑制机理

本文研究了对羟基肉桂酸(HCA)对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸和催化二酚底物L-多巴的抑制能力,并利用紫外-可见光谱、荧光光谱以及分子对接技术探究了其抑制机理。结果表明对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸比催化二酚底物L-多巴具有更强的抑制作用,半抑制浓度分别为0.096 mmol/L和0.500 mmol/L;紫外-可见分析发现对羟基肉桂酸能与Cu2+发生螯合,使光谱发生明显红移。进一步通过荧光光谱分析得到,对羟基肉桂酸在酪氨酸酶溶液中并没有出现荧光淬灭反而随着对羟基肉桂酸浓度的增大荧光强度变强,说明对羟基肉桂酸被酪氨酸酶催化氧化成对应的醌类物质。利用分子对接技术揭示了对羟基肉桂酸通过氢键和疏水作用竞争性地占据了单酚和二酚底物的空间位置,并与酪氨酸酶中双核铜离子螯合,从而抑制酪氨酸酶催化L-酪氨酸和L-多巴氧化的活性机理。     

酪氨酸酶特异性卵黄抗体Fab’片段的制备及其对酶活力的抑制性能

针对导致黑色素沉淀的酪氨酸酶,制备了特异性卵黄抗体Fab’片段,研究其对酶活力的抑制效果并从动力学角度进行分析。结果表明,胃蛋白酶法制备Fab’片段的最适条件为：pH?4.0、反应比（卵黄抗体-胃蛋白酶）1∶150（mg/U）、反应时间8?h。经免疫亲和柱纯化后可得理化性质稳定、纯度大于95%的Fab’片段;该片段通过非竞争性结合抑制酪氨酸酶活力,IC50为11.16?μmol/L,结合常数为5.79×105,抑制效果相比完整的卵黄抗体分子大大提高。本研究可为卵黄抗体Fab’片段作为潜在的酶活力抑制剂在食品、化妆品和医药等行业中应用提供理论参考。     

鸡爪皮胶原多肽对蘑菇酪氨酸酶及B16黑色素瘤细胞的作用

研究分子质量低于3 kDa鸡爪皮胶原多肽对蘑菇蘑菇酪氨酸酶的抑制及对小鼠B16黑色素瘤细胞黑色素合成的影响。以L-多巴为底物,研究胶原肽对蘑菇酪氨酸酶抑制作用及抑制动力学。然后采用B16黑色素瘤细胞验证提取鸡爪皮胶原多肽的安全性及对黑色素合成影响的效果。结果表明,分子质量低于3 kDa的鸡爪皮胶原多肽抑制蘑菇酪氨酸酶的IC50值为0.570 mg/mL,抑制属于非竞争性抑制,米氏常数Km和抑制常数Ki分别为24.68μmol/mL和10.76 mg/mL。鸡爪皮胶原多肽在0²00μg/mL的质量浓度范围内对细胞的增殖活性没有影响,而且能够有效地抑制细胞黑色素的生成。     

龙眼核多酚提取物对酪氨酸酶抑制作用的研究

研究龙眼核多酚提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用。用龙眼核多酚提取物,分别以L-酪氨酸、L-多巴为底物,在475 nm处测定溶液吸光度和吸光度的变化,观察龙眼核多酚对单酚酶、双酚酶活性的影响。结果表明龙眼核多酚对酪氨酸单酚酶、二酚酶均有抑制作用,半抑制浓度IC_(50)分别为12.68、11.81 mg/m L。龙眼核多酚为酪氨酸酶可逆竞争性抑制剂,抑制常数(KI)为0.538 mg/m L。     

莲房原花青素对酪氨酸酶活力和黑色素生物合成影响的初步研究

目的：探讨莲房原花青素(LSPC)对酪氨酸酶及其黑色素生物合成的抑制机理。方法：采用酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定药物干预前后酪氨酸酶活性，求出酪氨酸酶抑制率，并作出相应Lineweaver-Burk曲线，推断其抑制类型。结果：莲房原花青素能显著抑制酪氨酸酶活性，其半抑制浓度IC50为1．15g/L。并能有效抑制形成黑色素的中间产物L-多巴色素向黑色素转化其半抑制浓度IC50为1．750g/L。结论 莲房原花青素可抑制酪氨酸酶活性，且属于酪氨酸酶竞争性抑制剂。     

南美白对虾酚氧化酶催化不同底物的生化特性研究

为揭示南美白对虾酚氧化酶(phenoloxidase,PO)催化不同底物时的生化特性,本文以L-多巴、甲基多巴、邻苯二酚为底物,分别测定南美白对虾酚氧化酶催化这三种底物时的最适温度、最适p H,酶促动力学常数K_m、V_max值、活化能。结果表明,南美白对虾PO酶催化三种底物的最适温度分别为45、40、30℃,最适p H分别为6.8、7.2、8.0,酶促动力学常数K_m分别为2.5003、5.8661、1.8429 mmol/L,V_max分别为0.0624、0.1008、0.1692ΔA/min,活化能Ea分别为15.2158、18.1981、10.4696 k J/mol;邻苯二酚与PO酶的结合能力较强,但其结合受外界温度的影响较大;而PO酶与L-多巴和甲基多巴的结合受外界温度影响较小。由此可得,底物结构越简单,越容易与PO酶活性中心结合;底物与酶的结合能力越强,酶活化底物时所需的活化能越小;在PO酶研究中,如果影响因素有温度这一条件时,不应该选择邻苯二酚作为底物。     

槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用与分子机理

本文以L-多巴为底物,采用酶抑制动力学法研究了槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用大小及类型,并采用荧光光谱技术分析其与酪氨酸酶的猝灭作用类型、结合位点、作用力类型。在此基础上,进一步利用柔性分子对接技术分析槲皮素对酪氨酸酶的抑制机理。结果表明,槲皮素对酪氨酸酶具有抑制作用,抑制常数KI为36 m M,以竞争性抑制剂形式抑制酪氨酸酶活性,是一种可逆性抑制剂;槲皮素以1:1比例通过氢键和疏水作用力结合于酪氨酸酶活性中心,且对酪氨酸酶的荧光产生静态淬灭作用,具有氢键及疏水作用力;分子对接结果验证了以上实验结论:槲皮素占据了酪氨酸酶活性中心,且与活性中心部位的Asn260和Gly62残基形成了强烈的氢键作用,同时伴有疏水作用共同稳定复合物的结构。     

红花黄酮提取物对酪氨酸酶的抑制作用

研究红花黄酮提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用。以L-酪氨酸为底物,对红花黄酮提取物抑制酪氨酸酶活性进行动力学研究。结果表明：在试验浓度范围内,红花黄酮提取物对酪氨酸酶均具有抑制性,且当红花黄酮提取物浓度为3.0mg/mL时,抑制率达到最大值78.03%;IC50值为0.834mg/mL,抑制常数KI为0.036mg/mL,KIS为0.0064mg/mL。研究表明,红花黄酮提取物对酪氨酸酶有显著的抑制作用,酶抑制类型为可逆的混合型抑制。     

庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶抑制效应

目的:通过研究庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的影响,探讨其抑制机制和动力学,为其开发和利用奠定基础.方法:运用酶动力学研究方法,探讨效应物对蘑菇酪氨酸酶的抑制效应、抑制机理和抑制类型,并测定抑制常数.结果:庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶具有可逆抑制作用,庚酸-3,4-二羟基苯酯的抑制效应显著大于3,4-二羟基苯甲酸己酯,前者IC50为305 μmol/L,而后者测不到IC50.庚酸-3,4-二羟基苯酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶具有竞争抑制作用,其抑制常数KI为171.4μmol/L,而3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力具有反竞争抑制作用,抑制常数KIS为389μmol/L.结论:庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶的作用效应截然不同,显示了酶抑制剂的构象关系.     

亚甲基蓝及其代谢产物与牛血清白蛋白相互作用的研究

采用多种光谱法研究了亚甲基蓝(MB)及其代谢产物天青B(AZB)与牛血清白蛋白(BSA)之间的共同作用机制.实验结果表明,MB和AZB对BSA的荧光猝灭均为静态猝灭.298K时MB和AZB与BSA的结合常数分别为1.71×105L//mol和8.83×104L/mol.由熵和焓推断,MB和AZB与BSA的作用力类型均主...     

双孢菇酪氨酸酶的提取纯化及其性质

以双孢菇为原料,通过硫酸铵盐溶、盐析、透析和反渗透方法提取双孢菇酪氨酸酶并进行纯化,探究其性质。结果表明,经丙酮沉淀和硫酸铵盐溶初步纯化的酪氨酸酶与粗酶相比较,酶活力(25 U/mL)提高5倍,比活力提高8.75倍;经60%饱和硫酸铵盐析、半透膜透析、反渗透进一步纯化后的酪氨酸酶与粗酶相比较,酶活力(25 U/mL)提高68.4倍,比活力提高501.2倍。通过测定双孢菇酪氨酸酶的性质发现,最适pH为6.5,最适反应温度为30℃,米氏常数为0.543 mmol/L,最大反应速度为41.5 U/min,反应速度与酶量、底物浓度的关系均符合酶促反应动力学。D-异抗坏血酸可有效抑制双孢菇酪氨酶的活性。     

纳米磁珠-电化学适配体传感技术检测牛奶中氨苄青霉素

为满足牛奶中氨苄青霉素高效检测的需要,以纳米磁珠为载体,适配体与氨苄青霉素特异性结合为基础,构建氨苄青霉素电化学适配体传感器。采用碳二亚胺交联法制备修饰有氨苄青霉素的磁珠,该磁珠可与待测样中的氨苄青霉素共同竞争反应体系中的适配体和辣根过氧化物酶,随后利用磁性玻碳电极将上述磁珠吸附于电极检测表面进行电化学测定。最佳条件下,该传感器在1.0×10－12～1.0×10－8 mol/L浓度范围内传感器响应电流与氨苄青霉素浓度呈现良好的线性关系,检测限可达1.0×10－12 mol/L。采用该方法测定市售牛奶样品中的氨苄青霉素,精密度和回收率满意。     

Studies on enzymic browning of potatoes (Solanum tuberosum). III. Kinetics of potato phenoloxidase (EC 1.14.18.1 monophenol, dihydroxyphenylalanine: oxygen-oxidoreductase).

From initial velocity studies a sequential mechanism for the reactions catalysed by phenoloxidase from potatoes is indicated. The data are in accordance with an ordered addition of oxygen and phenolic substrate to the enzyme, with oxygen being the first substrate bound at thermodynamic equilibrium. The Michaelis constants for L-tyrosine, L-dopa, and chlorogenic acid are 1.4 X 10(-3), 3.3 X 10(-4), and 1.4 X 10(-4) mol/l, respectively. The dissociation constant for the enzyme-oxygen complex is about 10(-3) mol/l. In the presence of chlorogenic acid no lag phase occurs in the course of L-tyrosine oxidation. With increasing amounts of chlorogenic acid the tyrosinase activity goes through a maximum. The significance of these findings for the in vivo action of the enzyme is discussed.     

Antibacterial activity of egg yolk antibody (IgY) against Listeria monocytogenes and preliminary evaluation of its potential for food preservation

BACKGROUND: Egg yolk antibody (IgY) is a unique type of immunoglobulin found in egg yolks, and many reports have described its ability to inhibit corresponding antigen bacteria. The objective of this study was to evaluate the antibacterial activity of IgY specific to Listeria monocytogenes, an important food pathogen to both humans and animals, as well as its potential use for food preservation. RESULTS: Specific IgY was generated by immunising Leghorn chickens with whole cells of L. monocytogenes, and its inhibitory effect on bacterial growth was tested in liquid medium and food samples. After 8 h of incubation with specific IgY, there was a significant decrease in the growth (absorbance at 600 nm) of L. monocytogenes in comparison with controls. IgY also inhibited the growth of L. monocytogenes inoculated onto fresh or smoked salmon samples. Compared with those of blanks, numbers of L. monocytogenes were reduced by more than 2 log units after 15 days of storage at 6 ± 1 °C in the presence of specific IgY. CONCLUSION: The results suggest the potential application of specific IgY as a natural antimicrobial agent for food preservation. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

3-苯基-4-氨基-5-硫酮-1,2,4-三唑对牛蒡中酪氨酸酶的抑制作用

以3-苯基-4-氨基-5-硫酮-1,2,4-三唑(APTT)为效应物,通过SPSS设计正交试验,研究不同APTT浓度、时间以及温度对牛蒡酪氨酸酶提取液的护色效果的影响,并探讨pH值对抑制剂及反应体系作用效果的影响,数据用SPSS软件处理,在25℃条件下,牛蒡与APTT比为0.5:3(g/mL)时,500μmol/L抑制剂对底物作用420s为最佳抑制反应条件,其ΔA为0.0082:pH7.0时,抑制效果最佳。APTT对牛蒡中酪氨酸酶有良好的抑制作用。     

特异性抗肠出血性大肠杆菌O157:H7内毒素鸡卵黄抗体的制备

目的:比较研究LPS和O-SP的免疫原性,制备出特异性抗内毒素(LPS)鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin,IgY),用于对E.coliO157:H7的免疫预防及检测。方法:分别用灭活E.coliO157:H7菌体、不同浓度内毒素(LPS)及O-特异性多糖链(O-SP)与不完全弗氏佐剂充分乳化后作抗原免疫临产蛋母鸡,以水稀释法从卵黄中提取抗体,阴离子交换色谱法实现对抗体的纯化,间接ELISA及双向免疫扩散检测抗体产生效价与活性。结果与结论:所制内毒素(LPS)和O-SP均有较好的免疫原性,刺激鸡体后可产生高效价抗体,灭活菌体、600μg/mlLPS、1200μg/mlLPS、2000μg/mlLPS、O-SP抗体产生效价最高可分别达1:32000、1:28000、1:32000、1:12000、1:40000。结合离子交换色谱,用0.185mol/L的离子强度可实现一步洗脱纯化抗体,制备出高纯度、高活性、特异性强的鸡卵黄免疫球蛋白IgY,为大肠杆菌O157:H7的感染防治提供了可靠的保证,在此实验基础之上可进一步探讨应用特异性IgY对大肠杆菌O157:H7的检测。