百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用

为探究百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及可能的抑制机理,检测了百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的最 小抑菌浓度（minimal inhibitory concentrations,MIC）及对其生长动力学模型的影响,并测定百里醌处理后阪崎肠 杆菌胞内ATP浓度、胞内pH值、膜电位、细胞膜完整性的变化,最后利用场发射扫描电子显微镜观察细胞形态的 改变。结果表明：百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的MIC为0.3～0.6 mg/mL;百里醌使阪崎克罗诺肠杆菌的生长迟滞期 延长,最大生长速率减小;百里醌影响了阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜的通透性,表现为：质量浓度为MIC和2×MIC 的百里醌使细胞内ATP浓度由6.52 μmol/L分别降低为0.27 μmol/L和0.17 μmol/L,胞内pH值分别由5.69降低为5.22和 4.99,细胞膜完整菌体比例分别降低至80%和22%,引起细胞膜膜电位超极化;场发射扫描电子显微镜观测表明百 里醌使阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜褶皱,菌体干瘪。综上所述,百里醌是通过影响细胞膜通透性和改变细胞形态抑制 阪崎克罗诺肠杆菌。这些结果表明百里醌有潜力作为控制阪崎克罗诺肠杆菌的天然抑菌剂应用于食品中。     

原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及机理

本文通过检测原儿茶醛（PC）对阪崎克罗诺肠杆菌的最小抑菌浓度及对生长曲线的影响,分析其抑菌效果;利用场发射扫描电镜,观测PC对阪崎克罗诺肠杆菌细胞形态的影响;利用多种荧光探针检测PC对细菌细胞膜完整性、胞内pH、胞内ATP浓度、膜电位的作用,探明其可能的抑菌机理。结果表明：PC对阪崎肠杆菌的最小抑菌浓度为0.625~1.25 mg/mL,PC使细菌生长速率和最大菌体浓度显著减小。扫描电镜结果表明PC使菌体干瘪皱缩,丧失原本的棒状杆菌形态。同时,浓度为2MIC和4MIC的PC使细胞膜完整性分别降低49.0%和50.7%,使胞内pH由6.87降低为5.67和4.47,使胞内ATP浓度由1.824 μmol/L降低为0.01 μmol/L以下,并且使细菌细胞膜出现去极化。综上所述,PC对阪崎克罗诺肠杆菌有良好的抑制效果,其可能的抑菌机理是影响细胞膜的通透性,原儿茶醛有潜力作为天然抑菌剂在婴幼儿食品或其他食品中使用。     

反式肉桂醛对阪崎克罗诺肠杆菌抑制作用的研究

为寻求安全有效的阪崎克罗诺肠杆菌(Cronobacter sakazakii,C.sakazakii)的控制方法,该文探究了植物源化合物反式肉桂醛(Trans-cinnamaldehyde,TC)对C.sakazakii的抑制作用及可能的作用机制。试验检测了TC对C.sakazakii的最小抑菌浓度(MIC)及其对C.sakazakii生长曲线的影响;利用LIVE/DEAD细菌活性检测试剂盒、激光共聚焦显微镜和场发射扫描电镜,重点分析了TC对C.sakazakii细胞膜完整性及细胞形态的影响;通过构建复原婴幼儿配方乳模型检测TC在4℃、25℃和37℃对C.sakazakii的抑制作用,充分考虑了TC的实际应用效果。结果表明:TC对C.sakazakii最小抑菌浓度为0.4~1.0 mg/m L并可有效延长C.sakazakii的生长延滞期;浓度为MIC和2MIC的TC使C.sakazakii细胞膜完整性降低至60%和46%并可使其细胞膜皱缩、菌体干瘪;浓度为0.4%(V/V)的TC可在90 min(25℃)和60 min(37℃)使复原婴幼儿配方乳中C.sakazakii的数量降低至检出限以下。本研究结果表明TC有潜力作为天然的抗菌物质应用于奶粉等食品中,从而有效地预防和减少阪崎克罗诺肠杆菌引起的相关食源性疾病。     

阪崎克罗诺肠杆菌致病性机理研究进展

阪崎克罗诺肠杆菌是一种革兰氏阴性无芽孢肠道杆菌,可导致新生儿和免疫功能不全的婴幼儿严重脑膜炎、菌血症和坏死性结肠炎,是一种非常重要的食源性条件致病菌。目前,国内外对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性及其致病机理的研究报道非常有限。本文通过阪崎克罗诺肠杆菌外膜蛋白A、脂多糖、生物膜、宿主细胞骨架、铁获得机制、海藻糖的存在、超广谱β-内酰胺酶的产生和细胞间相互作用等方面对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性机理进行综述。     

phoP调节子对阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的影响

为研究克阪崎罗诺肠杆菌中phoP基因与环境耐受力的关系,采用Red同源重组方法构建阪崎克罗诺肠杆菌的phoP基因缺失菌株,并从生长曲线、酸碱耐受、温度耐受等方面,研究phoP基因缺失前后阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的变化。结果表明：phoP基因缺失菌株的生长速度明显延缓,该基因的缺失减弱了菌对外界酸碱和高温的耐受性,并缩短了热致死时间;phoP基因缺失菌株抵御胆盐环境的能力亦有所下降,与野生型菌株相比,它在4%、8%、12%胆盐溶液环境中的存活率分别降低了19.93%（P＜0.05）、40.73%（P＜0.01）和45.84%（P＜0.01）。此外phoP基因缺失菌株对渗透压的耐受力与野生株相比也显著降低（P＜0.05）。综合以上结果表明,phoP基因有助于阪崎克罗诺肠杆菌应对外界环境刺激。     

进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株耐药性研究

目的 对进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株的耐药性进行研究.方法 采用纸片扩散法对99株克罗诺阪崎肠杆菌分离株和1株标准菌株进行药敏性试验,共选择7大类20种抗生素.结果 所测试的100株菌株对美洛西林、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素、氯霉素、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星和诺氟沙星敏感;对苯唑西林产生耐药;对头孢噻吩、氨苄西林、头孢唑啉、和四环素具有不同程度的耐药性,耐药率分别为65.0％、17.0％、3.0％和2.0％;对头孢唑啉、头孢噻吩、氨苄西林、头孢曲松和四环素中介率分别为25.0％、23.0％、6.0％、2.0％和1.0％;13株对3种抗生素耐药,4株表现多重耐药性.结论 进口乳制品中克罗诺阪崎肠杆菌分离株对所测试的大多数抗生素敏感,但对苯唑西林全部耐药,对部分抗生素出现较高的耐药和多重耐药性,因此克罗诺阪崎肠杆菌的耐药性应引起广泛的社会关注.     

阪崎克罗诺杆菌标准物质研制

目的采用冷冻干燥技术制备均匀性和稳定性符合要求的阪崎克罗诺杆菌标准物质,用于实验室内部质量控制。方法对使用菌株阪崎克罗诺杆菌(45403)的生化特征、16SrRNA序列、质谱特征进行确认。采用冷冻干燥技术制备含量为103 CFU/样品的菌球。参照CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,对20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析。将样品分别于-20、2、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定。使用20件婴儿配方乳粉作为基质对阪崎克罗诺杆菌标准物质的使用效果进行确认。结果阪崎克罗诺杆菌(45403)生化鉴定结果、16SrRNA序列的NCBIGenebank比对结果、质谱鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)。采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=1.067, P=0.442,符合标准物质的要求。于-20℃保藏170 d,于25、37℃保藏14d后,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均为103 CFU/样品。20件婴儿配方乳粉作为基质加入阪崎克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出。结论阪崎克罗诺杆菌(CMCC45403)的生化特征、16SrRNA序列分析、蛋白飞行质谱特征均符合克罗诺杆菌属的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合标准物质的要求。     

原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌毒力因子的抑制作用

探究植物源活性物质原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌泳动运动能力、生物被膜形成能力、黏附和侵入Caco-2细胞能力及9 种与菌体相关毒力基因转录的影响。结果表明,原儿茶醛对6 株阪崎克罗诺肠杆菌实验菌株的最小抑菌质量浓度（minimal inhibitory concentrations,MIC）和最小杀菌质量浓度均为2 mg/mL,对阪崎肠杆菌ATCC29544亚抑制浓度分别为1/200、1/100 MIC和1/50 MIC。亚抑制浓度的原儿茶醛能够抑制阪崎克罗诺肠杆菌在琼脂软平板中泳动运动能力;减弱菌体在12 ℃和25 ℃下不同时间段（24、48、72 h）生物被膜的形成能力;降低细菌黏附及侵入Caco-2细胞能力;下调9 种与菌体相关毒力基因的转录量。研究结果表明原儿茶醛能够抑制阪崎克罗诺肠杆菌多种毒力因子,其有潜力作为抗生素补充剂或抗毒性物质预防及控制阪崎克罗诺肠杆菌引起的相关感染。     

环境因子对阪崎克罗诺肠杆菌生物膜形成的研究

目的研究阪崎克罗诺肠杆菌生物膜的形成特性。方法采用结晶紫染色法检测生物膜形成量,考察培养时间、培养温度以及初始pH值3个环境因子对阪崎克罗诺肠杆菌生物膜形成的影响。结果结果表明培养时间、培养温度以及初始pH值对生物膜形成影响较大,且各阪崎克罗诺肠杆菌的最佳成膜条件分别为:阪崎克罗诺肠杆菌CICC21550最适温度为30℃,最适PH为7,最佳培养时间为36h;阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21562最适温度为30℃,最适pH为5,最佳培养时间为48 h;阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21544最适温度为42℃,最适pH为7,最佳培养时间为24 h;阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21563最适温度为30℃,最适pH为7,最佳培养时间为36 h。结论 4株阪崎克罗诺肠杆菌的生物被膜成膜能力由强及弱依次为阪崎克罗诺肠杆菌CICC 21550、21544、21563、21562。本研究为阪崎克罗诺肠杆菌生物膜相关研究提供理论参考。     

乳粉中克罗诺杆菌属阪崎肠杆菌能力验证样品制备及应用

目的 制备均匀性及稳定性均满足要求的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,用于组织能力验证考核.方法 通过生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定背景菌株及所使用的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)菌株.采用冷冻干燥技术制备均匀性及稳定性均满足要求且各种菌含量为104 CFU/瓶的能力验证菌球.依据CNAS-GL0...     

蓝光对阪崎肠杆菌的杀菌及机制研究

本文以食源性致病菌阪崎肠杆菌为对象,研究了医学领域抗细菌感染蓝光的杀菌作用,并首次对其杀菌机制进行了探究。结果表明,当蓝光剂量大于30 J/cm~2时,对阪崎肠杆菌具有显著杀菌作用,照射剂量达240 J/cm~2时,杀菌率超过8 log 10 CFU。亚致死剂量(0～30 J/cm~2)蓝光照射下,单线态氧(~1O_2)探针SOSG开始出现绿色荧光信号,显示细胞内1O2涌现并造成细胞外壁微小孔洞;活性氧物质(ROS)也迅速产生并逐渐增大至5 a.u.;随后脂质氧化标志物丙二醛(MDA)逐渐增加,显示细胞内产生脂质氧化。上述胞内物质变化导致细胞外膜受损,30 J/cm~2蓝光下细胞外膜渗透性增加了48.96%;此外脂肪酰基谱测定揭示,不饱和脂肪酸C18:2,C16:1和C18:1含量减少并逐渐消失,很可能是细胞外膜损伤的重要原因之一。本研究确证了蓝光下细菌胞内~1O_2、ROS及脂质氧化物的动态变化,更重要是的,揭示了细胞外膜损伤是蓝光杀菌的重要方式之一,因为细菌脂质尤其是不饱和脂肪酸是蓝光杀菌重要靶标,本研究将有助于蓝光杀菌机制的深入探究。     

反式肉桂醛与温和加热结合对复原婴幼儿牛乳中阪崎克罗诺肠杆菌的抑杀作用

研究反式肉桂醛与温和加热结合对复原婴幼儿牛乳中阪崎克罗诺肠杆菌的抑杀作用。将3 种阪崎克罗诺 肠杆菌的混合菌株（浓度约6.6（lg（CFU/mL）））接种于含有不同质量分数反式肉桂醛（0、0.1%、0.2%、0.3% 和0.4%）的复原婴幼儿牛乳样品中,将样品置于25、45、50、55 ℃培养,并在不同的时间点对样品中存活的阪崎 克罗诺肠杆菌涂布计数。为探究反式肉桂醛与温和加热结合的抑杀机制,实验利用LIVE/DEAD?细菌活性检测试 剂盒和场发射扫描电子显微镜探究细胞膜完整性及细胞形态。结果表明：0.4%的反式肉桂醛在25 ℃处理90 min、 45 ℃处理20 min、50 ℃处理10 min及55 ℃处理10 min使复原婴幼儿牛乳中阪崎克罗诺肠杆菌总数降低至检出限 以下。与反式肉桂醛及温和加热单独作用相比,反式肉桂醛结合温和加热对阪崎克罗诺肠杆菌有显著的抑杀效果 （P＜0.05）,并且随温和加热温度的升高及反式肉桂醛质量分数的增加,效果更加明显。温和加热与反式肉桂醛 结合会影响细胞膜的通透性并使细胞破碎瓦解。以上结果表明：反式肉桂醛与温和加热结合有潜力在冲调乳粉过程 中应用,从而降低阪崎克罗诺肠杆菌的感染风险。     

阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544免疫原性蛋白的鉴定

克罗诺杆菌是一种新型的食源性致病菌。迄今为止,对阪崎克罗诺杆菌的免疫原和潜在毒力因子了解很少,而免疫原性蛋白在细菌的致病性方面发挥着重要的作用。本研究利用免疫蛋白组学的方法,鉴定了阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544的免疫原性蛋白。利用固定后的阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544菌体免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;采用蔗糖密度梯度离心法,提取蛋白质,并利用双向电泳对蛋白质进行分离;以制备的多克隆抗体作为一抗进行免疫印迹分析,对具有免疫反应的蛋白点进行质谱鉴定,结果共鉴定出7种具有明显免疫反应的蛋白质。     

阪崎肠杆菌随机突变体库的构建

阪崎肠杆菌(Cronobacter(Enterobacter sakazakii))是一种以婴幼儿奶粉为主要致病源的食源性致病菌。至今人们对其功能基因所知不多,毒力因子和致病机制研究都未能找到突破口。本研究利用质粒pTnMod-okm和pBSL180构建阪崎肠杆菌随机突变体库,最终以工程菌Escherichia coli WM3064及其所含质粒pBSL180成功构建了阪崎肠杆菌随机突变体库,并通过阪崎肠杆菌显色培养技术和抗生素抗性标记(卡那霉素50μg/mL)对重组子进行筛选,建立了该菌功能基因组研究平台。在后继研究中不但可以实现对单个基因进行定位及功能研究还可找到有相似功能的一类基因,为抗性机制和致病机理研究奠定基础。     

氨苄西林胁迫下阪崎克罗诺杆菌维持连续休眠态的转录组学分析

阪崎克罗诺杆菌是奶粉中常见的食源致病菌,在压力胁迫下会进入连续休眠态。该研究通过转录组测序技术分析氨苄西林压力胁迫下形成的连续休眠态菌的基因表达变化差异,共筛选出220个显著上调基因和416个显著下调基因;并对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。结果表明,与代谢活性、运动能力（鞭毛合成）、细胞分裂相关基因表达整体显著下调;与药物外排泵、细胞形态改变相关的部分基因表达显著上调;GO富集分析结果还提示严谨反应、毒素抗毒素系统（TAS）相关基因表达显著上调,TAS可能通过调控下游mRNA和NAD+促进连续休眠态的形成。因此,在氨苄西林胁迫下严谨反应可能通过级联调节激活TAS表达,从而促进连续休眠态形成。在该状态下,阪崎克罗诺杆菌通过降低代谢活性、减弱运动能力、抑制细胞分裂,同时改变细胞形态,并增强药物外排能力,从而维持连续休眠态。研究结果为防控压力胁迫下产生的连续休眠态阪崎克罗诺杆菌奠定了理论基础。