竹豆清蛋白提取工艺优化及亚基组成分析

采用Osborne分级法提取竹豆清蛋白,设计响应面试验优化提取工艺,并分析其亚基组成。通过Design-Expert8.05b软件建立二次多项式数学模型,得最佳提取工艺:搅拌速率356r/min、提取温度44℃、提取时间1.5h、料液比1:11.20(g/mL),该条件下提取率为27.56%(n=3),与预测值27.25%无明显差异。最优条件下竹豆清蛋白纯度为(86.50±2.17)%,SDS-PAGE凝胶电泳分析发现,竹豆清蛋白含有9个亚基条带,最主要的亚基分子量分布在49.6,27.6kDa。     

小米蛋白提取、测定以及SDS-PAGE电泳

依照Osborne法对小米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白进行分离提取,通过单因素试验确定小米蛋白提取时的最佳条件,并通过SDS-PAGE对小米蛋白组分进行了亚基分析。结果表明,小米清蛋白提取的最佳温度为40℃,球蛋白提取的最佳氯化钠质量分数为2%,醇溶蛋白提取的最佳醇体积分数为80%,谷蛋白提取的最佳氢氧化钠浓度为0.05 mol/L。小米蛋白各组分SDS-PAGE凝胶电泳图谱显示,小米清蛋白的亚基主要分布在(97.4~22)ku范围内且含有二硫键;小米球蛋白的亚基主要分布在(66.2~10)ku范围内;小米醇溶蛋白的亚基条带分布广泛且含有二硫键;小米谷蛋白的亚基条带分布在(66.2~10)ku范围内。不同提取条件不仅会影响提取率,同时也会影响蛋白组分的亚基组成。     

平欧榛子蛋白分离及功能特性分析

为了充分利用平欧榛子资源,提高附加值,采用Osborne蛋白分级法及聚丙烯酰氨凝胶电泳提取并分析了其蛋白质组分和相对分子质量分布。采用碱溶酸沉法提取其分离蛋白并对分离蛋白的功能特性进行了检测和分析。结果表明:清蛋白占榛子粗蛋白的67.18%,球蛋白占17.62%,谷蛋白占6.53%,醇溶蛋白占3.17%;还原和非还原聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,榛子蛋白质各组分中均存在二硫键,非还原条件下,各组分亚基相对分子质量主要分布在35⁷1 kDa,还原条件下,各组分亚基相对分子质量主要分布在1671 kDa,还原条件下,各组分亚基相对分子质量主要分布在16⁵0 kDa且均有2条明显的亚基带;分离蛋白功能特性研究显示,pH值在等电点附近榛子蛋白的溶解性、持水性、起泡性和乳化性最低,而泡沫稳定性在等电点附近有最大值,50℃时持水性最高,而吸油性在50℃时最低为2.815 g/g。     

葡萄籽蛋白组分提取及亚基分析

以葡萄酒酿制过程中的废弃物赤霞珠葡萄籽为原料,对葡萄籽蛋白质组分的提取条件和亚基进行了相关研究。试验利用了Osborne法对葡萄籽蛋白进行分离提取,结果表明:葡萄籽清蛋白提取的最佳温度为50℃,球蛋白提取的最佳盐浓度为2%,醇溶蛋白提取的最佳醇浓度为75%,谷蛋白提取的最佳碱浓度为0.02 mol/L。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明:不同提取条件对葡萄籽蛋白的提取率有较大影响,但并不影响蛋白亚基组成。     

葛根蛋白提取工艺及其体外抗氧化性研究

以葛根为原料提取葛根蛋白,以葛根蛋白提取率为指标对4种不同提取工艺进行对比,采用Box-Behnken响应面试验设计,优化葛根蛋白提取工艺,对葛根蛋白进行体外抗氧化分析,并以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)测定葛根蛋白分子量。结果表明葛根蛋白最佳提取工艺为:提取温度45℃,提取时间2 h,料液比1∶20(g/mL),pH3.5;测得葛根蛋白提取率为11.73%;抗氧化试验表明,葛根蛋白具有良好的羟基自由基和DPPH自由基清除效果,其清除率分别为(88.62±0.73)%、(51.15±0.32)%,且清除DPPH自由基和羟基自由基的IC50分别为0.78、1.89 mg/mL,并具有一定的还原能力;SDS-PAGE试验结果可清晰看见葛根蛋白条带,分子量主要分布在14.0 kDa~43.0 kDa。     

桃仁蛋白的提取及性质研究

采用碱溶酸沉法对桃仁蛋白进行提取,最佳提取工艺是:pH为10.0,料液比1:15(g/mL),温度为45℃,提取时间为75min。蛋白的最佳提取率为72.49%。Osborne分级提取的四种蛋白中清蛋白含量最高,其相对百分含量达86.83%。分析了桃仁蛋白及分提蛋白的氨基酸组成。采用SDS-PAGE凝胶电泳分析了桃仁蛋白及分提蛋白的亚基分布。     

三七蛋白提取及热稳定性研究

研究三七蛋白的提取工艺和热稳定性。采用单因素考察和L9(33)正交试验法,利用Bradford法测定三七提取液中总蛋白含量,以总蛋白含量为指标进行考察,优选提取工艺方案;采用SDS-PAGE凝胶电泳法,探究不同加热温度和加热时间对蛋白稳定性的影响。结果表明,缓冲溶液的pH对三七蛋白提取率有显著影响。确定最佳提取工艺为:用1.5倍药材量的pH 9的缓冲溶液在4℃条件下浸提2次,每次24 h;三七蛋白热稳定性试验结果表明,蛋白稳定性随着加热温度的升高而发生变化,各种蛋白亚基的热敏感性各不相同;在70℃时,三七蛋白亚基的含量基本不随加热时间改变。优化得到的数据合理,重复性良好,可为三七蛋白的提取工艺及蛋白热稳定性研究提供试验依据。     

盐法结合两步分级沉淀法提取辣木籽蛋白质工艺优化

以脱脂辣木籽粉为原料,分析辣木籽盐提液中蛋白质的酸碱沉淀条件,在单因素试验基础上结合响应面法优化辣木籽蛋白质的提取工艺条件,通过SDS-PAGE凝胶电泳试验测定该条件下蛋白质提取物的分子量分布情况。结果表明,辣木籽蛋白质的酸沉pH为4.3、碱沉pH为11.0,盐法结合两步分级沉淀法提取辣木籽蛋白质的最佳工艺条件为:NaCl浓度0.2 mol/L、料液比1︰64 g/mL、温度30℃、水浴浸提时间90 min,在此条件下辣木籽蛋白质提取率为65.19%,蛋白质纯度达到86.57%。电泳图显示该蛋白质提取物中酸沉蛋白和碱沉蛋白的分子量在15 kDa、35 kDa、40～60 kDa都有分布,但分子量在25 kDa、35～40 kDa存在较大差异。研究结果为辣木籽蛋白质的进一步开发利用提供参考。     

响应面试验优化碱提酸沉法提取微胚乳玉米蛋白工艺及其组成分析

对碱提酸沉法提取微胚乳玉米蛋白的工艺条件进行优化,并分析其分子质量分布和氨基酸组成。以微胚乳玉米为原料,采用碱提酸沉法提取其中的蛋白质,以玉米蛋白得率为指标,采用单因素试验考察了料液比、提取pH、提取温度和提取时间的影响,采用响应面试验进一步对微胚乳玉米蛋白提取的工艺条件进行了优化。采用SDS-PAGE和氨基酸组成分析比较了最优条件下提取的微胚乳玉米蛋白与普通玉米蛋白的差异。结果表明：微胚乳玉米蛋白的最优提取工艺条件为料液比1∶15、提取pH 11.5、提取温度50℃、提取时间60 min,在此条件下微胚乳玉米蛋白得率为20.40%;微胚乳玉米蛋白与普通玉米蛋白的分子质量均小于60 kDa,但在15～20 kDa之间二者出现的条带略有不同,两种蛋白中氨基酸种类齐全,谷氨酸、亮氨酸、精氨酸、天门冬氨酸含量较高,微胚乳玉米蛋白的必需氨基酸含量占氨基酸总量的36.15%,略高于普通玉米蛋白的35.44%。该研究可为微胚乳玉米蛋白精深加工及其应用提供一定科学依据。     

响应面优化超声波-微波协同提取高粱醇溶蛋白工艺

以高粱种子为原料,采用超声波-微波协同辅助提取高粱醇溶蛋白。在单因素试验结果的基础上利用响应面法优化高粱醇溶蛋白提取工艺,建立提取工艺回归数学模型。结果表明：最佳提取工艺条件为超声时间26 min、液料比10∶1（mL/g）、微波时间260 s,在该条件下高粱醇溶蛋白的得率为6.79%,与理论得率接近,可为实际生产提供理论依据。     

白果蛋白质提取及SDS-PAGE分析

以白果为原料,采用不同的原料处理及蛋白质提取方法,运用单因素和正交设计的方法,以料液比、提取时间、提取液浓度、提取液pH 值为考察因素,研究白果蛋白质提取的最佳工艺条件,并对提取的白果蛋白进行SDS-PAGE 凝胶电泳分析。结果表明：经过冷冻干燥处理的白果采用Tris-HCl 提取法获得的白果蛋白含量较高;Tris-HCl 法提取白果蛋白的最佳工艺为pH8.5、0.15mol/L Tris-HCl 溶液、料液比1:20(g/mL)、提取时间4h,白果蛋白质的提取率达到75.01%。白果蛋白SDS-PAGE 分析表明,白果蛋白中约含13 条亚基,主要为21kD 和32kD 的两种亚基,白果蛋白的亚基主要集中在31～100kD,占亚基总数的77%。     

白芸豆清蛋白提取工艺及分子组成研究

通过单因素和正交实验优化了白芸豆清蛋白的提取工艺,并对清蛋白的等电点及分子组成进行分析。结果表明:白芸豆清蛋白的等电点为3.5;清蛋白最佳提取条件为:料液比1∶8(g/mL),提取温度55℃,提取时间3h,在此条件下的清蛋白提取率为37.93%;SDS-PAGE电泳分析表明,在10℃和20℃静置的清蛋白提取液含有5条蛋白亚基条带,在4℃静置后的清蛋白提取液只保留了35.31ku和30.52ku这两个蛋白亚基,其中亚基35.31ku为α-淀粉酶抑制剂。     

响应面法优化金钱白花蛇醇溶蛋白提取工艺

以金钱白花蛇为原料，在单因素试验基础上采用响应面法优化其醇溶蛋白提取工艺，并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效液相色谱(HPLC)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)指纹图谱分析。结果表明：最佳提取工艺条件为乙醇体积分数40%、料液比1∶17(g/mL)、提取时间4 h、提取温度40℃,此时醇溶蛋白得率为0.51%。SDS-PAGE指纹图谱分析表明金钱白花蛇醇溶蛋白分子质量主要介于26.69～88.02 kDa, 26.69～28.34 kDa和70.84～88.02 kDa处的蛋白质丰度较高，分别占蛋白质总量的55.2%和31.8%;HPLC结果表明，主要金钱白花蛇醇溶蛋白的保留时间为2.928和3.452 min; FTIR结果表明，金钱白花蛇醇溶蛋白在3 526.67、2 918.31、2 357.83、1 940.24、1 354.05、841.90、546.07和444.52 cm^-1处有特征吸收峰。试验结果可为金钱白花蛇醇溶蛋白资源的开发利用及药理活性研究提供依据。     

芡实谷蛋白提取工艺优化及其亚基组成分析

为了优化芡实谷蛋白提取工艺以及分析其亚基组成。采用碱溶酸沉法提取芡实谷蛋白,运用响应面法优化其工艺条件。通过单因素试验考察液料比、温度、时间以及碱浓度对芡实谷蛋白提取率的影响,采用Box-Behnken设计方法建立谷蛋白提取的数学模型,并通过SDS—PAGE凝胶电泳对芡实谷蛋白亚基组成进行分析。结果表明,芡实谷蛋白的最佳提取工艺条件为:液料比10.3(V/m),温度51℃,时间2.2 h,碱浓度4.5 g/L。该条件下,芡实谷蛋白提取率可达32.45%,与理论值32.55%无显著差异(P0.05),说明该回归模型具有良好的预测性,可通过该法指导提取芡实谷蛋白。同时通过对芡实谷蛋白SDS—PAGE凝胶电泳分析,发现芡实谷蛋白中15 k D亚基含量最高,占52.4%。这为构建芡实谷蛋白指纹图谱提供理论依据。     

赤小豆凝集素的分离纯化及电泳分析

以赤小豆凝集素为研究对象,采用响应面试验对其提取工艺进行优化。采用硫酸铵分级沉淀法、Q Sepharose XL阴离子交换色谱、Phenyl FF HP疏水层析色谱和Sephadex G-50凝胶过滤色谱进一步纯化,通过SDS-PAGE电泳对其蛋白质进行分析。结果表明,赤小豆凝集素的最优提取条件为:以PBS为浸提液,料液比1∶23(g/mL),pH 7.8,持续时间14h,此条件下凝集活性为(37.18±0.18)HU;纯化后的凝集素凝集活性达127HU,经鉴定目标凝集素具有两条亚基,分子量分别在55kDa和27kDa附近。     

“陇藜1号”藜麦籽实清蛋白提取工艺优化及抗氧化性测定

为研究“陇藜1号”藜麦籽实清蛋白超声辅助提取工艺条件及清蛋白提取物的特性,以“陇藜1号”藜麦新品种为原料,经脱脂风干,采用超声波辅助提取法提取清蛋白。在对不同超声功率、料液比、超声时间、水浴温度单因素试验的基础上,采用4因素3水平响应面试验对“陇藜1号”藜麦清蛋白的提取工艺条件进行了优化,并对其氨基酸组成、分子质量分布以及抗氧化性进行了测定。结果表明,“陇藜1号”在超声功率354 W、料液比1∶25.5(g∶mL)、超声时间40 min、水浴温度36.9℃的条件下,藜麦清蛋白提取率可达到64.11 mg/g。“陇藜1号”清蛋白含有17种氨基酸,半胱氨酸为其第一限制性氨基酸;分子质量测定结果表明,其亚基主要分布在15 kDa~25 kDa以及25 kDa~35 kDa。陇藜1号清蛋白对羟自由基及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基具有较强的清除效果,并呈现剂量效应,当清蛋白质量浓度为1.2 mg/mL时,清除率分别为46.34%和67.15%。该研究结果为藜麦籽实清蛋白提取及利用提供了依据。     

燕麦蛋白组分分离提取及其SDS-PAGE电泳分析

通过单因素实验对燕麦蛋白组分的分离提取工艺进行了优化,并通过SDS-PAGE电泳对燕麦蛋白组分进行亚基分析。结果表明:燕麦清蛋白提取的最佳温度为40℃,球蛋白提取最佳盐浓度为7%,醇溶蛋白提取的最佳乙醇浓度为75%,谷蛋白提取的最佳碱浓度为0.05 mol/L,蛋白质提取率为83.1%。SDS-PAGE实验结果显示:燕麦清蛋白在10~100 kD范围内均有分布,燕麦球蛋白由2个亚基组成,分子量分别在97.4~100 kD和43~66.2 kD范围内,燕麦醇溶蛋白亚基大部分集中在18.39~40.72kD之间,燕麦谷蛋白部分亚基分布在20.67~26.66kD与43.29~50.80 kD之间。     

山核桃饼粕蛋白的酶辅助碱法提取工艺优化

以冷榨山核桃饼粕为原料，采用酶辅助碱法提取山核桃蛋白。以提取率为指标，在单因素试验的基础上通过正交试验优化提取工艺，并分析其分子质量。结果表明：最优工艺为pH 10.0、碱性蛋白酶添加量1 000 U/g、料液比1∶16(g/mL)、提取时间1.5 h、提取温度60℃,在此条件下得蛋白质提取率为84.8%;采用连续控制提取液pH恒定法，提取率可提高至89.7%。山核桃饼粕蛋白亚基分子质量为10～70 kDa。     

樱桃仁蛋白的提取

对樱桃仁蛋白的提取方法进行了研究,采用碱溶酸沉法提取樱桃仁中的蛋白质并测定其等电点,使用SDS-PAGE法测定了樱桃仁蛋白的亚基组成及其分子量.结果表明,樱桃仁蛋白的等电点为3.72,优化后的提取条件是pH值为9.5,浸提时间为40min,温度为40℃,料液比1∶15,樱桃仁蛋白中含有7种亚基,其中分子量为18 694的亚基含量最高,为41.8%.     

绿豆清蛋白Osborne分级提取工艺优化及亚基组成分析

以绿豆为原料,采用Osborne分级法从绿豆中提取清蛋白,在单因素试验基础上,用L9(34)正交试验,研究提取温度、提取时间和料液比对绿豆清蛋白提取率的影响,并采用SDS-PAGE电泳分析绿豆清蛋白的亚基组成。结果表明,绿豆清蛋白的最佳提取工艺为料液比110(g/mL)、提取温度45℃、提取时间150min,该条件下绿豆清蛋白的提取率为(86.79±0.31)%,清蛋白纯度为88.33%。提取的绿豆清蛋白中有4条亚基条带,分子量分别为56.2,46.8,26.3,21.9kD。