阿里红多糖组分对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及其组分FOPS-a、FOPS-b对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。方法以小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究对象,不同浓度(50~1600μg/m L)FOPS、FOPS-a、FOPS-b干预后,用cck-8试剂盒测定细胞活力,中性红法测定其吞噬活性,NO试剂盒测定NO的含量,ELISA试剂盒测定TNF-α和IL-1β释放能力。结果 FOPS、FOPS-a、FOPS-b在一定的浓度范围内可以提高RAW264.7巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、一氧化氮以及TNF-α、IL-1β的释放量。结论 FOPS、FOPS-a、FOPS-b一定浓度范围内具有良好的增强RAW264.7巨噬细胞免疫功能的作用。     

高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性研究

研究高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性变化。采用醇沉法、超滤膜分离法得到党参口服液中活性多糖部分,以RAW264.7巨噬细胞为模型,通过对细胞增殖指数、吞噬指数、NO释放量以及细胞因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）的分泌量的测定,评价高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性。结果表明:超滤分离得到高压灭菌前以及高压灭菌后党参口服液中分子量小于30 k Da的多糖组分CPP-2和HCPP-2,其得率分别为22.41%和15.91%,纯度分别为69.03%和69.30%,且二者均能较好地促进巨噬细胞增殖（增殖指数=1.13¹.48）,因此CPP-2和HCPP-2是党参口服液中主要的活性多糖部分。与CPP-2相比,HCPP-2在25⁴00μg/m L浓度范围内作用于巨噬细胞的吞噬能力、TNF-α和IL-1β生成显著性降低（p<0.05）;在100⁴00μg/m L浓度范围内,NO和IL-6生成显著性降低（p<0.05）。说明高压灭菌会导致党参口服液中多糖的免疫活性降低。      

体外评估乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响

该研究以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG为阳性对照菌,体外评估实验室保藏的5株乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7细胞活性、吞噬活性及免疫活性分子NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-10（IL-10）分泌水平的影响,以期从中筛选出具良好免疫调节作用的菌株。结果表明,鼠李糖乳杆菌260具有更优的免疫调节作用,在特定乳杆菌活菌浓度时,能显著提高巨噬细胞RAW264.7的细胞活性、吞噬活性及NO、TNF-α和IL-10的分泌水平（P＜0.05）。最高细胞增殖率为196.62%;最低乳酸脱氢酶（LDH）释放量为554.36 U/100 mL;最高吞噬活性为136.86%;最高NO分泌量为5.70 μmol/L;最高IL-10分泌量为15.56 pg/mL,最高TNF-α分泌量为50.98 pg/mL。     

锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响

目的 研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法 以巨噬细胞RAW264.7为研究对象, 设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400 μg/mL), 用CCK-8法测定细胞增殖活性, 中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果 与空白组比较, 不同浓度(25~400 μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P<0.05或P<0.01), 干预24 h和48 h的增殖活性明显高于干预6 h和12 h的增殖活性(P<0.05); 锁阳多糖(25~ 400 μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P<0.05); 干预48 h后, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P<0.05); 与空白组和LPS组相比, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P<0.01)。结论 锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。     

5种食用菌多糖及复配多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

探究银耳多糖、茯苓多糖、香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖5种食用菌多糖及其两两复配得到的10种复配多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.将RAW264.7细胞分为正常对照组、阳性组和样品(不同浓度的银耳多糖、茯苓多糖、香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖及其10种复配多糖)处理组,通过检测巨噬细胞的细胞活力、肿瘤坏...     

铁皮石斛多糖化学修饰及其对免疫活性的影响

采用水提醇沉法结合冻融制备高纯度铁皮石斛多糖,并利用硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰方法对铁皮石斛多糖进行化学修饰,探讨不同方法修饰的铁皮石斛多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫活性影响。结果表明,铁皮石斛纯多糖(purified polysaccharides of Dendrobium officinale,DOP)的中性糖含量较高,而糖醛酸及蛋白质含量则较低,分别为87.37%、3.19%和0.51%,羧甲基化及硫酸化显著降低了铁皮石斛多糖的中性糖含量。红外分析结果显示硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰衍生物均已成功制备。高性能凝胶渗透色谱法测定铁皮石斛多糖分子质量为960 k D,硫酸化及羧甲基化修饰显著增加了其分子质量。体外实验研究发现,硫酸化和脱乙酰化修饰的铁皮石斛多糖能够增强RAW264.7巨噬细胞的免疫活性,而羧甲基化修饰则表现为显著的抑制作用,表明不是所有的官能团接枝改性都可以改善铁皮石斛多糖对免疫活性的影响。     

香乳菇多糖对Hela细胞凋亡及对RAW264.7细胞免疫活性的影响

为研究香乳菇多糖(LC-1)的抗肿瘤和免疫调控活性,将人的宫颈癌Hela细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7体外培养,分别通过CCK-8法、流式细胞术和ELISA技术检测不同浓度LC-1对Hela细胞增殖和凋亡周期的影响,对RAW264.7细胞增殖、吞噬的影响,及对RAW264.7细胞分泌NO、IL-6和TNF-α的影响。结果表明:香乳菇多糖对体外培养的Hela细胞有明显的抑制作用,且影响Hela细胞的形态及凋亡周期,当LC-1浓度为10μg/mL时,Sub峰含量可达19.4%;同时,LC-1能调控巨噬细胞的免疫活性,当LC-1浓度为10μg/mL时,巨噬细胞增值率和吞噬活性分别为67.48%和87.09%,亦能促进巨噬细胞从G0/G1期向G2期和S期转化,同时刺激巨噬细胞产生IL-6和TNF-α,且呈现出明显的剂量依赖性,但对NO生成没有明显的促进作用。综上,在体外试验中,香乳菇多糖LC-1能抑制宫颈癌Hela细胞生长,促进RAW264.7细胞增殖和吞噬活性,刺激巨噬细胞产生免疫因子。     

不同食用菌多糖复配物对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖（Tremella fuciformis polysaccharide）、茯苓多糖（Poriacocos polysaccharide）、香菇多糖（Lentinan）、猴头菇多糖（Hericium edodes polysaccharide）和竹荪多糖（Dictyophora indusiata polysaccharide）任意3种多糖复配得到的多糖复配物的免疫调节活性。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的复配物对巨噬细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法测定复配物处理后细胞培养液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）水平,以及流式细胞仪分析复配物处理后细胞吞噬能力。结果:与正常对照组相比,除了浓度为320 μg/mL的茯苓多糖、香菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物,茯苓多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物以及香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物外,在检测浓度范围内10种多糖复配物可明显促进巨噬细胞的增殖,增强吞噬能力,提高细胞因子TNF-α的分泌量。其中,10 μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和竹荪多糖的复配物促进巨噬细胞增殖的效果最佳,160 μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和香菇多糖的复配物能最好的促进TNF-α的分泌和增强RAW264.7的吞噬能力。结论:不同食用菌多糖的复配物均可调节巨噬细胞RAW264.7的免疫活性。本结果可为开发免疫调节功能的食用菌复配多糖产品提供数据参考。     

菜籽多糖WPS-1对小鼠脾淋巴细胞的免疫作用

采用尼龙毛柱法从脾淋巴细胞分离T、B淋巴细胞。通过MTT法检测,WPS-1对T淋巴细胞具有明显的增殖活性,并表现出明显的剂量-效果关系,增殖的最佳浓度为40μg/mL,并且WPS-1比APS-2作用效果更好。采用半定量RT-PCR进一步研究WPS-1对T淋巴细胞分泌的细胞因子白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-6、干扰素γ（IFN-γ）mRNA表达的影响。首先研究了各细胞因子mRNA随WPS-1作用时间的变化,WPS-1促进IL-2、IL-4、IL-6mRNA表达最佳作用时间都为24h,而促进IFN-γmRNA表达的最佳作用时间为12h。采用各细胞因子mRNA表达的最佳作用时间,进一步考察WPS-1浓度的影响,得到其对促进IL-2、IL-6、IFN-γmRNA表达的最佳浓度都为40μg/mL,而对IL-4则为20μg/mL。WPS-1可能对淋巴细胞的免疫功能具有调节作用。     

菜籽多糖WPS-1对小鼠脾淋巴细胞的免疫作用

采用尼龙毛柱法从脾淋巴细胞分离T、B淋巴细胞。通过MTT法检测,WPS-1对T淋巴细胞具有明显的增殖活性,并表现出明显的剂量-效果关系,增殖的最佳浓度为40μg/mL,并且WPS-1比APS-2作用效果更好。采用半定量RT-PCR进一步研究WPS-1对T淋巴细胞分泌的细胞因子白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-6、干扰素γ（IFN-γ）mRNA表达的影响。首先研究了各细胞因子mRNA随WPS-1作用时间的变化,WPS-1促进IL-2、IL-4、IL-6mRNA表达最佳作用时间都为24h,而促进IFN-γmRNA表达的最佳作用时间为12h。采用各细胞因子mRNA表达的最佳作用时间,进一步考察WPS-1浓度的影响,得到其对促进IL-2、IL-6、IFN-γmRNA表达的最佳浓度都为40μg/mL,而对IL-4则为20μg/mL。WPS-1可能对淋巴细胞的免疫功能具有调节作用。      

冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用（LC-MS）技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝（MTT）比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500 μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。     

两种方法提取佛手渣多糖及其对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的研究

本文以提取精油和黄酮后的佛手渣为原料,分别采用连续相变萃取(CPE)法和热水浸提法(HWE)法提取佛手多糖,在单因素实验的基础上,以佛手多糖提取率为指标,通过响应面优化得出两种方法的最佳提取工艺,并利用RAW264.7巨噬细胞模型评价佛手多糖的免疫活性,采用MTT法、中性红比色法和Griess法分别检测佛手多糖对RAW264.7细胞的生长、吞噬活性和释放NO能力的影响。结果表明,CPE法提取佛手多糖的最佳工艺条件为:温度99 ℃,时间4.5 h,流速66 L/h,提取率为16.09%±0.12%,得率为21.31%±0.13%;HWE法提取佛手多糖的最佳工艺条件为:95 ℃,时间6.0 h,液料比63 mL/g,提取率为15.43%±0.21%,得率为20.22%±0.16%;与HWE法相比,CPE法将佛手多糖提取率提高了4.28%(P<0.05),得率提高了5.39%(P<0.05),且提取时间缩短了1/4。佛手多糖在浓度低于500 μg/mL时对RAW264.7巨噬细胞无明显毒性作用,且可以促进NO的分泌以及提高吞噬活性。上述结果说明,CPE法适合佛手多糖的提取,优于传统的HWE法,且佛手多糖具有免疫类保健食品和药品开发的潜力。     

Polyphenol oxidase from bayberry (Myrica rubra Sieb. et Zucc.) and its role in anthocyanin degradation

Polyphenol oxidase (PPO) was extracted from bayberry (Myrica rubra Sieb. et Zucc. cv. Biqi), and its partial biochemical characteristics were studied. Stable and highly active PPO extracts were obtained using insoluble polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) in sodium phosphate, pH 7.0, buffer. The highest PPO activity was observed in the ripe fruits. Optimum pH and temperature for bayberry PPO activity were pH 6.0 and T = 30 °C with 0.1 M catechol as substrate. PPO showed activity using the substrates of catechol, gallic acid and protocatechuic acid, but no activity with the substrates (+)-catechin, p-coumaric acid or caffeic acid. K_m and V_max values were 313 mM and 3.26ΔOD/min/g FW, respectively, with catechol as the substrate. Bayberry PPO did not act directly on cyanidin 3-glucoside but the rate of anthocyanin degradation was stimulated by the addition of gallic acid.