蚕蛹蛋白及其水解产物中氨基酸组成分析

采用FMOC-OPA柱前衍生化-高效液相色谱法测定蚕蛹蛋白及水解液氨基酸含量,同时测定血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,研究蚕蛹蛋白水解后氨基酸组成的改变及对ACE抑制活性的影响。结果表明:水解液10kD以下组分(SN2)中疏水性氨基酸含量为49.15%,显著高于10kD以上组分(SN1)中的40.55%及蚕蛹蛋白中的45.21%,其中对ACE抑制活性影响较大的脯氨酸、芳香族氨基酸含量为7.75%和19.20%,高于SN1中的5.62%和13.59%及蚕蛹蛋白中的7.42%和15.81%,并且SN2中ACE抑制率为47.6%显著高于SN1和蚕蛹蛋白中的抑制率,表明水解后疏水性氨基酸组成的改变与ACE抑制活性的变化趋势相同,且ACE抑制活性主要集中于SN2。     

鸡肉和猪肉蛋白质酶解动力学及产物性质分析

采用体外模拟方法,对两种蛋白的消化动力学及其产物抗氧化活性进行了分析。结果显示,鸡肉蛋白更容易被蛋白酶所水解,生成更多的游离氨基酸和非蛋白氮(NPN),具有较低的K_m值和较高的V_(max)。体外抗氧化活性结果显示,经胃液、肠液消化后,两种蛋白消化产物的抗氧化活性显著增强(p≤0.01),且差异显著(p≤0.01),除脂质过氧化抑制活性外,鸡肉蛋白消化产物显示出更强的体外抗氧化活性。研究表明,不同膳食蛋白具有不同的消化动力学性质,其产物具有不同抗氧化活性。     

肉蛋白中的衍生的生物活性肽的研究进展

生物活性肽是对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化舍物.相对于食物蛋白衍生的生物活性肽而言,肉蛋白中衍生肽的信息仍然是不充分的.本文介绍了肉蛋白中衍生的ACE抑制肽、阿片样活性肽、抗氧化活性肽,并对生物活性肽研究的前景进行了概述,以利用其发展新功能肉制品.     

ACE抑制肽生物信息及核桃蛋白虚拟酶切研究

为更加明确目标产物,简化制备流程,该文对于血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的制备思路进行创新探索,针对收集到的691条ACE抑制肽的氨基酸组成、分子表面疏水性等分子特性规律进行归纳分析,得到ACE抑制肽的分子结构特征。采用虚拟酶切的方式分析核桃种子储藏蛋白的14种典型蛋白酶水解位点。该研究阐明了ACE抑制肽的分子结构特点,并探究了分子结构特性与功能活性之间的关系。     

源于鸡蛋清溶菌酶ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定

利用胃肠消化酶系水解疏水性氨基酸含量高的蛋清溶菌酶蛋白,筛选能抗胃肠消化的高活性ACE抑制肽。通过超滤、制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)、分析型RP-HPLC纯化、氨基酸组成分析及基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS),从胃肠消化水解液中分离鉴定出两种ACE抑制肽Lys-Val-Phe(KVF)和Trp-Ile-Arg(WIR),化学合成该两种三肽后,ACE抑制活性测定结果显示其IC50值分别为14μmol/L与88.5μmol/L。研究结果表明,蛋清溶菌酶蛋白来源的ACE抑制肽有望用于高血压的预防与治疗。     

三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究

本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其IC50为0.91 mg/m L);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。     

鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备及影响因素

以鸡腿肉为原料,提取并酶解肌原纤维蛋白得到鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽,采用单因素试验和正交试验研究鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备条件及温度、pH值、金属离子、模拟胃肠液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响。结果表明：鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的最优酶解条件为：在鸡肉肌原纤维蛋白质量浓度为9 g/100 mL的溶液中,加入500 U/g胰蛋白酶,40 ℃酶解3 h,所得脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率高达67.35%,对α-淀粉酶的抑制率为23.0%;温度、pH值和金属离子对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的活性有显著影响（P＜0.05）,温度为75 ℃、pH值为4、无金属离子存在时,鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率较高;模拟胃液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响不显著（P＞0.05）,模拟肠液能显著降低脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率（P＜0.05）,但已经达到预期效果。     

大鳞副泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的酶解方式研究

为开发大鳞副泥鳅蛋白血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,使用高效液相色谱法测定大鳞副泥鳅蛋白的氨基酸组成,考察泥鳅蛋白的单一酶解方式和复合酶解方式对产生ACE抑制肽的影响,并使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步证实不同酶解方式对泥鳅蛋白的水解效果。结果表明,大鳞副泥鳅蛋白富含疏水性氨基酸(39.823%)、支链氨基酸(18.102%)以及芳香族氨基酸(8.216%),是制备ACE抑制肽的良好来源。脯氨酸蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶单一酶解泥鳅蛋白,酶解产物的最高ACE抑制率分别是81.01%、64.91%和87.84%,最高水解度分别为1.48%、9.04%和28.29%。使用碱性蛋白酶与脯氨酸蛋白酶对大鳞副泥鳅蛋白进行分步酶解与同步酶解,同步酶解方式可以产生更高活性的ACE抑制肽,最高的ACE抑制率为90.14%,IC50为0.491 mg/mL。     

自然乳酸发酵猪肉蛋白质降解与血管紧张素转化酶抑制肽的分离纯化

对猪肉发酵过程中蛋白质及其降解产物进行分析。结果表明：猪肉在发酵过程中蛋白氮含量随发酵时间延长呈下降趋势,非蛋白氮和氨态氮含量随发酵时间的延长而增加,多肽氮含量呈先升高后降低趋势,在发酵20 d时达最大值（0.227%）;发酵20 d酸肉多肽具有最强的体外血管紧张素转化酶（angiotensin I-converting enzyme,ACE）抑制活性,ACE抑制率达74.35%,IC50为2.75 mg/mL;采用超滤、D101型大孔树脂、葡聚糖凝胶对发酵20 d的酸肉多肽进行分离纯化,分离得到的F3组分有较强的ACE抑制活性,IC50为0.90 mg/mL,肽含量为86.54%,氨基酸组成分析显示水解后增加最多的氨基酸是脯氨酸（7.08 倍）和酪氨酸（3.26 倍）,谷氨酸、组氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸和丙氨酸占全部肽中氨基酸总量的49.09%,构成肽的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸和支链氨基酸分别占39.35%、10.69%和13.65%;反相高效液相色谱显示F3组分主要由9 个峰组成,有待进一步的纯化。     

不同酶水解马氏珍珠贝蛋白的特性研究

本研究采用Alcalase2.4L、Protamex、Papain、PTN6.0S、Flavorzyme500MG、Neutrase和内源酶水解马氏珍珠贝肉蛋白,探讨了各种酶的酶解特性、产物的氨基酸组成及肽相对分子质量分布规律和呈味特征的差异.结果表明,PTN6.0S酶解产物的蛋白质利用率、肽得率和水解度均较高,而内源酶均最低.各酶解产物中,谷氨酸,精氨酸和天冬氨酸的含量均较高.同一氨基酸在不同酶解产物中回收率存在较大差异,色氨酸、苏氨酸、脯氨酸和天冬氨酸在马氏-爹珠贝蛋白酶解产物中主要以多肽的形式存在,各酶解产物中氨基酸的回收率和释放率较高的氨基酸与各酶的主要作用位点有很好的对应关系;各种酶均能不同程度地降解马氏珍珠贝肉蛋白和相对分子质量大于5000Da的肽断.各酶水解产物肽相对分子质量分布差异主要体现在3000以下.在各酶解产物中,Papain酶解产物风味最佳,鲜味最高,苦味和腥味最低.     

酶解与体外模拟胃肠消化对脱脂羊奶粉ACE抑制活性的影响

本研究旨在探究商业蛋白酶酶解与体外模拟胃肠消化对高消化率的脱脂羊奶粉释放ACE抑制肽的影响,以评价脱脂羊奶粉酶解必要性及所需酶解程度。采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶对脱脂后的圭山羊奶粉进行酶解反应,并对脱脂羊奶粉及其酶解物进行体外模拟胃肠消化,测定酶解液及模拟胃肠消化液的多肽含量、ACE抑制活性以及分子量分布。研究发现,羊奶粉经过体外模拟胃肠消化后,消化液的多肽含量与ACE抑制率分别达到20.81 mg/mL和62.55%;而经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性反而下降;经过复合蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液的多肽含量与ACE抑制活性小幅度提高,分别达到22.67 mg/mL和69.29%;经过中性蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性均显著提高,分别达到23.76 mg/mL和81.10%。分子量分布结果显示,经过体外模拟胃肠消化后,<1000 Da的小分子肽由酶解液中的70.77%提高到90%。综上,圭山羊奶粉经过体内胃肠消化就可以释放出较多的ACE抑制肽,而经过中性蛋白酶酶解至水解度8%后...     

体外模拟消化对大米谷蛋白结构及水解产物生物活性的影响

通过体外模拟消化,研究不同消化时间下谷蛋白结构与抗氧化和血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性的关系.利用内源荧光光谱和傅里叶变换红光谱测定谷蛋白水解过程结构变化.通过测定水解产物抗氧化能力和ACE抑制率表征酶解产物的活性,利用四极杆串联飞行时间质谱鉴定具有抗氧化...     

In vitro study on digestion of peptides in Emmental cheese: analytical evaluation and influence on angiotensin I converting enzyme inhibitory peptides

A simple in vitro protocol simulating gastrointestinal digestion of proteins and peptides to investigate the effect of digestive enzymes on the biological activity of peptides present in dairy products was developed. This protocol consisted in a 30 min incubation with pepsin followed by a 4 h incubation with trypsin or pancreatin. It was applied to an Emmental cheese water-soluble extract (WSE) and to a casein solution (as a control). Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) allowed to monitor the digestion of proteins. Reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) allowed to monitor the conversion of proteins and peptides into peptides and amino acids: it is proposed to use the mean retention time corresponding to the overall retention time distribution of molecules to assess the effect of digestive enzymes. The biological activity focused in this study was the angiotensin I converting enzyme (ACE) inhibitory activity. Digestion of Emmental WSE induced an increase of the ACE inhibition as compared to undigested WSE while a 10 kDa ultrafiltered WSE lost a part of its ACE inhibitory activity after digestion process. These results strongly suggest that digestive enzymes diminished the ACE inhibition by the peptides present in Emmental cheese WSE, while the digestion of peptides of high molecular weight would generate new ACE inhibitory peptides.     

Iron-binding properties, amino acid composition, and structure of muscle tissue peptides from in vitro digestion of different meat sources

ABSTRACT:  Background: The enhancing effect of meat on nonheme iron bioavailability in humans is thought to be due to the release of low-molecular-weight (LMW) iron-binding peptides during digestion. Objective: To better characterize the LMW iron-binding peptides from meat digests. Methods: Cooked beef, chicken, cod, lamb, and pork myofibrillar or sarcoplasmic protein extracts, casein, and egg albumin were digested in vitro with pepsin or pepsin/pancreatin. Ultrafiltrates were analyzed for N and iron and further characterized by gel filtration with added ⁵⁹Fe, amino acid analysis, and LC-MS. Results: 84% to 98% of total iron in enzymic digests was associated with soluble LMW peptides (< 10 kDa) of the myofibrillar proteins compared to only 2% to 20% in the corresponding sarcoplasmic protein digests. Pepsin digestion alone of the myobrillar proteins generated > 80% soluble LMW iron, compared to < 5% with casein and egg albumin. Iron-binding peptides from myofibrillar protein with an estimated 2 kDa molecular mass were separated by gel filtration. Peptides in this fraction were enriched in aspartic and glutamic acid residues and included potential peptide fragments of myosin. Conclusion: LMW (< 10 kDa) peptides in enzyme digests of myofibrillar proteins were the major facilitators of iron solubility. Unlike with casein, egg albumin, and most sarcoplasmic proteins, these LMW peptides were generated on pepsin digestion. One group of iron-binding peptides had a mass of approximately 2 kDa and was enriched in glutamic and aspartic acids. Such early generation of a multitude of LMW iron-binding peptides could explain the enhancing effect of muscle tissue on iron absorption.     

富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的酶解工艺优化及活性研究

以富硒辣木叶为原料提取富硒辣木叶蛋白,通过单因素实验和响应面优化富硒辣木叶蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备工艺,并对最优酶解物的ACE抑制活性、氨基酸组成和硒含量进行分析表征.结果表明,富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的最佳酶解条件为时间3 h,pH7.5、酶底比0.23％、底物浓度5.97％、温度39.2℃.该条...     

The impact of fermentation and in vitro digestion on the formation of angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity from pea and whey protein

Pea and whey protein were fermented by Lactobacillus helveticus and Saccharomyces cerevisiae in monoculture and in combination at 28 and 37 degrees C in order to release angiotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides. The fermentation products were subjected to in vitro gastrointestinal digestion, and the digests of nonfermented samples served as controls. After fermentation, the ACE inhibitory activity (%) increased by 18 to 30% for all treatments, except for the fermentations of whey protein with Saccharomyces cerevisiae at 28 degrees C, where no significant change was observed. After digestion, however, both fermented and nonfermented samples reached maximum ACE inhibitory activity. The whey digests tended to have lower (50%) inhibitory concentrations (IC50; 0.14 to 0.07 mg/ml), hence, higher ACE inhibitory activity, than the pea digests (0.23 to 0.11 mg/ml). The nonfermented whey protein digest showed the highest ACE inhibitory activity of all. For pea protein, the nonfermented sample had the lowest IC50 value. These results suggest that in vitro gastrointestinal digestion was the predominant factor controlling the formation of ACE inhibitory activity, hence, indicating its importance in the bioavailability of ACE inhibitory peptides.     

超声辅助复合酶法提取小龙虾虾壳蛋白及其性质研究

目的 为了提高副产物虾壳中蛋白的提取率,并探究虾壳蛋白的功能活性,以实现低值虾壳的高值化利用,为其进一步在食品药品领域的应用提供数据依据。方法 以小龙虾虾壳为原料,在单因素的基础上,以加酶量、复合酶比例、酶解时间和超声时间为响应变量,蛋白提取率为响应值,采用响应面Box-Behnken试验设计优化超声辅助复合酶法提取小龙虾壳蛋白的最佳工艺。进一步比较复合酶解与单酶酶解制备的多肽的抗氧化活性、抗血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）活性和氨基酸成分组成,研究酶解虾壳蛋白多肽的功能性质。结果 加酶量12000 U,复合比0.65,酶解时间2.8 h,超声时间30 min,该最优条件下的蛋白质提取率为90.41%,与预测值相对误差为1.2%。与单酶酶解液相比,复合酶解液的抗氧化能力和ACE抑制能力均显著增强,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl -2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（2,2''-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS）的EC50值分别为4.38 mg/mL和3.66 mg/mL,最大的ACE抑制率达（44.93±0.89）%,且具有竞争性抑制模式。氨基酸组分分析发现酶解制备的虾壳多肽中必需氨基酸和疏水性氨基酸含量丰富,分别占氨基酸总量的43.06%和33.52%,从而表现出抗氧化活性和抗ACE活性。结论 该研究有效提高了虾壳蛋白的提取率,并可为虾壳功能活性肽的制备及在食品中的开发应用提供理论基础。     

不同模式超声预处理对莲子蛋白酶解物及其结构的影响

超声波参数中,超声频率是影响蛋白酶解的主要因素。因此,本实验以不同模式超声频率下得到的莲子蛋白酶解物为研究对象,首先对不同模式超声进行优化,以血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率和水解度为指标,得出了不同模式下的最优频率参数：单频率超声20 kHz、双频率组合20/35 kHz、三频率超声组合20/35/50 kHz。然后采用表面疏水性、氨基酸分析及内源性荧光光谱等表征不同模式的超声预处理对莲子蛋白酶解物及结构特征影响。结果显示：随着超声频率组合增多,表面疏水性越来越大,疏水性氨基酸含量增多,主要是由于超声预处理使蛋白结构展开,使最初被掩埋在蛋白分子内部的疏水基团暴露。通过荧光光谱发现,超声预处理提高了莲子蛋白的荧光强度,且荧光强度顺序为三频＞双频＞单频;同时,莲子蛋白酶解物λmax发生轻微的红移现象。上述结果对于莲子蛋白酶解及ACE抑制肽的制备至关重要。