荧光免疫层析试纸在水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测中的应用

目的 建立一种快速检测水产品中呋喃唑酮代谢物的荧光免疫层析试纸。方法 以紫外灯下呈鲜亮红色的铕荧光微球为抗体标记物, 通过调试荧光微球-抗体复合物的工作液配方, 优化检测线和控制线, 改善试纸反应性能和荧光显色梯度, 提高试纸灵敏度。结果 结果显示, 通过肉眼判断本试纸对呋喃唑酮代谢物的最低检出限为0.25 mg/kg, 特异性良好, 在冷藏条件下其稳定性可达1年。在40批次不同品种水产品的检测中, 试纸检测结果与液相色谱-串联质谱法的检测结果符合程度为100%。结论 呋喃唑酮代谢物荧光免疫层析试纸具有快速简单、准确灵敏、成本低的优势, 其结果易于判定, 无需专门的检测仪器, 适用于大规模筛查、多环节质控和风险评估, 具有广阔的应用前景。     

时间分辨荧光免疫层析快速检测牛奶中地塞米松

目的 建立基于时间分辨荧光微球对牛奶中的地塞米松残留进行快速检测的方法,并对该方法性能进行评估。方法 使用地塞米松抗体标记时间分辨荧光微球,分别采用湿法和干法制备检测试纸条,比较两种方法的灵敏度,同时确定微球的最佳抗体标记量,并对试纸条的重复性、检测灵敏度进行评估。结果 以20μg抗体/mg微球的标记量,湿法制备的试纸条检测灵敏度更佳。该方法重复性检测中变异系数(coefficientof variation, CV)为8.2%,地塞米松溶液的检出限为0.07 ng/mL,检测牛奶中地塞米松的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)为0.24 ng/mL。结论 该方法具有测试简单、灵敏度高等特点,制备的试纸条可满足牛奶中地塞米松残留的检测要求。     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测稻谷中的镉

本研究制备了一种用于稻谷中镉检测的时间分辨荧光免疫层析定量检测卡。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗Cd-EDTA的单克隆抗体,基于竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学研究。结果表明：定量检测卡的灵敏度为0.088 ng/mL,标准曲线线性范围为0.1ng/mL～5.0 ng/mL,检出限和定量限分别为0.026 mg/kg和0.064 mg/kg,对有证标准物质的正确度在81.0%~91.7%之间,对实际样本的检测与ICP-MS检测结果一致性较高。该法重复性较好,变异系数在10%以内。结果显示,该法灵敏度高、操作简便、成本低廉,因此,非常适合基层单位大量样本的快速初步筛查。     

时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展

时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技术是新型的以镧系元素螯合物为标记物,测量其发射荧光强度的体外超微量分析技术。因TRFIA法比其他放射免疫分析法具有更高的灵敏度和准确度,近年该技术的应用越来越广泛。现从TRFIA的技术原理、反应模式、分析系统等方面的研究进展作一综述。     

时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展

时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技术是新型的以镧系元素螯合物为标记物,测量其发射荧光强度的体外超微量分析技术.因TRFIA法比其他放射免疫分析法具有更高的灵敏度和准确度,近年该技术的应用越来越广泛.现从TRFIA的技术原理、反应模式、分析系统等方面的研究进展作一综述.     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测粮谷中重金属铅的研究

本研究制备了一种基于竞争抑制原理的粮谷物中铅快速检测的时间分辨荧光免疫层析定量检测卡。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗Pb-EDTA的单克隆抗体,从而建立了免疫层析定量方法并对其进行方法学研究。结果表明:定量检测卡的灵敏度为0.61 ng/mL,标曲线性范围为1～16 ng/mL,检出限和定量限分别为8.70μg/kg和22.39μg/kg,对有证标准物质的检测回收率在93.2%～104.0%。该法精密度较好,变异系数在10%以内。结果显示,该法灵敏度高、操作简便、成本低廉,因此,非常适合基层单位,便于大量样本的快速初步筛查。     

基于时间分辨荧光快速定量检测谷物中的T-2毒素

研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的T-2毒素快速定量检测卡,并对其在谷物中的检测性能进行了研究。本研究对标记工艺、划线工艺进行了探索,通过对微球偶联时间、封闭时间等优化,确认了最佳偶联时间为30 min,最佳封闭时间为60 min;通过对NC膜的筛选、划线湿度的摸索,确认了最佳NC膜为140膜,最佳划线湿度为45%～55%。同时,对该T-2毒素快速定量检测卡进行了性能验证：该检测卡的检测限为0.480μg/kg,定量限为1.020μg/kg,添加回收定量范围为1～100μg/kg,准确度86.09%～119.57%,重复性在11.95%以内,交叉反应率<5%。具有快速定量、简单便捷、高灵敏度、高特异性、可靠性强、重复性好等优点,适合对谷物中T-2毒素进行快速定量测定。     

酶联免疫法检测猪肉中呋喃唑酮代谢物残留

通过检测猪肉中呋喃唑酮代谢物的残留以评价试剂盒的性能,采用酶联免疫法对猪肉中的呋喃唑酮代谢物残留量进行测定。结果表明:该方法的线性检测范围为0.025～2.025μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2%～100.3%,变异系数为4.7%～10.3%,与呋喃唑酮的交叉反应率为16.3%,与其他药物的交叉反应率均小于1%,且对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该法灵敏准确、重复性好、特异性高,适用于猪肉中呋喃唑酮代谢物残留的检测。     

时间分辨荧光免疫法快速测定禽蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺

目的 建立时间分辨荧光免疫分析法同时快速检测禽蛋中氟苯尼考、氟苯尼考胺的分析方法。方法 采用乙腈对禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺进行提取,并用二氯乙酸酐将提取液中的氟苯尼考胺衍生化为氟苯尼考,最后用时间分辨荧光免疫分析技术对氟苯尼考总量进行快速检测。结果 衍生试剂二氯乙酸酐体积分数为3%时,氟苯尼考胺生成氟苯尼考含量最高,副产物最少。氟苯尼考及氟苯尼考胺检出限为10μg/kg。灵敏度、特异性和相对准确度为100%,假阴性率和假阳性率均为0%。另外,采用本研究建立的时间分辨荧光免疫分析技术对市售禽蛋样品进行检测,其结果与食品安全国家标准检测结果基本一致。结论 本方法前处理简单、快速,检测成本低、结果准确可靠,适合基层日常监管,重大活动食品安全的现场快速筛查、快速检测,提高检测效率。     

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体和胶体金免疫层析试纸条的研制

本研究旨在建立一种快速检测呋喃唑酮代谢物残留的方法。试验用呋喃唑酮代谢物的衍生物（CPAOZ）与牛血清白蛋白（BSA）的偶联物免疫小鼠,利用单克隆抗体技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA和间接竞争ELISA法对阳性克隆进行筛选。单克隆细胞株诱生腹水后,经纯化即为单克隆抗体,用于胶体金标记,制备呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条。融合后得到2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其中4G3纯化后的抗体效价达到1:100万,对CPAOZ的50%抑制质量浓度（IC50）为1.7 μg/L,亲和常数Ka=1.6×109 L/mol。该抗体制备的胶体金试纸条的检测限为4 μg/L,与其他3种硝基呋喃代谢物的衍生物CPAHD、CPSEM和CPAMOZ均不存在交叉反应,对样品的检测与高效液相色谱结果一致。本研究制备了抗呋喃唑酮代谢物特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够实现呋喃唑酮代谢物残留的快速、灵敏的检测。     

时间分辨荧光免疫分析法测定莱克多巴胺

目的 用时间分辨荧光免疫分析( TRFIA)方法测定莱克多巴胺(ractopamine,RAC).方法 采用RAC与牛血清白蛋白( BSA)的偶联物(RAC-BSA)包被96孔板为固相抗原,与样品中游离的RAC共同竞争Eu3+标记的抗RAC抗体,用直接竞争法检测尿样中的RAC,并对此方法进行方法学评价.结果 分析灵敏度为0.01 ng/ml;剂量反应曲线线性相关系数绝对值|r| =0.998 5;回收率为91.6％ ～ 110.0％;与多巴酚丁胺、异舒普林、沙美特罗、非诺特罗、克伦特罗、特布他林和沙丁胺醇7种药物的交叉反应率分别小于0.8％、0.1％、0.1％、0.05％、0.01％、0.01％和0.01％;分析内相对标准偏差为2.38％ ～ 3.90％;分析间相对标准偏差为3.68％ ～ 5.43％;与进口ELISA试剂比较,检测结果相关系数r=0.928.结论 莱克多巴胺时间分辨荧光免疫分析法灵敏度比ELISA分析法更高、稳定性更好,具有良好的应用前景.     

过氧乙酸快速检测试纸条研制与应用

分别用定性滤纸、定量滤纸、微孔滤膜为试纸条载体制作了过氧乙酸快速检测试纸条,并制成标准比色卡对过氧乙酸消毒液进行含量检测。结果显示,微孔滤膜为最适宜制作过氧乙酸快速检测试纸的材质,最适烘干温度为55℃,最适烘干时间为15min,最适保存条件为4℃下密封贮藏保存21d。利用微孔滤膜制作的检测试纸条能够在30s内对消毒液中的过氧乙酸浓度进行检测,最低检出限为质量百分比0.1%。     

玉米赤霉烯酮胶体金快速检测试剂板的研制

目的 应用胶体金免疫层析技术, 研制一种玉米等谷物中玉米赤霉烯酮残留免疫胶体金快速检测试剂板。方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化, 以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上。包被后的硝酸纤维素膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条。结果 该试剂板的最低检测限为100 μg/kg, 整个检测过程仅15 min, 与其他霉菌毒素无交叉反应。结论 该试剂板可用于玉米赤霉烯酮残留快速检测。     

赭曲霉毒素A胶体金快速检测试剂条的研制

为建立一种快速检测饲料中赭曲霉毒素A的检测方法,应用胶体金免疫层析技术,研制了一种饲料中赭曲霉毒素A的免疫胶体金快速检测试剂条.将羊抗鼠IgG、特异性结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上,包被后的硝酸纤维素膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条.试剂条的最低检测限为25μg/kg,与其他霉菌毒素的交叉反应率小于1％.该试剂条可用于饲料中赭曲霉毒素A的快速检测.     

T-2毒素的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

以时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法建立快速灵敏的T-2毒素的全自动检测方法. 采用T-2-BSA包被96孔板作为固相抗原,与游离的T-2竞争有限的抗T-2单克隆抗体,以Eu3+标记的羊抗鼠抗体示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立T-2-TRFIA.同时对这一方法的稳定性、灵敏度、回收率和特异性进行考核.此方法灵敏度为0.2 μg/L,测量范围0.2～500 μg/L,批内变异为7.5%,批间变异为12.7%,平均回收率为89.6%.与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白无交叉反应.10条不同时间进行的间接竞争T-2-TRFIA的效应点均值ED80、ED50和ED20分别为2.66,6.97,29.11 μg/L.同时,用TRFIA和ELISA试剂盒同时检测T-2毒素,在ELISA和TRFIA产品的共同可测范围之内,两者的相关系数为0.926.     

三氯杀螨醇胶体金免疫快速检测试纸条研制及在茶叶中的应用

目的 建立一种基于胶体金免疫层析法的三氯杀螨醇快速检测试纸条的研制方法,并阐述其在新鲜茶叶中的应用。方法 以三氯杀螨醇为原料,用琥珀酸酐对其衍生化合成半抗原;用活化酯法将半抗原与白蛋白偶联得到人工抗原;用人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体。用上述原料制备出本研究试纸条。结果 所研制试纸条对茶叶中三氯杀螨醇检测限为0.2mg/kg,检测时间8min;可特异性地检测三氯杀螨醇的残留量,而对其他与三氯杀螨醇结构或功能相似的农药无交叉反应;准确性高;稳定性好;操作简便;检测成本低。结论 本研究提供的试纸条适宜基层实验室的大批量样本检测和田间现场快速检测,能够实现从源头上控制污染茶叶的流通上市。     

用于水产品中硝基呋喃类代谢物检测的胶体金快速检测试剂板的研制

目的 本文采用胶体金免疫层析技术,研制了一种水产品中硝基呋喃代谢物四合一免疫胶体金快速检测试剂板.方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和微孔中.包被后的NC膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条.结果 经试验,该四合一试剂板对水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)和呋喃妥因代谢物(AHD)的检出限分别为1.0、1.0、1.0、2.0μg/kg.结论 试剂板具有快速、准确、灵敏度高的特点,适用于大批量水产样品中硝基呋喃代谢物的检测.     

组胺胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在水产品检测中的应用

目的 建立基于胶体金免疫层析法的组胺快速检测试纸条的研制方法,并探究其在水产品中的应用。方法 以组胺为原料,采用琥珀酸酐对其衍生化合成半抗原;活化酯法将半抗原与白蛋白偶联得到人工抗原; 用人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体。用上述原料制备出本研究试纸条,依据国家《食品快速检测方法评价技术规范》进行评价。结果 所研制试纸条对水产品中组胺检测限为高组胺鱼类400 mg/kg,一般海水鱼类及虾200 mg/kg, 检测时间8 min。可特异性地检测组胺的残留量,而对其他与组胺结构或功能相似的生物胺无交叉反应。结论 本研究提供的试纸条,操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,可广泛应用于水产品中组胺的现场筛查和快速检测。     

Simultaneous detection of sulfamethazine and sulfaquinoxaline using a dual-label time-resolved fluorescence immunoassay

A dual-label time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) was introduced for the simultaneous quantification of sulfamethazine (SM₂) and sulfaquinoxaline (SQX). Lanthanide (Eu³⁺ and Sm³⁺)-labelled antibodies were used because lanthanides have higher stabilities and narrower emission spectra than most fluorescent dyes. The sensitivity of the TRFIA for SM₂ was 0.02 ng ml^?1, and the average recoveries and the intra- and inter-assay CVs were 77.2–107.6%, 5.4–10.5%, and 6.0–11.2%, respectively. The sensitivity of the TRFIA for SQX was 0.04 ng ml^?1; and the average recoveries and the intra- and inter-assay CVs were 74.1–102.8%, 4.6–10.9%, and 8.7–11.2%, respectively. The method was used to analyse chicken tissue and egg samples, and the results agreed well with the results of HPLC and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) analyses, with correlation coefficients (R²) of 0.9415–0.9724. The TRFIA developed is a simple, fast and sensitive method for the high-throughput simultaneous screening of SM₂ and SQX in edible animal tissues.